Acontecimiento de planta de maíz MON87460 y composiciones y procedimientos para la detección del mismo.

Un cromosoma de maíz que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgén de SEC ID Nº:

1 y uninserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unidooperativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5' de dicho inserto solapa con un extremo 3' de SEC ID Nº: 1.

Acontecimiento de planta de maíz MON87460 y composiciones y procedimientos para la detección del mismo Campo de la invención Se desvelan en el presente documento células, semillas y plantas transgénicas que incluyen ADN recombinante que expresa una proteína de choque frío que confiere mejor tolerancia al estrés y/o mejor rendimiento a las plantas. La divulgación también incluye procedimientos para preparar, usar y detectar dichas células, semillas y plantas. En particular, la presente invención se refiere a plantas de maíz tolerantes al estrés designadas MON87460, y a procedimientos y composiciones para detectar la presencia de ADN de MON87460 en una muestra.

Antecedentes de la invención Se desean plantas transgénicas con rasgos agronómicos mejorados tales como rendimiento, tolerancia a estrés ambiental, resistencia a plagas, tolerancia a herbicidas, composiciones de semilla mejoradas y similares, tanto por los agricultores, como por los productores de semillas. Aunque considerables intentos en el cultivo de plantas han proporcionado aumentos significativos de rasgos deseados, la capacidad para introducir ADN específico en genomas vegetales proporciona oportunidades adicionales para la generación de plantas con rasgos mejorados y/o únicos.

Sumario de la invención Se proporcionan en el presente documento composiciones y procedimientos relacionados con plantas de maíz transgénicas tolerantes a estrés por déficit de agua designadas MON87460, y descendencia y poblaciones de las mismas.

En un aspecto, la presente invención proporciona un cromosoma de maíz que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgénica de SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente a un gen cspB, en el que un extremo 5’ terminal de dicho inserto solapa con un extremo 3’ terminal de SEC ID Nº: 1. Otro aspecto de la invención es una semilla derivada de una planta de maíz transgénica designada MON87460, o descendencia de la misma, habiéndose depositado semilla representativa de dicha planta de maíz con una remesa enviada el 31 de enero de 2008 a la Colección America de Cultivos Tipo (ATCC) y habiéndosele asignado el Nº de Referencia PTA-8910, comprendiendo dicha semilla SEC ID Nº: 1. Otro aspecto de la invención comprende plantas descendientes, o semillas, o partes regenerables de las plantas y semillas de la planta MON87460. También se proporcionan en el presente documento plantas descendientes, o semillas, o partes regenerables de las plantas y semillas que comprenden SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2, SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4, SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

Otro aspecto de la invención proporciona una planta de maíz que tiene un cromosoma que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgénica de SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5’ de dicho inserto solapa con un extremo 3’ de SEC ID Nº: 1.

La presente invención también se refiere a una semilla de una planta de maíz que tiene un cromosoma que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgénica de SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5’ de dicho inserto solapa con un extremo 3’ de SEC ID Nº: 1. Es de particular interés un cromosoma en el que el polinucleótido heterólogo comprende un promotor de actina de arroz truncado para expresión de un gen cspB, y en el que dicho promotor de actina de arroz truncado está adyacente a la secuencia genómica de maíz de SEC ID Nº: 5. En ciertas realizaciones, se proporciona un cromosoma de maíz que comprende SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB. Un extremo 5’ del inserto transgénico heterólogo puede solapar con un extremo 3’ de SEC ID Nº: 1 en ciertas realizaciones. En ciertas realizaciones, el cromosoma de maíz puede comprender SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24. En ciertas realizaciones, un cromosoma de la invención está localizado dentro de una célula de maíz que también contiene un segundo polinucleótido heterólogo no ligado para expresión de una proteína resistente a glifosato 5-enolpiruvilsiquimato-3-fosfato sintasa (CP4 EPSPS) . También se proporciona el uso de una semilla de maíz como se ha definido anteriormente para preparar un alimento o producto de pienso procesado, en el que la semilla de maíz tiene un cromosoma que comprende SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB y en el que el alimento o producto de pienso procesado comprende una cantidad detectable de un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2 o un complemento de las mismas. En ciertas realizaciones, el alimento o producto de pienso comprende harina gruesa de maíz, harina de maíz o gluten de maíz. En ciertas realizaciones, el polinucleótido puede comprender una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4 o un complemento de las mismas. En otras realizaciones, el polinucleótido puede comprender además una secuencia de nucleótidos contenida en SEC ID Nº: 5, SEC ID Nº: 6, SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

Otro aspecto de la invención proporciona un procedimiento de detección de la presencia de SEC ID Nº: 1 o SEC ID Nº: 2 en una muestra tisular de maíz, comprendiendo el procedimiento:

