Una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A,

C, W135 e Y de Neisseria meningitidis, en la que: (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora para dar conjugados individuales para cada uno de los cuatro serogrupos; (ii) los conjugados tienen una proporción de sacárido:proteína (p/p) con un exceso de proteína; y (iii) la composición contiene entre 10 μg y 25 μg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis, con una cantidad de 2,5 μg, 5 μg o 10 μg de cada sacárido.

Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos

Campo técnico

La presente invención pertenece al campo de las vacunas, particularmente frente a la meningitis bacteriana.

Técnica antecedente

Neisseria meningitidis es un patógeno humano gramnegativo [1] que provoca meningitis bacteriana. Está estrechamente emparentado con N. gonorrhoeae, aunque una característica que diferencia claramente a los meningococos es la presencia de una cápsula de polisacáridos que está presente en todos los meningococos patógenos.

Basándonos en el polisacárido capsular de los organismos, se han identificado doce serogrupos de N. meningitidis (A, B, C, H, I, K, L, 29E, W135, X, Y & Z) . El serogrupo A ('MenA') es la causa más habitual de enfermedadesepidémicas en el África subsahariana. Los serogrupos B & C son responsables de la mayoría de los casos en los países desarrollados, mientras que los casos restantes están causados por los serogrupos W135 & Y.

Al igual que se usa para la clasificación, el polisacáridos capsulares se han utilizado para la vacunación. Durante muchos años se ha conocido una vacuna tetravalente inyectable de polisacáridos capsulares de los serogrupos A, C, Y & W135 [2, 3] y está autorizada para su uso en seres humanos. Aunque es eficaz en adolescentes y adultos, induce una respuesta inmunitaria pobre y de corta duración y protección, y no puede usarse en niños [por ejemplo, 4]. Los polisacáridos de esta vacuna no están conjugados y están presentes en una proporción ponderal de 1:1:1:1 [5]. Mencevax ACWY™ y Menomune™ contienen ambos 50 µg de cada polisacárido purificado una vez reconstituidos a partir de sus formas liofilizadas. Los sacáridos de la cápsula de los serogrupos A, C, W135 & Y también se han combinado en forma de conjugados [6-9] para dar vacunas tetravalentes, por ejemplo, el producto no coadyuvado Menactra™.

Los oligosacáridos conjugados del serogrupo C se han aprobado para su uso en seres humanos, incluyendo Menjugate™ [10, 11], Meningitec™ y NeisVac-C™. Los productos Menjugate™ y Meningitec™ tienen antígenos de oligosacáridos conjugados con un portador CRM197, mientras que NeisVac-C™ usa el polisacárido completo (des-Oacetilado) conjugado con un portador toxoide tetánico.

Permanece sin embargo, la necesidad de mejoras en las vacunas conjugadas frente a los serogrupos A, W 135 e Y, y en su elaboración. Esa necesidad es abordada por los productos, procesos y usos desvelados en la referencia 7, pero aún queda ámbito para modificaciones y mejoras adicionales.

Divulgación de la invención La invención proporciona una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de N. meningitidis, en la que (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con un portador proteico para dar conjugados individuales para cada uno de los cuatro serogrupos; (ii) los conjugados tienen una proporción sacárido:proteína (p/p) con un exceso de proteína; y (iii) la composición contiene entre 10 µg y 25 µg de sacáridos de meningococos por dosis. Dichas composiciones se definen en las reivindicaciones 1 y 7.

La invención también proporciona dicha composición inmunógena inyectable, en la que la composición comprende adicionalmente un antígeno de uno o más de: (a) serogrupo B de N. meningitidis; (b) Haemophilus influenzae de tipo B; y/o (c) Streptococcus pneumoniae.

Los antígenos incluidos en ocho composiciones preferidas de la invención son:

(1) serogrupos A, C, W135 & Y de N. meningitidis;

(2) serogrupos A, B, C, W135 & Y de N. meningitidis; H. influenzae de tipo B y serogrupos A, C, W135 & Y de

N. meningitidis;

(4) H. influenzae de tipo B y serogrupos A, B, C W135 & Y de N. meningitidis;

(5) S. pneumoniae y serogrupos A, C, W135 & Y de N. meningitidis;

(6) S. pneumoniae y serogrupos A, B, C, W135 & Y de N. meningitidis;

(7) H. influenzae de tipo B, S. pneumoniae y serogrupos A, C, W135 & Y de N. meningitidis

(8) H. influenzae de tipo B, S. pneumoniae y serogrupos A, B, C, W135 & Y de N. meningitidis.

