Activación de linfocitos T específicos contra el VHC.
Método in vitro para activar linfocitos T que reconocen un epítopo de un polipéptido de VHC,
que comprende la etapa de:
poner en contacto los linfocitos T con una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5 de un virus de la hepatitis C (VHC) y un polipéptido de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1, mediante el cual una población de linfocitos T activados reconoce un epítopo de los polipéptidos NS3, NS4, NS5a o NS5b.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2000/029594.
Solicitante: NOVARTIS VACCINES AND DIAGNOSTICS, INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 4560 HORTON STREET EMERYVILLE, CA 94608 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: SELBY, MARK, HOUGHTON, MICHAEL, PALIARD,XAVIER.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K31/70 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › Hidratos de carbono; Azúcares; Sus derivados (sorbitol A61K 31/047).
- A61K39/29 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Virus de la hepatitis.
- A61K39/295 A61K 39/00 […] › Antígenos virales polivalentes (virus de la viruela o de la varicela A61K 39/285 ); Mezclas de antígenos virales y bacterianos.
- C07K14/18 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Togaviridae, p. ej. Flavivirus, virus de la peste, virus de la fiebre amarilla, virus de la hepatitis C, virus de la encefalitis japonesa.
- C12N15/51 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Virus de la hepatitis.
- C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
PDF original: ES-2411096_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Activación de linfocitos T específicos contra el VHC.
CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN
La invención se refiere a la activación de linfocitos T específicos contra el virus de la hepatitis C (VHC) . Más concretamente, la invención se refiere al uso de múltiples polipéptidos de VHC, ya sea en solitario o como fusiones, para estimular respuestas inmunitarias mediadas por células, tales como para activar los linfocitos T específicos contra el VHC.
Antecedentes de la invención La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) es un problema de salud importante, estando aproximadamente un 1% de la población mundial infectada con el virus. Más de un 75% de los individuos con infección aguda evolucionan finalmente hasta un estado de portador crónico que puede derivar en cirrosis, insuficiencia hepática y carcinoma hepatocelular. Véase Alter et al. (1992) N. Engl. J. Med. 327:1899-1905; Resnick and Koff. (1993) Arch. Intem. Med. 153:1672-1677; Seeff (1995) Gastrointest. Dis. 6:20-27; Tong et al. (1995) N. Engl. J. Med. 332:1463-1466.
A pesar de los grandes avances en el desarrollo de fármacos contra determinados virus como el VIH, el control de la infección aguda y crónica por VHC ha tenido un éxito limitado (Hoofnagle y di Bisceglie (1997) N. Engl J. Med. 336:347-356) . En concreto, se cree que es importante la generación de una respuesta fuerte de los linfocitos T citotóxicos (LTC) para el control y la erradicación de las infecciones por VHC. Por lo tanto, existe la necesidad en la técnica de métodos eficaces para inducir respuestas fuertes de los LTC contra el VHC.
Cho J.H. et al. VACCINE, 17 (9-10) , 5 de marzo de 1999, págs. 1136-1144 describe un plásmido que codifica una proteína de fusión NS345ab y su uso para activar los linfocitos T. El documento EE.UU. 5.683.864 describe el uso de proteínas de fusión de VHC-1 en inmunoensayos.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
Es un objeto de la invención proporcionar reactivos y métodos para activar linfocitos T que reconocen epítopos de polipéptidos de VHC. Este y otros objetos de la invención se proporcionan mediante una o más de las formas de realización que se describen más adelante.
La invención proporciona proteínas de VHC útiles para activar linfocitos T específicos contra el VHC. Una forma de realización proporciona una proteína de fusión que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4 y un polipéptido NS5 de un virus de la hepatitis C (VHC) y un polipéptido proveniente de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1 para su uso en la generación de una respuesta inmunitaria contra el VHC en un mamífero.
Otra forma de realización proporciona una proteína de fusión que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y un polipéptido NS5b de VHC y un polipéptido proveniente de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1 para su uso en la generación de una respuesta inmunitaria contra el VHC en un mamífero.
Otra forma de realización más de la invención proporciona una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y opcionalmente un polipéptido NS5b de un VHC y un polipéptido proveniente de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1 para su uso en la generación de una respuesta inmunitaria contra el VHC en un mamífero. En una forma de realización de la descripción, uno de los polipéptidos de VHC proviene de una cepa de VHC diferente a la de los demás polipéptidos.
La descripción también proporciona composiciones que comprenden cualquiera de estas proteínas de fusión y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otra forma de realización de la descripción proporciona una composición que consiste esencialmente un polipéptido NS3, un polipéptido NS4 y un polipéptido NS5a, o una composición que consiste esencialmente en polinucleótidos que codifican las proteínas individuales.
Otra forma de realización de la descripción proporciona una composición que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y un polipéptido NS5b de un VHC, o una composición que consiste esencialmente en polinucleótidos que codifican las proteínas individuales.
Otra forma de realización más de la descripción proporciona una composición que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y opcionalmente un polipéptido NS5b de un VHC, o una composición que consiste esencialmente en polinucleótidos que codifican las proteínas individuales. En una forma de realización de la descripción, uno de los polipéptidos o polinucleótidos de VHC proviene de una cepa de VHC diferente a la de los demás.
Incluso otra forma de realización de la descripción proporciona un polinucleótido aislado y purificado que codifica una proteína de fusión que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4 y un polipéptido NS5a de un VHC o una proteína de fusión que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y un polipéptido NS5b de un VHC.
