Anticuerpos antagonistas monoclonales humanos específicos de LIGHT humano.

Un anticuerpo aislado que se une específicamente a un epítopo de hLIGHT en donde el anticuerpo comprende

A.

(a) una VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC; y (b)una VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC, oB.

(a) una CDR1 de VH, CDR2 de VH y CDR3 de VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nºde Acceso PTA-7819 de la ATTC; y

(b) una CDR1 de VL, CDR2 de VL y CDR3 de VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nºde Acceso PTA-7819 de la ATTC.

Anticuerpos antagonistas monoclonales humanos específicos de LIGHT humano

Introducción En el presente documento se proporcionan anticuerpos que se unen de forma inmunoespecífica a un polipéptido LIGHT humano (hLIGHT) (de tipo linfotoxina, presenta expresión inducible y compite con glicoproteína D de HSV para HVEM, un receptor expresado por linfocitos T) , un fragmento de polipéptido de hLIGHT u otro epítopo de hLIGHT. En algunas realizaciones los anticuerpos son anticuerpos totalmente humanos, preferentemente anticuerpos monoclonales totalmente humanos, que se unen de forma inmunoespecífica a un polipéptido de hLIGHT, fragmento de polipéptido de hLIGHT o epítopo de hLIGHT. Además se proporcionan ácidos nucleicos aislados que codifican anticuerpos que se unen de forma inmunoespecífica a un polipéptido de un polipéptido de hLIGHT, fragmento de polipéptido de hLIGHT, o epítopo de hLIGHT. La invención también proporciona vectores y

células huésped que comprenden ácidos nucleicos que codifican anticuerpos que se unen de forma inmunoespecífica a un polipéptido de hLIGHT, fragmento de polipéptido de hLIGHT, o epítopo de hLIGHT, así como procedimientos para preparar anticuerpos que se unen de forma inmunoespecífica a un polipéptido de hLIGHT, fragmento de polipéptido de hLIGHT, o epítopo de hLIGHT. Además se proporcionan procedimientos para usar los anticuerpos anti-hLIGHT que se proporcionan en el presente documento para inhibir la actividad biológica de hLIGHT in vivo y/o para tratar o dirigir de otro modo una enfermedad mediada por hLIGHT en un paciente.

Antecedentes

LIGHT, (de tipo linfotoxina, presenta una expresión inducible y compite con la glicoproteína D de HSV para HVEM,

un receptor expresado por linfocitos T) es una diana potencial de citoquinas que se ha implicado en los procedimientos de enfermedades autoinmunes inflamatorias crónicas (Mauri y col. 1998 Immunity 8 21-30) . Como un miembro de la superfamilia de ligandos del TNF (TNFSF) , LIGHT también se conoce como TNFSF14 o CD258. LIGHT se expresa en la superficie de linfocitos T después de la activación de una forma estrictamente regulada apareciendo a las 4 horas, tiene un pico a las 12-24 horas y desapareciendo hacia las 48 horas (Castellano y col. 2002 J Biol Chem 277 42841-51) . Sin embargo, LIGHT también está presente en niveles detectables de forma constitutiva sobre la superficie de células dendríticas inmaduras (Tamada y col. 2000 J Immunol 164 4105-10) y sobre linfocitos T y linfocitos citolíticos naturales (NK) del intestino (Cohavy y col. 2005 J Immunol 174 646-53) . LIGHT media sus efectos biológicos mediante la unión a tres subreceptores de la superfamilia del TNF que incluyen el receptor de linfotoxina β (LTβR) (Crowe y col. 1994 Science 264 707-10, Browning y col. 1997 J Immunol 159

3288-98) , el mediador de la entrada del virus del herpes (HVEM) (Montgomer y y col. 1996 Cell 87 (3) 427-36) , y el receptor señuelo 3 (DcR3) (Yu y col. 1999 J Biol Chem 274 13733-6) .