Los antígenos de sacáridos de las composiciones de la invención son preferiblemente oligosacáridos. Los antígenos de sacáridos de las composiciones de la invención son muy preferiblemente oligosacáridos conjugados.

Mezclas de sacáridos de meningococos Las composiciones de la invención comprenden sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de N. meningitidis.

Se prefiere que la eficacia protectora de los antígenos sacáridos individuales no se elimine mediante su combinación, aunque puede reducirse la inmunogenicidad real (por ejemplo, los títulos de ELISA) .

La proporción (p/p) de sacárido MenA:sacárido MenC puede ser mayor de 1 (por ejemplo 2:1, 3:1, 4:1 ó 5:1) .

La proporción (p/p) de sacárido MenY:sacárido MenW135 puede ser mayor de 1 (por ejemplo 2:1, 3:1, 4:1 ó 5:1) y/o la proporción (p/p) de sacárido MenY:sacárido MenC - puede ser menor de 1 (por ejemplo 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 o inferior) .

Una cantidad típica de cada antígeno de sacáridos de meningococo por dosis es, por ejemplo, de aproximadamente 1 µg, de aproximadamente 2, 5 µg, de aproximadamente 4 µg, de aproximadamente 5 µg o de aproximadamente 10 µg (expresado como sacárido) .

Las proporciones preferidas (p/p) para los sacáridos de los serogrupos A:C:W135:Y son: 1:1:1:1; 1:1:1:2; 2:1:1:1; 4:2:1:1; 4: 2:1:2; 4:2:2:1; 2:2:1:1; 2:2:1:2; y 2:2:2:1. Las proporciones preferidas (p/p) para los sacáridos de los serogrupos C:W135:Y son: 1:1: 1; 1:1:2; 1:1:1; 2:1:1; 4:2:1; 2:1:2; 4:1:2; 2:2:1 y 2:1:1. Se prefiere usar una masa sustancialmente igual de cada sacárido.

Purificación de los polisacáridos capsulares Los polisacáridos capsulares de los meningococos se preparan típicamente mediante un proceso que comprende las etapas de precipitación del polisacárido (por ejemplo, usando un detergente catiónico) , fraccionamiento con etanol, extracción fría con fenol (para eliminar la proteína) y ultracentrifugación (para eliminar el LPS) [por ejemplo ref. 15].

Un proceso más preferido [7], implica sin embargo la precipitación del polisacárido seguido de una solubilización del polisacárido precipitado usando un alcohol inferior. La precipitación puede conseguirse usando un detergente catiónico tal como sales de tetrabutilamonio y de cetiltrimetilamonio (por ejemplo, las sales de bromuro) , o bromuro de hexadimetrina y sales de miristiltrimetilamonio. Particularmente se prefiere el bromuro de cetiltrimetilamonio (Cetyltrimethylammonium bromide, 'CTAB') [16]. La solubilización del material precipitado puede conseguirse usando un alcohol inferior tal como metanol, propan-1-ol, propan-2-ol, butan-1-ol, butan-2-ol, 2-metil-propan-1-ol, 2-metilpropan-2-ol, dioles, etc., pero el etanol es particularmente adecuado para solubilizar complejos de CTABpolisacárido. El etanol se añade preferiblemente al polisacárido precipitado para dar una concentración final de etanol (basada en el contenido total de etanol y agua) de entre el 50% y el 95%.

Después de la resolubilización, el polisacárido puede tratarse adicionalmente para eliminar contaminantes. Esto es particularmente importante en situaciones en las que no es aceptable siquiera una contaminación menor (por ejemplo, para la producción de vacunas humanas) . Esto implicará típicamente una o más etapas de filtración, por ejemplo, puede usarse filtración profunda, filtración a través de carbono activo, filtración por tamaños y/o ultrafiltración.

Una vez filtrado para eliminar contaminantes, el polisacárido puede precipitarse para un tratamiento y/o procesado adicionales. Esto puede conseguirse convenientemente mediante el intercambio de cationes (por ejemplo, mediante la adición de sales de calcio o de sodio) .

Como alternativa a la purificación, los sacáridos capsulares de la presente invención pueden obtenerse mediante una síntesis total o parcial, por ejemplo, la síntesis de Hib se desvela en la ref. 17, y la síntesis de MenA en la ref.