Todavía otra forma de realización de la descripción proporciona una composición que comprende un polinucleótido aislado y purificado que codifica una proteína de fusión que consiste esencialmente en cualquiera de un polipéptido NS3, un polipéptido NS4 y un polipéptido NS5a de un VHC o que consiste esencialmente en un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y un polipéptido NS5b de un VHC. La composición según la descripción comprende también un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otra forma de realización de la descripción proporciona un polinucleótido aislado y purificado que codifica una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4 y un polipéptido NS5a de un VHC en el que uno de los polipéotidos NS3, NS4 y NS5a proviene de una cepa de VHC diferente a la de los otros dos polipéptidos. La descripción también proporciona una composición que comprende este polinucleótido y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Todavía otra forma de realización de la descripción proporciona un polinucleótido aislado y purificado que codifica una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5a y un polipéptido NS5b de un VHC. En una forma de realización de la descripción, uno de los polipéptidos proviene de una cepa de VHC diferente a la de los demás polipéptidos. La descripción también proporciona una composición que comprende este polinucleótido y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Incluso otra forma de realización de la invención proporciona un método in vitro para activar linfocitos T que reconocen un epítopo de un polipéptido de VHC, que comprende la etapa de poner en contacto los linfocitos T con una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4 y un polipéptido NS5 de un VHC y un polipéptido proveniente de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1, mediante el cual una población de linfocitos T activados reconoce un epítopo de los polipéptidos NS3, NS4, NS5a o NS5b.
La invención proporciona así métodos y reactivos para activar linfocitos T que reconocen epítopos de polipéptidos de VHC. Estos métodos y reactivos resultan especialmente ventajosos para identificar epítopos de polipéptidos de VHC asociados con una respuesta fuerte de los LTC y para inmunizar mamíferos, incluidos los seres humanos, contra el VHC.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 muestra una comparación paralela de la de expresión de IFN-γ generada en los animales en respuesta al suministro de constructos alfavirales que codifican NS3NS4NS5a.
La Figura 2 muestra la expresión de IFN-γ generada en los animales en respuesta al suministro de ADN plasmídico que codifica NS3NS4NS5a ("desnudo") , ADN unido a PLG que codifica NS3NS4NS5a ("PLG”) , plásmidos de ADN distintos que codifican NS5a, NS34a y NS4ab ("desnudo") , y ADN unido a PLG que codifica NS5a, NS34a y NS4ab ("PLG") .
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo contrario, métodos convencionales de química, bioquímica, técnicas de ADN recombinante e inmunología, dentro de los... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Método in vitro para activar linfocitos T que reconocen un epítopo de un polipéptido de VHC, que comprende la etapa de:
poner en contacto los linfocitos T con una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5 de un virus de la hepatitis C (VHC) y un polipéptido de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1, mediante el cual una población de linfocitos T activados reconoce un epítopo de los polipéptidos NS3, NS4, NS5a o NS5b.
2. Proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5 de un virus de la hepatitis C (VHC) y un polipéptido de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1 para su uso en la generación de una respuesta inmunitaria contra el VHC en un mamífero.
3. Uso de una proteína de fusión que comprende un polipéptido NS3, un polipéptido NS4, un polipéptido NS5 de un virus de la hepatitis C (VHC) y un polipéptido de la región central de la poliproteína de VHC en los aminoácidos 1-191 de la poliproteína de VHC, numerados con respecto a VHC-1 en la fabricación de un medicamento para activar linfocitos T que reconocen un epítopo de un polipéptido de VHC, mediante el cual una población de linfocitos T activados reconoce un epítopo de los polipéptidos NS3, NS4, NS5a o NS5b.
4. Método según la reivindicación 1 o uso según la reivindicación 3 en el que los linfocitos T se obtienen de un mamífero seleccionado del grupo que consiste en un ratón, un babuino, un chimpancé y un ser humano.
5. Método según la reivindicación 1 o uso según la reivindicación 3 en el que la población de linfocitos T comprende linfocitos T CD4+.
6. Método según la reivindicación 1 o uso según la reivindicación 3 en el que la población de linfocitos T comprende linfocitos T CD8+.
7. Método o uso según la reivindicación 6 en el que los linfocitos T CD8+ expresan interferón-γ.
8. Método o uso según la reivindicación 6 en el que los linfocitos T CD8+ reconocen específicamente un epítopo de un polipéptido NS5a.
9. Método o uso según la reivindicación 8 en el que el epítopo está seleccionado del grupo que consiste en los epítopos que se muestran en la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO: 2.
10. Método según la reivindicación 1 o uso según la reivindicación 3 en el que los linfocitos T comprenden linfocitos T CD4+ y CD8+.
11. Método según la reivindicación 1 en el que la etapa de poner en contacto comprende adicionalmente poner en contacto los linfocitos T con un adyuvante.
12. Uso según la reivindicación 3 en el que el medicamento comprende un adyuvante.
13. Método según la reivindicación 1 o uso según la reivindicación 3 en el que la proteína de fusión es proporcionada por un polinucleótido que codifica la proteína de fusión.
14. Método o uso según la reivindicación 13 en el que el polinucleótido es ADN.
15. Método o uso según la reivindicación 13 en el que el polinucleótido es ARN.
16. Uso según la reivindicación 3 en el que los linfocitos T están en un mamífero.
17. Uso según la reivindicación 16 en el que el mamífero está seleccionado del grupo que consiste en un ratón, un babuino, un chimpancé y un ser humano.
18. Método o uso según la reivindicación 4 o uso según la reivindicación 16 en el que el mamífero está infectado con un VHC.
19. Método o uso según la reivindicación 4 o uso según la reivindicación 16 en el que el mamífero no está infectado con un VHC.
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