Anticuerpos anti-PSGL-1.

Un anticuerpo que se une específicamente a P-selectina glicoproteína ligando-1 humano sin interferir en la uniónentre P-selectina glicoproteína ligando-1 y P-selectina,

en donde el anticuerpo, tras la unión a P-selectinaglicoproteína ligando-5 1 sobre una célula T activada induce la muerte de la célula T activada, y en donde elanticuerpo comprende una primera cadena de inmunoglobulina, que es una cadena ligera, que contiene SEQ IDNOs: 1-3, y una segunda cadena, que es una cadena pesada, que contiene SEQ ID NOs: 4-6.

Anticuerpos anti-PSGL-1

ANTECEDENTES

Células T excesivamente agresivas conducen a menudo a respuestas inmunes indeseadas, las cuales, a su vez, provocan diversos trastornos, p.ej., enfermedades autoinmunes, rechazos de trasplantes, enfermedades alérgicas y cánceres derivados de células T. Por lo tanto, el control de las células T agresivas es crítico para tratar este tipo de trastornos. La actividad de estas células puede ser contenida mediante inmunosupresión o mediante inducción de la tolerancia inmunológica. Una solución alternativa es la inducción de la apoptosis, que se piensa que está implicada en la eliminación de células indeseadas, incluidas células T excesivamente agresivas. Véase, p. ej., Kabelitz et al. (1993) Immunol Today 14, 338-340; y Raff (1992) Nature 356, 397-399.

El documento US2003049252 describe que compuestos que se unen a P-selectina glicoproteína ligando-1 (PSGL1 – siglas en inglés) sobre la superficie de células T o células asesinas naturales (NK – siglas en inglés) se pueden utilizar para inducir el agotamiento de células T o células NK y/o para inducir la apoptosis de células T o células NK. Moore KL et al. J Cell Biol, febrero de 1995 ; 128 (4) :661-71 describe que P-selectina glicoproteína ligando-1 media en la rodadura de neutrófilos humanos sobre P-selectina. Li F et al, J Biol Chem, marzo de 1996 15;

271 (11) :6342-8 describe la visualización de P-selectina glicoproteína ligando-1 como una molécula ampliamente extendida y la representación en mapa de epítopos de la proteína para anticuerpos monoclonales. Yanmg J et al, Thromb Haemost. enero de 1999; 81 (1) :1-7 describe la biología de P-selectina glicoproteína ligando-1: su papel como un contrarreceptor de selectina en interacciones leucocitos-endotelio y leucocitos-plaquetas.

SUMARIO

Esta invención se refiere a anticuerpos y sus derivados que inducen la apoptosis tras la unión a P-selectina glicoproteína ligando-1 (PSGL-1) sobre células T activadas.

En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que se une específicamente a P-selectina glicoproteína ligando-1 humano sin interferir en la unión entre P-selectina glicoproteína ligando-1 y P-selectina, en donde el anticuerpo, tras la unión a P-selectina glicoproteína ligando-1 sobre una célula T activada induce la muerte de la célula T activada, y en donde el anticuerpo comprende una primera cadena de inmunoglobulina, que es una cadena ligera, que contiene SEQ ID NOs: 1-3, y una segunda cadena, que es una cadena pesada, que contiene SEQ ID NOs: 4-6.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo que se une específicamente a P-selectina glicoproteína ligando-1 humano sin interferir en la unión entre P-selectina glicoproteína ligando-1 y P-selectina, en donde el anticuerpo, tras la unión a P-selectina glicoproteína ligando-1 sobre una célula T activada induce la muerte de la célula T activada, y en donde el anticuerpo se une específicamente a los residuos aminoácidos 115126 de P-selectina glicoproteína ligando-1 humano.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo cualquiera de la invención en la fabricación de un medicamento para modular una respuesta inmune mediada por células T en un 45 sujeto que tiene o que está en riesgo de tener una afección relacionada con una respuesta inmune excesiva mediada por células, en donde la afección es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad alérgica o un cáncer de células T.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo cualquiera de la 50 invención en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un rechazo de trasplante alogeneico o xenogeneico.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición que comprende un anticuerpo de acuerdo con la invención.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo de la invención para uso en modular una respuesta inmune mediada por células T en un sujeto que tiene o que está en riesgo de tener una afección relacionada con una respuesta inmune excesiva mediada por células, en donde la afección es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad alérgica o un cáncer de células T.

