Anticuerpos anti-OX40L.

Anticuerpo de unión a OX40L humano, caracterizado porque el anticuerpo comprende CDR de entre las CDR de cadena ligera (VL) de secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1 y las CDR variables de cadena pesada (VH) de SEC ID nº 2.

Anticuerpos anti-OX40L

La presente invención se refiere de manera general a anticuerpos anti-OX40L y, en particular, a anticuerpos anti-OX40L que no se unen al factor del complemento C1q, y a composiciones farmacéuticas y usos de los mismos. Preferentemente, dichos anticuerpos son anticuerpos humanos o humanizados.

OX40L humano (gp34, SwissProt nº P23510) se expresa sobre células B activadas y células dendríticas tras la unión de CD40/CD40L, y sobre células endoteliales en tejidos inflamatorios (Revisión: Weinberg A.D., Trends Immunol. 23:102-109, 2002) . Se ha aislado en primer lugar a partir de células leucémicas humanas infectadas por VLTH-1 (inmortalización de estas células T mediante la generación de un bucle autocrino con OX40) . Se menciona OX40L y los anticuerpos contra el mismo en, por ejemplo, los documentos WO nº 95/12673, nº 95/21915, nº 99/15200; Baum

P.R. et al., EMBO J. 13:3992-4001, 1994; Imura A. et al., Blood 89:2951-2958, 1997; Imura A. et al., J. Exp. Med. 183:2185-2195, 1996; Kjaergaard J. et al., J. Immunol. 167:6669-6677, 2001; Lane P., J. Exp. Med. 191:201-206, 2000; Mallett S. y Barclay A.N., Immunol. Today 12:220-223, 1991; Mallett S., et al., EMBO J. 9:1063-1068, 1990; Ndhlovu L.C. et al., J. Immunol. 167:2991-2999, 2001; Ohshima Y. et al., J. Immunol. 159:3838-3848, 1997; Rogers

P.R. et al., Immunity 15:445-455, 2001; Stüber E. y Strober W., J. Exp. Med. 183:979-989, 1996; Stüber E. et al., Gastroenterology 115:1205-1215, 1998; Takahashi Y. et al., J. Virol. 75:6748-6757, 2001; Takasawa N. et al., Jpn. J. Cancer Res. 92:377-382, 2001; Taylor L. y Schwarz H., J. Immunol. Meth. 255:67-72, 2001; Weinberg A.D. et al., Nature Medicine 2:183-189, 1996; Weinberg A.D. et al., Semin. lmmunol. 10:471-480, 1998; Weinberg A.D., Trends Immunol. 23:102-109, 2002; Wu T. et al. , Transplant. Proc. 33:217-218, 2001; Higgins L.M. et al. , J. Immunol. 162:486-493, 1999; y Yoshioka T. et al., Eur. J. Immunol. 30:2815-2823, 2000. OX40L humano es el ligando para OX40 humano (CD134) que se expresa transitoriamente sobre las células T CD4+ activadas. La unión de OX40 a su ligando conduce a una señal de coestimulación para la activación de las células T. Se ha descrito que la interacción OX40/OX40L crea una señal bidireccional (Matsumura Y. et al., J. Immunol. 163:3007-3011, 1999; Kotani A. et al., Immunol. Lett. 84:1-7, 2002) . Además, la interacción OX40/OX40L media en la adhesión de las células T activadas a las células endoteliales en tejidos inflamatorios. Debido a que OX40L sólo se expresa transitoriamente sobre células B activadas, CD y endoteliales, los anticuerpos de OX40L deberían bloquear selectivamente la activación de las células T y la adhesión de las células endoteliales durante una respuesta inflamatoria, pero sin afectar a las células T periféricas no activadas. Yoshioka A. et al. (Eur. J. Immunol. 30:2815-2823, 2000) han demostrado el potencial terapéutico de un mAb anti-mOX40L neutralizante en un modelo de ratón de la artritis reumatoide. La administración del mismo mejoró drásticamente la severidad de la enfermedad. Este anticuerpo mostró actividades similares en otros modelos de enfermedad relacionados, por ejemplo, en la enfermedad inflamatoria de la piel, la enfermedad autoinmunológica experimental (EAE) , la EICH, la enfermedad intestinal inflamatoria murina (Yoshioka A. et al., Eur.

