Virosoma que comprende hemaglutinina (HA), en el que la HA se derivó del virus influenza producido en una línea celular aviar.

Virosomas que comprenden hemaglutinina derivada de un virus influenza producido en una línea celular, composiciones, métodos de fabricación, uso de los mismos Campo de la invención La presente invención se refiere a los campos de inmunología y vacunología. Específicamente, la invención se refiere a virosomas mejorados, composiciones que comprenden los mismos y usos de los mismos.

Antecedentes de la invención

Uno de los objetivos primordiales de atención médica es el desarrollo de vacunas modernas para la profilaxis y administración eficaz de sustancias terapéuticas para el tratamiento de enfermedades. Hasta la fecha, se conocen virosomas como vesículas adecuadas para la administración de antígeno y/o como vehículos para sustancias terapéuticas.

Los virosomas son complejos compuestos por lípidos y al menos una proteína de la envuelta viral, producidos por un procedimiento in vitro. Los lípidos o bien se purifican a partir de huevos o plantas o bien se producen sintéticamente, y una fracción de los lípidos procede del virus que proporciona la proteína de la envuelta. Esencialmente, los virosomas representan envueltas de virus vacías reconstituidas que carecen de nucleocápside que incluye el material genético del/ de los virus original (es) . Los virosomas no pueden replicar pero son vesículas de fusión activa puras. Estos virosomas son funcionales porque su actividad de fusión de la membrana imita estrechamente la actividad de fusión de la membrana dependiente de pH bajo bien definida del virus intacto, que se media únicamente por la proteína de fusión viral. Como los virus, los virosomas se internalizan rápidamente mediante endocitosis mediada por el receptor o fusión con la membrana celular.

Principalmente, los virosomas utilizados son virosomas denominados virosomas de influenza reconstituidos inmunopotenciadores (IRIV) . Los IRIV son vesículas unilamelares esféricas con un diámetro medio de 150 nm y comprenden una membrana lipídica doble, que consiste esencialmente en fosfolípidos, preferiblemente fosfatidilcolinas (FC) y fosfatidiletanolaminas (FE) . Los IRIV contienen las glicoproteínas de la envuelta viral funcionales hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) intercaladas en la membrana de bicapa fosfolipídica. La HA biológicamente activa no sólo confiere estabilidad estructural y homogeneidad a formulaciones virosomales sino que también contribuye significativamente a las propiedades inmunológicas manteniendo la actividad de fusión de un virus. Opcionalmente, los IRIV comprenden moléculas de hemaglutinina de más de una cepa de virus, formando así IRIV quiméricos.

Se han desarrollado IRIV incorporando la hemaglutinina (HA) de una cepa de influenza A en liposomas compuestos por fosfatidilcolina. La glicoproteína de la superficie HA del virus influenza guía los virosomas específicamente hacia las células presentadoras de antígeno y conduce a la fusión con su membrana endosomal. Este proceso proporciona procesamiento y presentación óptimos de los antígenos a células inmunocompetentes. Los linfocitos T se activan para producir citocinas que a su vez estimulan los linfocitos B para formar grandes cantidades de anticuerpos específicos. Además, la estimulación de linfocitos B también se produce mediante contacto directo con el complejo antígeno-virosoma.

Los virosomas son sistemas de adyuvante/portador sumamente eficaces en la vacunación/terapia moderna, que presentan propiedades superiores como vesículas de suministro de antígeno y un potencial inmunogénico fuerte mientras que minimizan de manera concomitante el riego de efectos secundarios. Además, los virosomas muestran un efecto inmunoestimulante adyuvante (documento WO92/19267) , trans-adyuvante (solicitud de patente europea EP05027624) y no especifico (solicitud de patente europea EP06027120) .

El documento WO 96/33738 da a conocer una composición de vacuna de virus influenza para un ser humano que comprende una cantidad inmunogénica de virus influenza inactivado y una cantidad inmunogénica de una proteína de la envuelta recombinante purificada del virus, o un fragmento o precursor de la misma.

En el documento EP 1 652 914 se producen virosomas de influenza a partir de fosfolípidos y de virus influenza, que o bien se hacen crecer en huevos de gallina embrionados o bien en cultivo celular.

El documento WO 2005/107797 se refiere a una vacuna para proteger a un ser humano contra infección por una cepa de virus influenza humano.

En el documento WO 2007/052059 una composición inmunogénica comprende un antígeno de virus influenza separado y un adyuvante ThI, en los que se prepara el antígeno a partir de un virus que se hace crecer en cultivo celular (línea celular: MDCK; Vero; y PER.C6) .

El documento WO 2007/052058 da a conocer una composición inmunogénica que comprende: (i) un antígeno de virus influenza; (ii) un adyuvante particulado insoluble; y (iii) un inmunopotenciador, en el que se prepara el antígeno de virus influenza a partir de un virus influenza que se hace crecer en cultivo celular.

El documento WO 2007/052155 describe un procedimiento para preparar una vacuna de influenza con adyuvante, que comprende una etapa de mezclar volúmenes sustancialmente iguales de (i) una emulsión de aceite en agua y (ii) una preparación acuosa de un antígeno de virus influenza, en el que la concentración de hemaglutinina en el componente (ii) es superior a 60 microgramos por cepa de virus influenza por ml.