(a) poner en contacto la muestra con un par de cebadores de ADN, comprendiendo dicho par de cebadores: i) un primer cebador derivado de secuencia de ADN en el genoma de la planta MON87460 adyacente al sitio de inserción del ADN heterólogo insertado (ADN transgénico) y un segundo cebador derivado del ADN heterólogo insertado; o ii) dos cebadores derivados de secuencia genómica en ambos lados del ADN heterólogo insertado; y el polinucleótido puede comprender además una secuencia de nucleótidos contenida en SEC ID Nº: 5, SEC ID Nº: 6, SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

De acuerdo con otro aspecto de la invención, se usa un par de cebadores de nucleótidos en un procedimiento de detección de ADN, en el que el par de cebadores cuando se usa en un procedimiento de amplificación de ácido nucleico produce un amplicón que contiene una cualquiera de SEC ID Nº: 1 a SEC ID Nº: 4. La detección de una cualquiera de SEC ID Nº: 1 a SEC ID Nº: 4 en un amplicón producido de esta manera es diagnóstico de la presencia de ácidos nucleicos de planta de maíz MON87460 en la muestra analizada en el procedimiento de detección. Dichos procedimientos comprenden: (a) poner en contacto la muestra que comprende ADN genómico MON87460 con un par de cebadores de ADN; y (b) realizar una reacción de amplificación de ácido nucleico, produciendo de este modo un amplicón; y (c) detectar el amplicón, comprendiendo el amplicón SEC ID Nº: 1 a SEC ID Nº: 4.

De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporcionan procedimientos para detectar la presencia de ADN que corresponde específicamente al ADN MON87460 de la planta de maíz en una muestra. Dichos procedimientos comprenden: (a) poner en contacto la muestra que comprende ADN MON87460 con una sonda de ADN que comprende una cualquiera de SEC ID Nº: 1 a SEC ID Nº: 4, o moléculas de ADN sustancialmente homólogas de SEC ID Nº: 1 a SEC ID Nº: 4 que hibridan en condiciones de hibridación rigurosas con ADN genómico de planta de maíz MON87460 y no hibridan en condiciones de hibridación rigurosas con ADN de planta de maíz no MON87460;

(b) someter a la muestra y la sonda a condiciones de hibridación rigurosas; y (c) detectar la hibridación de la sonda con el ADN MON87460 de planta de maíz.

De acuerdo con otro aspecto la invención, se proporcionan procedimientos para producir plantas de maíz tolerantes a estrés por déficit de agua y comprenden la etapa de cruzar una primera planta de maíz homocigota parental de acontecimiento MON87460 con una segunda planta de maíz homocigota parental que carece del rasgo de tolerancia a estrés por déficit de agua, produciendo de este modo plantas descendientes híbridas tolerantes a estrés por déficit de agua. En ciertas realizaciones, se proporciona un procedimiento para producir una planta de maíz tolerante a sequía que comprende cruzar una primera planta de maíz parental tolerable a sequía que comprende una SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está... [Seguir leyendo]

1. Un cromosoma de maíz que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgén de SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5’ de dicho inserto solapa con un extremo 3’ de SEC ID Nº:

1.

2. El cromosoma de maíz de la reivindicación 1, en el que

(i) dicho inserto transgénico heterólogo confiere tolerancia a déficit de agua, preferentemente el cromosoma de maíz comprende SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24; o

(ii) dicho cromosoma de maíz comprende además SEC ID Nº: 2.

3. Una planta de maíz que tiene un cromosoma que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgén de SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5’ de dicho inserto solapa con un extremo 3’ de SEC ID Nº: 1.

4. La planta de maíz de la reivindicación 3, en la que (i) dicho cromosoma comprende además SEC ID Nº; 2, preferentemente dicho cromosoma comprende SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24; o (ii) la planta de maíz comprende además ADN para expresar una EPSPS resistente a glifosato.

5. Una semilla de una planta de maíz que tiene un cromosoma que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgén de SEC ID Nº: 1 y un inserto transgénico heterólogo que comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5’ de dicho inserto solapa con un extremo 3’ de SEC ID Nº: 1.

6. La semilla de la reivindicación 5, en la que dicho cromosoma comprende además SEC ID Nº; 2, preferentemente dicho cromosoma comprende SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

7. Uso de la semilla de maíz de la reivindicación 5 para preparar un alimento o producto de pienso procesado, en el

que dicho alimento o producto de pienso procesado comprende una cantidad detectable de un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2 o un complemento de las mismas.