Ratones tratados con una proteína de fusión LTβR-Fc inhibitoria redujeron los síntomas de inflamación en el modelo de transferencia de linfocitos T de tipo CD4+CD45RBhigh de la colitis, una patología mediada por linfocitos T de tipo CD4+ (Mackay y col. 1998 Gastroenterology 115 1464-75) . También se ha mostrado que la expresión específica constitutiva de linfocitos T transgénicos de LIGHT se dirige a la inflamación grave del intestino con patología de tipo autoinmune que se asemeja a la enfermedad inflamatoria del intestino humano (IBD) (Wang y col. 2005 J Immunol 174 8173-82, Shaikh y col. 2001 J Immunol 167 6330-7, Wang y col. 2001 J Immunol 167 5099-105, Wang y col. 2004 J Clin Invest 113 826-35) . Los linfocitos que expresan LIGHT pueden inducir síntomas de tipo IBD (por

ejemplo, perfiles de citoquinas de la enfermedad de Crohn humana, úlceras de fisuración, ileítis, y aumentos en el IFN-γ y TNF del colon) cuando células de los nódulos linfáticos mesentéricos a partir de animales transgénicos con LIGHT se transfieren a RAG-/- (Wang y col. 2005 J Immunol 174 8173-82) . En la enfermedad humana, se observaron aumentos de la expresión de LIGHT en pacientes con enfermedad de Crohn activa (Cohavy y col, 2005 J Immunol 174 646-53, Wang y col. 2005 J Immunol 174 8173-82, Wang y col. 2004 J Clin Invest 113 826-35, Cohavy y col. 2004 J Immunol 173 251-8) . También se ha demostrado que LIGHT está elevada en linfocitos T del intestino de pacientes con IBD (Cohavy y col. 2004 J Immunol 173 251-8) . La evidencia genética también apoya un papel para LIGHT en la IBD (Granger y col. 2001 J Immunol 167 5122-8) ; (Rioux y col. 2000 Am J Hum Genet 66 1863-70; Low y col. 2004 Inflamm Bowel Dis 10 173-81; Bonen y Cho 2003 Gastroenterology 124 521-36) .

Además, se ha mostrado que la señalización de CCL20-CCR6 está implicada en la IBD, y LIGHT induce la secreción de CCL20 desde la línea celular epitelial HT29.14s del colon humano. En estudios en seres humanos, se ha encontrado que las células epiteliales del colon son una fuente principal de CCL20 en pacientes con IBD y la expresión de CCL20 está aumentada en pacientes con IBD humana (Kwon y col. 2002 Gut 51 818-26; (Kaser y col. 2004 J Clin Immunol 24 74-85) .

hLIGHT también se ha implicado en la enfermedad de injerto frente a huésped (GVHD) . Por ejemplo, se ha mostrado que LIGHT proporciona potente actividad coestimulatoria para linfocitos T, potenciado la proliferación y la producción de citoquinas Thl independientes de la vía de B7-CD28 (véase, por ejemplo, Tamada y col. 2000 J. Immunol. 164 4105-4110) . El bloqueo de la coestimulación de LIGHT-HVEM mediante anticuerpos monoclonales anti-HVEM, 65 HVEM-Ig, o la proteína de fusión LTβR inhibe respuestas alogénicas de los linfocitos T (véase, por ejemplo, Tamada y col. 2000 J. Immunol. 164 4105-4110, Harrop y col. 19998 J. Immunol. 161 1786) . Además, la administración in vivo de anticuerpos de LTβR-Ig o de anti-LIGHT de murino inhibe respuestas de linfocitos T citotóxicos anti-huésped (CTL) en un modelo murino de GVHD aguda (Tamada y col. 2000 Nat. Med. 6 283-289) .

Aunque observaciones tales como las que se han analizado anteriormente indican un papel para LIGHT en trastornos inflamatorios, tales como IBD o GVHD, hasta la fecha no se han producido anticuerpos humanos de LIGHT anti-humano, ni se ha mostrado que ningún anticuerpo anti-hLIGHT humano o anticuerpos anti-hLIGHT monoclonales sean antagonistas de la actividad biológica de hLIGHT. El documento WO 03/089 575 analiza anticuerpos anti-LIGHT teóricamente, pero en realidad no se producen anticuerpos ni se someten a ensayo. Como tal, sigue existiendo una necesidad para la identificación de terapias, tales como terapias anti-LIGHT, útiles para el tratamiento de trastornos inflamatorios en seres humanos. La mención o el análisis de una referencia en el presente documento no se interpretará como una admisión de que ésto es técnica anterior a la presente invención.

Sumario La invención se expone en las reivindicaciones.