2 En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo de la invención para uso en el tratamiento o prevención de un rechazo de trasplante alogeneico o xenogeneico.

En un aspecto, la descripción recoge una cadena de inmunoglobulina que tiene tres secuencias que (i) contienen,

respectivamente, RSSQSIVHNDGNTYFE, KVSNRFS y FQGSYVPLT (SEQ ID Nos. 1-3) ; (ii) contienen, respectivamente, SFGMH, YINGGSSTIFYANAVKG y YASYGGGAMDY (SEQ ID NOs: 4-6) ; (iii) contienen, respectivamente, RASSTVNSTYLH, GSSNLAS y QQYSGYPLT (SEQ ID NOs: 7-9) ; (iv) contienen, respectivamente, AYYIH, VNPNTGGTSYNPKFKG y SGSPYYRYDD (SEQ ID NOs: 10-12) ; (v) contienen, respectivamente, RSSQSIVNSNGNTYLE, KVSNRFS y FQGSHVPWT (SEQ ID NOs: 13-15) ; o (vi) contienen,

respectivamente, TNAMNWVRQAPGKGLE, TYYADSVKD y GGSYWYFDV (SEQ ID NOs: 16-18) .

Cada uno de los seis conjuntos de secuencias recién descritos corresponde a las tres regiones determinantes de la complementariedad (CDRs – siglas en inglés) de cadena ligera o pesada de un anticuerpo que se une a PSGL-1, tales como las de los tres anticuerpos 15A7, 43B6 y 9F9 descritos en los ejemplos que figuran más adelante, En lo que sigue se muestran las regiones variables (V) de cadena ligera y cadena pesada de estos tres anticuerpos (SEQ ID NOs: 19-26, las CDRs están subrayadas y destacadas) :

SEQ ID NO: 20 (región V de la cadena pesada de 15A7 de ratón) :

SEQ ID NO: 21 (región V de la cadena ligera de 43B6 de ratón) :

SEQ ID NO: 22 (región V de la cadena pesada de 43B6 de ratón) :

SEQ ID NO: 23 (región V de la cadena ligera de 9F9 de ratón) :

SEQ ID NO: 24 (región V de la cadena pesada de 9F9 de ratón) :

Dado que la especificidad de unión a antígeno de un anticuerpo viene determinada por sus CDRs de cadenas ligera y pesada, las CDRs anteriores se pueden utilizar para generar derivados de anticuerpos que conserven la especificidad de unión al antígeno. Ejemplos de derivados de anticuerpos incluyen anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y sus equivalentes funcionales. Se muestran a continuación la región V de la cadena ligera (SEQ ID NO: 25) y la región V de la cadena pesada (SEQ ID NO: 26) de un anticuerpo 15A7 humanizado, que incluye las SEQ ID NOs: 1-3 y las SEQ ID NOs: 4-6, respectivamente:

SEQ ID NO: 25 (región V de la cadena ligera de 15A7 humanizado) :

SEQ ID NO: 26 (región V de la cadena pesada de 15A7 humanizado) :

La descripción también recoge un ácido nucleico aislado que tiene una secuencia que codifica una de las cadenas de inmunoglobulina arriba descritas. El término “anticuerpo” o la expresión “cadena de inmunoglobulina” se refiere 20 a un polipéptido aislado, es decir, un polipéptido que ha sido sustancialmente separado de otras proteínas, lípidos y ácidos nucleicos con los que está asociado de forma natural. El polipéptido puede constituir al menos el 50, 70 ó 95% en peso seco de la preparación purificada. Un “ácido nucleico aislado” se refiere a un ácido nucleico, cuya estructura no es idéntica a la de cualquier ácido nucleico que se produzca de forma natural o a la de cualquier fragmento de un ácido nucleico genómico que se produzca de forma natural. Por lo tanto, la expresión cubre, por 25 ejemplo, (a) un ADN que tiene la secuencia de parte de una molécula de ADN genómico que se produce de forma natural, pero que no está flanqueada por las dos secuencias codificadoras que flanquean esa parte de la molécula en el genoma del organismo en el que se produce de forma natural; (b) un ácido nucleico incorporado en un vector