18.

El polisacárido puede modificarse químicamente. Por ejemplo, puede modificarse para sustituir uno o más grupos hidroxilo por grupos bloqueantes. Esto es particularmente útil para reducir la hidrólisis del serogrupo A [19] (véase a continuación) . También puede realizarse una des-O-acetilación... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de Neisseria meningitidis, en la que: (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora para dar conjugados individuales para cada uno de los cuatro serogrupos; (ii) los conjugados tienen una proporción de sacárido:proteína (p/p) con un exceso de proteína; y (iii) la composición contiene entre 10 µg y 25 µg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis, con una cantidad de 2, 5 µg, 5 µg o 10 µg de cada sacárido.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que los sacáridos A, C, W135 e Y están presentes a 5 µg cada uno por dosis o a 2, 5 µg cada uno por dosis.

3. La composición de la reivindicación 2, en la que los sacáridos A, C, W135 e Y están presentes a 5 µg cada uno por dosis.

4. La composición de la reivindicación 1, en la que los sacáridos están presentes en una proporción A:C:W135:Y (p/p) de 1:1:1:2, 4:2:1:1, 4: 2:1:2, 4:2:2:1, 2:2:1:1, 2:2:1:2 ó 2:2:2:1.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que los sacáridos tienen la misma proteína portadora.

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la proteína portadora es un toxoide tetánico.

7. Una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de Neisseria meningitidis, en la que: (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora para dar conjugados individuales para cada uno de los cuatro serogrupos, en la que la proteína portadora es un toxoide tetánico; (ii) los conjugados tienen una proporción de sacárido:proteína (p/p) con un exceso de proteína; y

(iii) la composición contiene entre 10 µg y 25 µg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis.

8. La composición de la reivindicación 7, en la que los sacáridos están presentes en una proporción A:C:W135:Y (p/p) de 1:1:1:1; 1:1:1:2; 2: 1:1:1; 4:2:1:1; 8:4:2:1; 4:2:1:2; 8:4:1:2; 4:2:2:1; 2:2:1:1; 4:4:2:1; 2:2:1:2; 4:4:1:2; ó 2:2:2:1.

9. La composición de la reivindicación 7 o de la reivindicación 8, con una masa sustancialmente igual de cada sacárido.

10. La composición de la reivindicación 9, en la que la cantidad de cada antígeno de sacárido de meningococo es de aproximadamente 2, 5 µg, o de aproximadamente 5 µg (expresada como sacárido) por dosis.

11. La composición de la reivindicación 10, que comprende 5 µg de sacárido del serogrupo A, 5 µg de sacárido del serogrupo C, 5 µg de sacárido del serogrupo W135 y 5 µg de sacárido del serogrupo Y.

12. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que cada uno de los cuatro conjugados tienen una proporción de sacárido:proteína (p/p) de hasta 1:2, 5

13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que los sacáridos capsulares están conjugados con proteínas portadoras a través de un grupo conector.

14. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la composición tiene un volumen de 0, 5 ml.

15. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el antígeno que protege frente al serogrupo A de N. meningitidis es un sacárido capsular modificado del serogrupo A en el que uno o más grupos hidroxilo han sido reemplazados por grupos bloqueantes.

16. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un antígeno de uno

o más de: (a) serogrupo B de N. meningitidis; (b) Haemophilus influenzae de tipo B; y/o (c) Streptococcus pneumoniae.

17. La composición de la reivindicación 16, que comprende un antígeno que protege frente a H. influenzae de tipo B.

18. La composición de la reivindicación 16 o de la reivindicación 17, que comprende uno o más antígeno (s) que protege (n) frente al serogrupo B de N. meningitidis.

19. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, que comprende uno o más antígeno (s) que protege (n) frente a S. pneumoniae.

20. La composición de la reivindicación 19, en la que el uno o más antígenos comprenden un sacárido de S. pneumoniae.

21. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que los antígenos de sacáridos de

meningococos de la composición son oligosacáridos conjugados con proteínas portadoras.

22. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un coadyuvante de sal de aluminio.

23. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para su uso para desencadenar una respuesta inmunitaria protectora frente a una enfermedad meningocócica en un paciente.

24. La composición de la reivindicación 23, para su uso en un procedimiento para desencadenar una respuesta inmunitaria protectora frente a una enfermedad meningocócica en un paciente humano mediante una inyección intramuscular.