En particular, en el presente documento se proporciona:

[1] Un anticuerpo aislado que se une específicamente a un epítopo de hLIGHT en donde el anticuerpo comprende

A. (a) una VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC; y

(b) un VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC, o B. un anticuerpo aislado que se une específicamente a un epítopo de hLIGHT, en donde el anticuerpo 25 comprende:

(a) una CDR1 de VH, CDR2 de VH y CDR3 de VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC ; y

(b) una CDR1 de VL, CDR2 de VL y CDR3 de VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC .

[2] El anticuerpo de [1], en donde el anticuerpo aislado es un anticuerpo producido por el hibridoma con Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC .

[3] El anticuerpo de [1], en dondeel anticuerpo comprende:

(a) una región variable de cadena pesada (VH) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 4; y

(b) una región variable de cadena ligera (VL) que tiene la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de las SEC ID Nº: 90, 91 o 92.

[4] El anticuerpo de [1], en donde el anticuerpo comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende:

(1) una CDR1 de VH de SEC ID Nº: 20; (2) una CDR2 de VH de SEC ID Nº: 21; y (3) una CDR3 de VH de SEC ID Nº: 22; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende un VL seleccionado entre el grupo que consiste en:

(1) una CDR1 de VL de SEC... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado que se une específicamente a un epítopo de hLIGHT en donde el anticuerpo comprende A. (a) una VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC; y (b) una VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC, o B.

(a) una CDR1 de VH, CDR2 de VH y CDR3 de VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC; y

(b) una CDR1 de VL, CDR2 de VL y CDR3 de VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo aislado es un anticuerpo producido por el hibridoma de Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende:

(a) una región variable de cadena pesada (VH) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 4; y

(b) una región variable de cadena ligera (VL) que tiene la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de las SEC ID Nº: 90, 91 o 92.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende:

(1) una CDR1 de VH de SEC ID Nº: 20;

(2) una CDR2 de VH de SEC ID Nº: 21; y

(3) una CDR3 de VH de SEC ID Nº: 22;

y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende un VL seleccionado entre el grupo que consiste en:

(1) una CDR1 de VL de SEC ID Nº: 93, una CDR2 de VL de SEC ID Nº: 96 y una CDR3 de VL de SEC ID Nº: 99;

(2) una CDR1 de VL de SEC ID Nº: 94, una CDR2 de VL de SEC ID Nº: 97 y una CDR3 de VL de SEC ID Nº: 100; y

(3) una CDR1 de VL de SEC ID Nº: 95, una CDR2 de VL de SEC ID Nº: 98 y una CDR3 de VL de SEC ID Nº:

101.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el anticuerpo comprende un dominio constante de IgG.

6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el anticuerpo comprende un dominio constante de IgG1 o de IgG4.

7. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el anticuerpo es un anticuerpo totalmente humano, o en donde el anticuerpo es un anticuerpo quimérico o humanizado, o en donde el anticuerpo es un fragmento de unión a antígenos, o en donde el anticuerpo es un fragmento de Fab, fragmento de F (ab’) 2, Fv de una sola cadena (sFv) , fragmento divalente, fragmento trivalente o minicuerpo.

8. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo recombinante.

9. Una composición que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Una molécula aislada de ácido nucleico

(i) que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica (a) una secuencia de aminoácidos de VH de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado con Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC; y (b) una secuencia de aminoácidos de VL de un anticuerpo producido por un hibridoma depositado con Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC, o

(ii) que comprende la secuencia de ácidos nucleicos que codifica (a) una CDR1 de VH, CDR2 de VH y CDR3 de

VH de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC; y (b) una CDR1 de VL, CDR2 de VL y CDR3 de VL de un anticuerpo producido por un hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA7819 de la ATTC, o (iii) que comprende o que consiste en una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un anticuerpo producido por un hibridoma depositado con Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC,

(iv) que comprende (a) una secuencia que se describe en la SEC ID Nº: 44; y (b) una secuencia que se describe en una cualquiera de las SEC ID Nº: 104, 105 o 106.

11. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 10.

12. Una célula huésped que comprende el vector de la reivindicación 11.

13. Un método para producir el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, método que comprende el 15 cultivo de la célula huésped de la reivindicación 12 en condiciones que promueven la producción del anticuerpo.

14. Un hibridoma que produce un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

15. El hibridoma de la reivindicación 14, hibridoma que tiene Nº de Acceso PTA-7819 de la ATTC. 20

16. Un kit que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición de la reivindicación 9.

Nº medio de linfocitos T humanos por bazo