8. El uso de la reivindicación 7, en el que (i) dicho alimento o dicho producto de pienso comprende harina gruesa de maíz, harina de maíz o gluten de maíz;

(ii) dicho polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4 o un complemento de las mismas; o (iii) dicho polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos contenida en SEC ID Nº: 5, SEC ID Nº: 6, SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

9. Una semilla derivada de una planta de maíz transgénica designada MON87460, o descendencia de la misma,

habiéndose depositado semilla representativa de dicha planta de maíz con el Nº de Referencia de ATCC PTA-8910, comprendiendo dicha semilla SEC ID Nº: 1.

10. La semilla de la reivindicación 9, en la que dicha planta o descendencia de la misma tiene un cromosoma que comprende SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2, SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4, SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

11. Una planta de maíz descendiente cultivada a partir de la semilla de la reivindicación 9 o una semilla derivada de

dicha planta de maíz descendiente, en la que dicha planta de maíz descendiente y dicha semilla derivada de dicha planta de maíz descendiente tienen un cromosoma que comprende SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2, SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 4, SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

12. Un procedimiento para detectar la presencia de SEC ID Nº: 1 o SEC ID Nº: 2 en una muestra tisular de maíz, comprendiendo el procedimiento.

(a) poner en contacto la muestra con un par de cebadores de ADN, comprendiendo dicho par de cebadores: i) un primer cebador derivado de la secuencia de ADN en el genoma de la planta MON87460 adyacente al sitio de inserción del ADN heterólogo insertado (ADN transgénico) y un segundo cebador derivado del ADN heterólogo insertado; o ii) dos cebadores derivados de secuencia genómica en ambos lados del ADN heterólogo insertado; y realizar una reacción de amplificación de ácido polinucleico, produciendo de este modo un amplicón; y

detectar dicho amplicón, comprendiendo dicho amplicón SEC ID Nº: 1 y/o SEC ID Nº: 2; o (b) poner en contacto la muestra que comprende ADN con una sonda que hibrida en condiciones de hibridación rigurosas con ADN genómico del acontecimiento de maíz MON87460 y no hibrida en las condiciones de hibridación rigurosas con ADN genómico de una planta de maíz de control, siendo dicha sonda homóloga o

complementaria de SEC ID Nº: 1 o SEC ID Nº: 2; y someter la muestra y la sonda a condiciones de hibridación rigurosas; y detectar la hibridación de la sonda con ADN de la muestra, detectando de este modo SEC ID Nº: 1 o SEC ID Nº: 2 en la muestra tisular de maíz.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que al menos una molécula cebadora de ADN en dicho par de cebadores comprende al menos 11 nucleótidos consecutivos de SEC ID Nº: 5, SEC ID Nº: 6, SEC ID Nº: 7 o un complemento de las mismas.

14. Un procedimiento para obtener una planta de maíz tolerante a déficit de agua que carezca de un gen marcador seleccionable intacto que comprende las etapas de:

exponer una célula vegetal de maíz que tiene un cromosoma de maíz que comprende un polinucleótido de unión genómica/transgén de SEC ID Nº: 1 y un inserto de transgén heterólogo a uno o más agentes inductores de recombinación, en el que dicho inserto de transgén heterólogo comprende un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB, en el que un extremo 5’ de dicho inserto solapa con un extremo 3’ de SEC ID Nº: 1 y un gen marcador seleccionable; seleccionar una planta de maíz que comprende SEC ID Nº: 1 y un promotor de actina de arroz truncado que está unido operativamente con un gen cspB en el que dicho gen marcador seleccionable o una parte del mismo se ha eliminado o alterado, obteniendo de este modo una planta de maíz tolerante a déficit de agua que carece de un gen marcador seleccionable intacto.

15. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que

(i) dicho agente inductor de recombinación comprende una recombinasa, una nucleasa, una secuencia de reemplazo homóloga, una secuencia de reemplazo no homóloga, o una combinación de las mismas, preferentemente dicha secuencia de reemplazo homóloga o dicha secuencia de reemplazo no homóloga comprende uno o más genes; o

(ii) dicho inserto de transgén heterólogo comprende SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 24.

16. Un polinucleótido que comprende SEC ID Nº: 25, o un complemento de la misma.

17. El polinucleótido de la reivindicación 16, en el que

(i) dicho polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos contenida en SEC ID Nº: 3, SEC ID Nº: 5 o SEC ID Nº: 7; o

(ii) dicho polinucleótido comprende SEC ID Nº: 24.

18. Un polinucleótido que comprende SEC ID Nº: 2, o un complemento de la misma.

19. El polinucleótido de la reivindicación 18, en el que dicho polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos contenida en SEC ID Nº: 4, SEC ID Nº: 6 o SEC ID Nº: 7.