Anticuerpos anti-Trk-A y derivados de los mismos.

Un anticuerpo anti-TrkA que comprende:

una de las siguientes combinaciones de cadenas ligera y pesada:

SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 9, SEQ IDNO: 5 y SEQ ID NO: 7, o SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 9.

Anticuerpos anti-Trk-A y derivados de los mismos La presente invención se refiere a anticuerpos y a derivados de los mismos, especialmente a anticuerpos humanizados y derivados de los mismos.

El Factor de crecimiento nervioso (NGF) actúa a través de dos receptores de membrana. Uno es el receptor p75 de afinidad relativamente baja. El otro es un receptor de 140 kDa de alta afinidad, conocido como TrkA.

El NGF tiene un uso potencial en el tratamiento de una amplia gama de trastornos, tales como diversos trastornos neurodegenerativos (incluyendo la enfermedad de Alzheimer) , la diabetes y la lepra.

Sin embargo el NGF puede tener diversas propiedades agonísticas no deseadas. Estas incluyen un aumento en la sensibilidad al dolor. El sistema NGF-TrkA proporciona una diana potencial para las terapias contra el dolor.

Se han producido diversos anticuerpos anti-TrkA. Uno de estos anticuerpos es un anticuerpo monoclonal denominado 5C3 en el documento WO 97/21732 (McGill University) . Sin embargo, se encontró que éste era un agonista de TrkA y por lo tanto no era útil para reducir el dolor. Específicamente, cuando se une a TrkA este anticuerpo no impide la activación funcional del mismo.

Un anticuerpo monoclonal anti-TrkA conocido como MNAC13 se describe en el documento WO 00/73344 (Societa Italiana per la Ricerca Scientifica) , del cual deriva el documento EP-B-118138 (Lay Line Genomics SpA) . Se dice que este anticuerpo y diversos derivados del mismo son eficaces en la prevención de la activación funcional de TrkA en una gama de sistemas biológicos. El anticuerpo monoclonal MNAC 13 se utilizó en un ensayo de nocicepción convencional y se encontró que proporcionaba una hipoalgesia notable.

Una variante Fv de cadena sencilla (scFv) de este anticuerpo también se describe en el documento WO 00/73344 y es referida allí como ScFv de MNAC13. Ésta contiene las regiones variables de la cadena ligera y pesada del anticuerpo más grande conectadas entre sí por un polipéptido conector, que une el extremo C de la región VL con el extremo N de la región VH. Se encontró que esta variante se unía a TrkA tan eficazmente como MNAC 13. La secuencia de las regiones variables ligeras y pesadas se comparó con la de las correspondientes regiones del anticuerpo descrito en el documento WO 97/21732 y se encontró que había solo un bajo nivel de identidad de secuencia global con el mismo.

El documento WO 06/131952 (Lay Line Genomics SpA) describe usos médicos de anticuerpos anti-TrkA en el tratamiento del dolor crónico. Se proporciona evidencia de esto mediante el uso de modelos de dolor persistente, en particular, el modelo de lesión por constricción crónica (CCI) .

El documento WO 06/137106 (Lay Line Genomics SpA) describe el uso de un anticuerpo anti-TrkA capaz de inhibir la unión entre NGF y TrkA combinado con al menos un analgésico opiáceo para el tratamiento o la prevención del dolor. Se explica que esta terapia combinada permite una reducción de la dosificación de opiáceo para proporcionar el mismo nivel de alivio del dolor que una dosificación mucho más alta. Por tanto, esto puede ser útil en la reducción del nivel de efectos secundarios de los opiáceos en la terapia contra dolor, ya que las dosificaciones pueden reducirse.

El documento WO 05/061540 (Lay Line Genomics SpA) y Scuolo Intemazionale Superiore di Studi Avanzati-Sissa) describen un método para la humanización de anticuerpos en el que se utilizan los datos estructurales obtenidos de los estudios de cristalografía de llevar a cabo las primeras etapas de diseño de la humanización. Como ejemplos, el documento WO 05/061540 toma anticuerpos anti-TrkA, como los descritos en el documento WO 00/73344, y anticuerpos anti-NGF como puntos de partida y, a continuación, los rediseña utilizando el método descrito.

Si bien los anticuerpos humanizados descritos en el documento WO 05/061540 son útiles, existe una necesidad de proporcionar anticuerpos humanizados adicionales con el fin de ampliar las posibilidades de terapias eficaces.

Los autores de la presente invención han proporcionado ahora una serie de anticuerpos anti-TrkA y derivados de los mismos que no se describen en el documento WO 05/061540. Los autores de la presente invención también han proporcionado datos que indican la utilidad de tales anticuerpos. Antes de la presente invención, estos anticuerpos simplemente no eran conocidos en la técnica y no se podrían haber pronosticado los datos proporcionados.