J. Immunol. 30:2815-2823, 1999; Salek-Ardakani S. et al., J. Exp. Med. 198:315-324, 2003; Burgess J.K. et al., J. Allergy Clin. Immunol. 113:683-689, 2004; Hoshino A. et al., Eur. J. Immunol. 33:861-869, 2003; Arestides R.S. et al., Eur. J. Immunol. 32:2874-2880, 2002; Nohara C. et al., J. Immunol. 166:2108-2115, 2001; Weinberg A.D. et al., J. Immunol. 162:1818-1826, 1999; Higgins L.M. et al., J. Immunol. 162:486-493, 1999; Humphreys I.R. et al., J. Exp. Med. 198:1237-1242, 2003; Akiba H. et al., J. Exp. Med. 191:375-380, 2000; Ishii N. et al., Eur. J. Immunol. 33:23722381, 2003; Blazar B.R. et al., Blood 101:3741-3748, 2003; Tsukada N. et al., Blood 95:2434-2439, 2000; Akiba H. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 251:131-136, 1998.

Los anticuerpos contra OX40L han sido investigados por sus efectos antiinflamatorios en diversos modelos de enfermedad (Sugamura K. et al., Nat. Rev. Immunol. 4:420-431, 2004) .

Tanaka Y. et al, Int. J. Cancer 36:549-555, 1985; Tozawa H. et al., Int. J. Cancer 41:231-238, 1988; y Miura S. et al., Mol. Cell. Biol. 11:1313-1325, 1991, describen anticuerpos monoclonales de ratón denominados TARM-34 y TAG34 que reaccionan con antígenos de superficie de líneas de linfocitos humanos que portan un virus de tipo I de la leucemia de células T humanas (VLTH1) . El anticuerpo TAG-34 se encuentra disponible comercialmente de MBL International Corporation. TAG-34 se une también a OX40L.

Descripción resumida de la invención La invención se refiere a un anticuerpo, preferentemente a un anticuerpo monoclonal, caracterizado porque dicho anticuerpo se une a OX40L, contiene una parte Fc de origen humano y no se une al factor del complemento humano C1q y/o al receptor de Fcy humano sobre las células NK.

La invención se refiere además a un anticuerpo, preferentemente a un anticuerpo monoclonal, caracterizado porque dicho anticuerpo contiene una parte Fc de origen humano, se une a OX40L y a OX40L desnaturalizado (en una transferencia western) a una concentración de anticuerpos de 100 ng. Dicho anticuerpo se une al mismo epítopo del polipéptido OX40L que el epítopo al que se une el anticuerpo monoclonal LC.001. Dichos anticuerpos son, por ejemplo, LC.001, LC.033 y LC.060. Estos anticuerpos son preferentemente de tipo IgG1 humano (tipo salvaje) o no

se unen al factor del complemento C1q humano y/o al receptor de Fcy humano sobre las células NK.

Se da a conocer además en la presente memoria un anticuerpo que se une a OX40L caracterizado porque comprende una cadena ligera variable y una cadena pesada variable, caracterizado porque la cadena pesada variable comprende CDR1, CDR2 y CDR3, caracterizado porque CDR3 se selecciona de entre SEC ID nº 33-38. Resulta especialmente preferente que CDR1 se seleccione de entre SEC ID nº 21 y 25, CDR2 se selecciona de entre SEC ID nº 26 y 32, y CDR3 se selecciona de entre SEC ID nº 33 y 38.

Se da a conocer en la presente memoria un anticuerpo caracterizado porque comprende una cadena ligera variable y una cadena pesada variable, caracterizado porque la cadena ligera variable comprende CDR1, CDR2 y CDR3, caracterizado porque CDR3 se selecciona de entre SEC ID nº 51-57. Resulta especialmente preferente que CDR1 se seleccione de entre SEC ID nº 39 y 44, CDR2 se selecciona de entre SEC ID nº 45 y 50, y CDR3 se selecciona de entre SEC ID nº 51 y 57.