o en el ADN genómico de un procariota o eucariota de una manera tal que la molécula resultante no es idéntica a cualquier vector a ADN genómico que se produce de forma natural; (c) una molécula separada tal como un ADNc,

un fragmento genómico, un fragmento producido por reacción en cadena de la polimerasa (PCR – siglas en inglés) , o un fragmento de restricción; y (d) una secuencia de nucleótidos recombinantes que es parte de un gen híbrido, es decir, un gen que codifica una proteína de fusión. El ácido nucleico de esta descripción se puede utilizar para expresar un polipéptido de esta descripción. Para este fin, se puede enlazar operativamente el ácido nucleico a secuencias reguladoras adecuadas para generar... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une específicamente a P-selectina glicoproteína ligando-1 humano sin interferir en la unión entre P-selectina glicoproteína ligando-1 y P-selectina, en donde el anticuerpo, tras la unión a P-selectina glicoproteína ligando-1 sobre una célula T activada induce la muerte de la célula T activada, y en donde el anticuerpo comprende una primera cadena de inmunoglobulina, que es una cadena ligera, que contiene SEQ ID NOs: 1-3, y una segunda cadena, que es una cadena pesada, que contiene SEQ ID NOs: 4-6.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde la cadena ligera y la cadena pesada contienen, respectivamente, 10 SEQ ID NOs: 19 y 20, o 25 y 26.

3. El anticuerpo de la reivindicación 2, en donde la cadena ligera y la cadena pesada contienen, respectivamente, SEQ ID NOs: 25 y 26.

4. Un anticuerpo que se une específicamente a P-selectina glicoproteína ligando-1 humano sin interferir en la unión entre P-selectina glicoproteína ligando-1 y P-selectina, en donde el anticuerpo, tras la unión a P-selectina glicoproteína ligando-1 sobre una célula T activada induce la muerte de la célula T activada, y en donde el anticuerpo se une específicamente a los residuos aminoácido.

11. 126 de P-selectina glicoproteína ligando-1 humano.

5. El anticuerpo de la reivindicación 4, en donde el anticuerpo se une específicamente a residuos aminoácidos 117

123.

6. El anticuerpo de la reivindicación 5, en donde el anticuerpo se une específicamente a residuos aminoácidos 11925 121.

7. El anticuerpo de la reivindicación 4, en donde el anticuerpo incluye una cadena ligera y una cadena pesada que contienen, respectivamente, SEQ ID NOs: 1-3 y SEQ ID NOs: 4-6.

8. Uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la fabricación de un medicamento para modular una respuesta inmune mediada por células T en un sujeto que tiene o que está en riesgo de tener una afección relacionada con una respuesta inmune excesiva mediada por células, en donde la afección es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad alérgica o un cáncer de células T.

9. Uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un rechazo de trasplante alogeneico o xenogeneico.

10. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el anticuerpo es un 40 anticuerpo quimérico.

11. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

12. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el anticuerpo comprende una región constante de la cadena pesada de IgG1 humana.

13. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el anticuerpo comprende una región constante de la cadena pesada de IgG2 humana. 50

14. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el anticuerpo comprende una región constante de la cadena pesada de IgG4 humana.

15. Un anticuerpo aislado de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende (i) una cadena

ligera que comprende una región variable que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 enlazada a una región constante de la cadena ligera kappa humana, y (ii) una cadena pesada que comprende una región variable que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 26 enlazada a una región constante de la cadena pesada de IgG4 humana.

16. Una composición que comprende un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 ó 21

a 15.

17. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 ó 10 a 15, para uso en modular una respuesta inmune mediada por células T en un sujeto que tiene o que está en riesgo de tener una afección relacionada con una respuesta inmune excesiva mediada por células, en donde la afección es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad alérgica o un cáncer de células T.

18. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 ó 10 a 15, para uso en tratar o prevenir un rechazo de trasplante alogeneico o xenogeneico. 10