Durante más de 50 años, se han producido vacunas de influenza en huevos de gallina embrionados. Sin embargo, la metodología estándar convencional es extremamente larga y engorrosa. La producción de vacuna derivada de huevo actual requiere hasta nueve meses desde el aislamiento de una cepa de virus recién identificado hasta el producto final. Esto puede dificultar la respuesta frente a demandas imprevistas tales como el descubrimiento de cepas pandémicas, fallos de producción y cambios de cepa de virus influenza estacionales. Además, la metodología basada en huevos tradicional requiere una enorme cantidad de huevos, una adaptación del aislado de virus al huevo y una purificación exhaustiva para reducir la cantidad de proteínas de huevo contaminantes y minimizar el riesgo de alergias contra albúminas de huevo.

Por el contrario, un procedimiento basado en línea celular es más rápido y más flexible con respecto a la propagación de virus y permite la producción de cepas que no pueden hacerse crecer de manera adecuada en huevos (por ejemplo gripe aviar de Hong Kong en 1997) . Además, el uso de líneas celulares para la fabricación de virus tiene varias ventajas en relación con la seguridad de la vacuna resultante: no hay aditivos antibióticos presentes en la formulación de vacuna; no se necesitan conservantes tóxicos (tales como tiomersal) ; se reducen los niveles de endotoxina, no puede provocarse alergia al huevo; el crecimiento tiene lugar en medios libres de proteína y de suero (sin agente extraño/BSE) ; las preparaciones de vacuna de virus son de alta pureza.

Recientemente, se han realizado esfuerzos considerables para desarrollar sistemas de cultivo celular para la producción de vacunas. La mayoría de los sistemas de cultivo celular conocidos se basan en líneas celulares de mamífero tales como por ejemplo células Vero, células MDCK, células BHK y células PerC6. Se ha realizado varios informes sobre el desarrollo de vacunas basado en sistemas de cultivo de células de mamífero. Sin embargo, las vacunas de virus producidas en dichos sistemas de cultivo de células de mamífero presentan el riesgo de reacciones autoinmunitarias en proteínas derivadas de células de mamífero.

El procedimiento de fusión de virosoma es esencial para un suministro de antígeno/fármaco eficaz (Schoen P, et al., 1999) . Por tanto, existe una necesidad en la técnica de desarrollar virosomas con calidad mejorada con respecto a su actividad fusogénica e inmunogenicidad.

Sumario de la invención

La presente invención cumple esta necesidad proporcionando virosomas novedosos que comprenden hemaglutinina (HA) derivada de virus influenza producidos en líneas celulares aviares. Estos nuevos virosomas se caracterizan tanto por una actividad de fusión mejorada como por una inmunogenicidad mejorada en comparación con virosomas que comprenden hemaglutinina derivada de los virus influenza producidos mediante el procedimiento convencional usando huevos de gallina.

Por tanto, en un primer aspecto, la invención se refiere a... [Seguir leyendo]

1. Virosoma que comprende hemaglutinina (HA) , en el que la HA se derivó del virus influenza producido en una línea celular aviar.

2. Virosoma según la reivindicación 1, en el que la actividad de fusión de dicho virosoma es al menos un 50% superior en comparación con la actividad de fusión promedio de un virosoma que comprende HA que se derivó del virus influenza producido en huevos de gallina.

3. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que la inmunogenicidad de dicho virosoma es significativamente superior en comparación con la inmunogenicidad de un virosoma que comprende HA que se derivó del virus influenza producido en huevos de gallina.

4. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la HA se derivó de al menos dos cepas de virus influenza diferentes.

5. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, estando el virosoma liofilizado.

6. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, estando el virosoma cargado con antígeno.

7. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, estando el virosoma vacío.

8. Composición que comprende un virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

9. Composición según la reivindicación 8, siendo la composición una vacuna.

10. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9, siendo la composición inmunogénica y comprendiendo además un liposoma y al menos una molécula antigénica.

11. Composición según la reivindicación 10, en la que la al menos una molécula antigénica está atrapada en dicho liposoma.

12. Uso del virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 como vehículo de suministro de antígeno en una composición farmacéutica para generar una respuesta inmunitaria contra un antígeno.

13. Uso del virosoma según la reivindicación 7 como agente inmunoestimulante no específico para preparar composiciones farmacéuticas para generar respuestas inmunitarias contra antígenos de diversos orígenes.

14. Uso del virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para preparar una composición farmacéutica para la vacunación o inmunización.

15. Uso del virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para preparar una composición farmacéutica para tratar o prevenir una enfermedad o trastorno.

16. Kit que comprende un virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 o una composición según cualquiera de las reivindicaciones 8-11.

17. Uso según la reivindicación 15, en el que la enfermedad o trastorno se selecciona de una enfermedad o trastorno infeccioso, no infeccioso, neoplásico, inmunitario o metabólico.

18. Método para la preparación de un virosoma según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que comprende las etapas de a) tratar un virus influenza completo con un detergente o fosfolípido de cadena corta,

b) separar la fracción que contiene HA, añadiendo opcionalmente fosfolípidos, c) eliminar el detergente, dando como resultado la formación del virosoma.

19. Virosoma que pueden obtenerse mediante el método según la reivindicación 18.

20. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en la vacunación o inmunización.

21. Virosoma según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o trastorno.

22. Virosoma de la reivindicación 21, en el que la enfermedad o trastorno se selecciona de una enfermedad o trastorno infeccioso, no infeccioso, neoplásico, inmunitario o metabólico.