Se da a conocer en la presente memoria un anticuerpo caracterizado porque comprende una cadena pesada variable y una cadena ligera variable, caracterizado porque la cadena pesada variable comprende CDR1, CDR2 y CDR3, caracterizado porque CDR3 de la cadena pesada se selecciona de entre SEC ID nº 33 y 38, y CDR3 de la cadena ligera se selecciona de entre SEC ID nº 51 y 57. Resulta especialmente preferente que la cadena pesada variable comprenda CDR1 seleccionado de entre SEC ID nº 21 y 25, CDR2 se selecciona de entre SEC ID nº 26 y 32, y CDR3 se selecciona de entre SEC ID nº 33 y 38, y la cadena ligera variable comprende CDR1 seleccionado de entre SEC ID nº 39 y 44, CDR2 se selecciona de entre SEC ID nº 45 y 50, y CDR3 se selecciona de entre SEC ID nº 51 y 57.

Todas las CDR se seleccionan independientemente unas de otras, aunque de manera que por norma el anticuerpo se una a OX40L. Por lo tanto, las CDR de las cadenas ligeras y pesadas del mismo anticuerpo LC pueden combinarse o las CDR de cadena ligera de LC.001 con las CDR de cadena pesada de LC.001, LC.059 ó LC.063. Las CDR en cada cadena se encuentran separadas por aminoácidos de marco.

El anticuerpo según la invención preferentemente está caracterizado porque el anticuerpo comprende CDR seleccionadas independientemente de entre el grupo que consiste de:

a) las CDR variables de cadena ligera (VL) de secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1 y las CDR variables de cadena pesada (VH) de SEC ID nº 2, o un fragmento de unión a OX40L de las mismas.

El anticuerpo según la invención preferentemente está caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una región variable seleccionada independientemente de entre el grupo que consiste de:

a) el dominio variable de cadena ligera (VL) definido por la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1 y el dominio variable de cadena pesada (VH) definido por SEC ID nº 2,

o un fragmento de unión a OX40L de los mismos El anticuerpo según la invención preferentemente está caracterizado porque la región... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo de unión a OX40L humano, caracterizado porque el anticuerpo comprende CDR de entre las CDR de cadena ligera (VL) de secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1 y las CDR variables de cadena pesada (VH) de SEC ID nº 2.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende el dominio variable de cadena ligera definido por la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1 y el dominio variable de cadena pesada definido por SEC ID nº 2.

3. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque el anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera kappa según se define en SEC ID nº 13 ó la región constante de cadena ligera de SEC ID nº 61.

4. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el anticuerpo comprende una región constante pasada según se define en SEC ID nº 14 ó en SEC ID nº 58, nº 59 ó nº 60.

5. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la región constante de cadena ligera kappa del mismo se define en SEC ID nº 61 y la región constante pesada del mismo se define en SEC ID nº 58, nº 59 ó nº 60.

6. Anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado porque es producido por la línea celular humAb<hOX40L>LC.001.

7. Anticuerpo que es un fragmento Fab, F (ab') 2 o un fragmento de cadena sencilla de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y que se une a OX40L humano.

8. Molécula de ácidos nucleicos codificante de una molécula de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

9. Vector que comprende la molécula de ácidos nucleicos según la reivindicación 8.

10. Célula huésped que comprende el vector según la reivindicación 9.

11. Método para la preparación de una molécula de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende cultivar la célula huésped según la reivindicación 10 bajo condiciones que permiten la síntesis de dicha molécula de anticuerpo y recuperar dicha molécula de anticuerpo a partir de dicho cultivo.

12. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y por lo menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

13. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la utilización en la profilaxis y tratamiento de trastornos inflamatorios.

14. Utilización de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de un medicamento destinado a la profilaxis y tratamiento de trastornos inflamatorios.