De acuerdo con un aspecto de la presente descripción, se proporciona un anticuerpo anti-TrkA que comprende:

a) una cadena pesada variable que comprende una secuencia seleccionada de entre cualquiera de BXhVH1 (SEC ID NO: 1) , BXhVH2 (SEC ID NO: 2) , BXhVH3 (SEC ID NO: 3) , BXhVH4 (SEC ID NO: 4) , BXhVH5 (SEQ ID NO 5) , o HuVHWOv (SEC ID NO: 6) , como se muestra en la Figura 1a; o entre variantes de cualquiera de dichas secuencias;

y/o b) una cadena ligera variable que comprende una secuencia seleccionada de entre cualquiera de BXhVL1 (SEC ID NO: 7) , BXhVL2 (SEC ID NO: 8) , BXhVL3 (SEC ID NO: 9) , BXhVL4 (SEC ID NO: 10) , BXhVL5 (SEQ ID NO 11) , BXhVL6 (SEC ID NO: 12) , BXhVL7 (SEC ID NO: 13) o BXhVL8 (SEC ID NO: 14) ; como se muestra en la Figura 1b, o entre variantes de cualquiera de dichas secuencias.

También se proporciona un derivado de dicho anticuerpo, en donde el derivado es capaz de unirse a trkA.

Más preferiblemente, el anticuerpo comprende tanto una cadena pesada variable como se describe en el apartado a) anterior como una cadena ligera variable como se describe en el apartado b) , es decir, comprende una de las siguientes combinaciones de cadenas ligeras y pesadas:

BXhVH1VL1, BXhVH1VL2, BXhVH1VL3, BXhVH1VL4, BXhVH1VL5, BXhVH1VL6, BXhVH1VL7, BXhVH1VL8,

BXhVH2VL1, BXhVH2VL2, BXhVH2VL3, BXhVH2VL4, BXhVH2VL5, BXhVH2VL6, BXhVH2VL7, BXhVH2VL8,

BXhVH3VL1, BXhVH3VL2, BXhVH3VL3, BXhVH3VL4, BXhVH3VL5, BXhVH3VL6, BXhVH3VL7, BXhVH3VL8,

BXhVH4VL1, BXhVH4VL2, BXhVH4VL3, BXhVH4VL4, BXhVH4VL5, BXhVH4VL6, BXhVH4VL7, BXhVH4VL8,

BXhVH5VL1, BXhVH5VL2, BXhVH5VL3, BXhVH5VL4, BXhVH5VL5, BXhVH5VL6, BXhVH5VL7, BXhVH5VL8,

o HuVHWOv/HuVLWO.

Deseablemente, el derivado del anticuerpo tiene al menos una región CDR seleccionada entre las regiones subrayadas en las Figuras 1a y 1b para cada secuencia, o entre variantes de las mismas que tiene no más de dos cambios de aminoácidos (preferiblemente no más de un cambio de aminoácido) por región subrayada.

Más deseablemente, tiene una pluralidad de regiones CDR seleccionadas entre las regiones subrayadas en las figuras 1a y 1b para cada secuencia, o entre variantes de las mismo que tiene no más de dos cambios de aminoácidos (preferiblemente no más de un cambio de aminoácido) por región subrayada.

Por lo tanto, puede comprender una, dos, tres, cuatro, cinco o seis de tales regiones CDR (opcionalmente combinadas con una o más de otros regiones CDR diferentes) .

Preferiblemente puede comprender al menos la tercera región CDR de la cadena pesada, más preferiblemente al menos la tercera región CDR de las cadenas pesada y ligera.

Muy deseablemente, sin embargo, tiene seis regiones CDR correspondientes a las seis regiones CDR subrayadas en las Figuras 1a y 1b para cada secuencia o correspondientes a las variantes de las mismas que tienen no más de dos cambios de aminoácidos por región subrayada.

De hecho, en la mayoría de los casos, se prefiere que se hayan realizado pocos o ningún cambio en las secuencias CDR. De este modo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, o incluso las seis regiones CDR pueden tener las mismas secuencias de aminoácidos que se muestran en las Figuras 1a y 1b.

Volviendo ahora a las regiones marco, se prefiere que el derivado tenga al menos una región de marco seleccionada entre las secuencias no subrayadas mostradas en las Figuras 1a y 1b o entre variantes de las mismas que tienen al menos 75% de identidad de secuencia de aminoácidos con la misma (por ejemplo, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% o al menos 98% de identidad de secuencia con la misma) .

El grado de identidad de secuencia de aminoácidos se puede determinar mediante alineamientos simples de las secuencias sin espacio alguno y determinando las diferencias de secuencia.

Las secuencias se pueden alinear de acuerdo con esquema de numeración de Kabat y a continuación se pueden determinar en consecuencia las identidades de secuencia (Véase Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda MD, 1987 y 1991) . Este esquema de numeración se comenta en el documento WO 05/061540 (también se puede hacer referencia a Chothia y Lesk,... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-TrkA que comprende:

una de las siguientes combinaciones de cadenas ligera y pesada: SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 7, o SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 9.

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, que se une con mayor afinidad a TrkA que a Trk B.

3. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que es capaz de bloquear o reducir la unión de NGF al receptor TrkA.

4. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que es capaz de bloquear o reducir una o más actividades biológicas que de otra manera serían inducidas por la unión de NGF al receptor TrkA.

5. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que comprende una región constante no derivada de roedor.

6. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que comprende una región constante humana o una región constante con al menos 75% de identidad de secuencia con una región constante humana.

7. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que comprende una región constante de IgG humana o una región constante con al menos 75% de identidad de secuencia con la misma.

8. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que comprende una región constante que tiene uno o más cambios de aminoácido con respecto a una región constante de inmunoglobulina humana que evita/reduce una o más de las siguientes,

a) activación del complemento b) lisis mediada por el complemento c) activación de células T d) unión a un receptor de Fc.

9. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que proporciona un valor de DO450/630 nm de más de 0, 1 en un análisis de unión ELISA de TrkA-IgG.

10. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que proporciona un aumento de la tinción FACS de células TF1 en un análisis de unión celular basado en FACS de la expresión de TrkA en la superficie en células TF1 que es un aumento de más de 1, 0 veces.

11. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que tiene un valor de KD de menos de 4, 18 x 10-8 M con respecto a la unión de TrkA-IgG en un análisis de resonancia de plasmón superficial en donde TrkA-IgG se inmoviliza sobre un chip sensor CM-5.

12. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que tiene al menos 90% de humanización cuando se mide sobre las regiones marco totales de la región variable de al menos una cadena.

13. Un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que tiene al menos 95% de humanización cuando se mide sobre las regiones marco totales de la región variable de al menos una cadena.

14. Un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 13 que tiene al menos el porcentaje de humanización proporcionado en cualquiera de dichas reivindicaciones con respecto a las regiones marco de las cadenas tanto pesada como ligera.

15. Un derivado de un anticuerpo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior en donde el derivado es

a) un fragmento de dicho anticuerpo, en donde el fragmento está en forma de cadenas ScFv, es un fragmento Fv o Fab, b) un multímero de fragmentos tales como minicuerpos, bis (o más) -ScFv, diacuerpos, triacuerpos,

tetracuerpos, multímeros Fab, c) un producto de fusión de dicho anticuerpo fragmento o multímero de fragmentos y otro radical.

16. Un derivado de acuerdo con la reivindicación 15 en donde el derivado es un producto de fusión y otro radical es un agente seleccionado entre los siguientes: un agente de diagnóstico, un agente terapéutico, un agente de marcaje, un agente que aumenta la vida media y/o reduce la inmunogenicidad de dicho derivado en un anfitrión humano.

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17. Un derivado del mismo de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el agente terapéutico es una citotoxina.

18. Un anticuerpo o derivado del mismo de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que está PEGilado.

19. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquier reivindicación anterior en forma inmovilizada.

20. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para su uso en medicina.

21. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para su uso en el tratamiento del dolor.

22. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para su uso en el tratamiento del dolor crónico.

23. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para su uso en el tratamiento del dolor agudo.

24. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para su uso en el tratamiento del dolor asociado con una o más de las siguientes: pancreatitis, cálculos renales, endometriosis, EII, enfermedad de Crohn, adherencias post-quirúrgicas, piedras de la vesícula biliar, dolor de cabeza, dismenorrea, dolor musculoesquelético, esguinces, dolor visceral, quistes en los ovarios, prostatitis, cistitis, cistitis intersticial, dolor postoperatorio, migraña, neuralgia del trigémino, dolor por quemaduras y/o heridas, dolor asociado con trauma, dolor neuropático, dolor asociado con enfermedades musculoesqueléticas, artritis reumatoide, osteoartritis, espondilitis anquilosante, patologías periarticulares, dolor oncológico, dolor de metástasis óseas, infección por VIH.

25. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para su uso en el tratamiento del cáncer, un trastorno neuronal (p .ej. un trastorno neurodegenerativo) , la enfermedad de Alzheimer, la diabetes mellitus, un trastorno viral, un trastorno mediado por VIH, lepra, o un trastorno inflamatorio.

26. Un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 25, considerando que el tratamiento implica ADCC.

27. Una combinación de un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y un analgésico, para la administración simultánea, secuencial o concertada en medicina.

28. Una combinación de un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y NGF, para la administración simultánea, secuencial o concertada en medicina.

29. Una combinación de un anticuerpo o derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y un anticuerpo anti-TrkA adicional o derivado del mismo, para la administración simultánea, secuencial o concertada en medicina.

30. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o derivado del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

31. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y otro agente farmacéuticamente activo.

32. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 31, en donde dicho otro agente es uno o más de: a) un agente analgésico b) otro anticuerpo anti-TrkA o derivado del mismo

c) NGF d) un agente contra el cáncer.

33. Un anticuerpo o derivado del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para su uso en la diagnosis o prognosis.

34. Un anticuerpo o derivado del mismo para su uso en la diagnosis o prognosis de cualquiera de las enfermedades

o trastornos especificados en las reivindicaciones 21 a 25.

35. Un ácido nucleico que codifica un anticuerpo o derivado del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19.

36. Un vector que comprende un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 35.

37. Un mamífero transgénico no humano que expresa un anticuerpo o derivado del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, o que puede ser inducido para proporcionar tal expresión.

38. Un kit de componentes que comprende un anticuerpo o derivado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 junto con instrucciones dirigidas al uso del mismo por un sujeto como analgésico.

Figura 14 (cont.)