Un nuevo virus de influencia canina y la vacuna correspondiente.

Un virus de la influenza del serotipo H3N2 que tiene:

(i) una proteína hemaglutinina (HA) representada por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO.

10; y

(ii) una proteína neuraminidasa (NA) representada por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 12.

Un nuevo virus de influenza canina y la vacuna correspondiente Campo de la técnica La presente invención se refiere a nuevos virus de influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) , A/Canine/Korea/02/07 (H3N2) y A/Canine/Korea/03/07 (H3N2) , una composición de vacuna que contiene al menos uno de los virus como ingrediente activo, siendo tales vacunas utilizadas para prevenir o tratar enfermedades que resultan de la infección por el virus de la influenza, y un kit de ensayo para la detección de los virus.

Antecedentes en el estado del arte La influenza, causada por el virus de la Influenza tipo A de la familia Orthomyxoviridae, es la enfermedad de mayor importancia económica en los seres humanos, cerdos, caballos y aves de corral.

Los virus de la influenza tipo A se clasifican además con base en las características de dos proteínas de superficie conocidas como hemaglutinina (H) y neuraminidasa (N) . El virus de influenza tipo A se expresa como una combinación del subtipo H (hemaglutinina) y del subtipo N (neuraminidasa) (por ejemplo, H9N2) . Existen 16 diferentes subtipos H y 9 subtipos N, dando como resultado un total de 144 diferentes combinaciones posibles de subtipos H y N de virus de la influenza tipo A.

La influenza es una zoonosis. Los virus de tipo A son los patógenos humanos más virulentos entre los tres tipos de influenza, y causan la enfermedad más grave. Además, son muy propensos a mutar y se transmiten fácilmente de una especie a otra, causando una pandemia. En consecuencia, el estallido de una pandemia de influenza se está convirtiendo en un gran problema que debe ser resuelto. Además, existen diferentes informes de que los virus de influenza están infectando nuevas especies que hasta ahora se creía que eran resistentes a la infección por el virus.

La influenza canina se refiere a nuevas variedades del virus de la influenza tipo A que causan influenza en los caninos. Debido a la falta de exposición previa a este virus, los perros no tienen inmunidad natural a este virus. Por lo tanto, todas las especies y edades son susceptibles a este virus. Los perros con influenza canina pueden sufrir de neumonía aguda, mostrando los síntomas de una tos severa, fiebre alta y rinorrea.

Se ha encontrado que un virus de la influenza altamente contagioso ha sido el causante de las muertes del perro de carreras galgo de una enfermedad respiratoria en una pista de la Florida en 2004. Entonces, ya que se han reportaron brotes del mismo en Texas, Alabama, Arkansas y otros estados en los EE.UU., la influenza canina fue considerada como una nueva epidemia en los perros. Un estudio epidemiológico mostró que el virus, aislado de un perro con la influenza canina, era casi idéntico al virus de la influenza equina H3N8, lo que indica la creación de la influenza canina como resultado de la transmisión de caballos a perros. Existen informes del virus de la influenza equina H3N8 que causa la neumonía hemorrágica en perros de carreras y de aislamiento del virus de la influenza humana H3N8 de los perros. Sin embargo, debe hallarse suficiente evidencia serológica y virológica, para la influenza canina.

Además, se han reportado casos de brote de influenza aviar en los caninos. Se infiere que el mecanismo epidemiológico de la transmisión de la influenza de las aves a los perros tiene dos vías: una es por la alimentación de los perros con aves crudas que portan la influenza, tales como patos, gallinas, etc.; y la otra forma principal de que el virus de la influenza se propague es de los perros infectados a los perros sanos en las gotitas respiratorias al toser y estornudar. Como tal, se infiere que la influenza canina se establece después de que los perros infectados son expuestos a ambientes nuevos y entran en contacto con los perros sanos. Es importante prevenir la influenza canina ya que los virus de la influenza canina pueden provocar una infección secundaria con diferentes grados de mortandad. No existe vacuna disponible para los perros en este momento.

El número de acceso en la base de datos del GenBank AY862607 divulga un gen que codifica para la hemaglutinina del virus de la influenza tipo A virus. El número de acceso en la base de datos del GenBank AY862641 divulga un gen que codifica para la neuraminidasa del virus de la influenza tipo A.

Choi et al., Virology 2005 332 (2) : 529 - 537 divulga virus de la influenza aviar en los mercados de aves de corral vivas en Corea y su potencial patógeno

Problema técnico En relación con la presente invención, la investigación profunda y exhaustiva sobre la producción del virus de la influenza en los caninos, realizada por los presentes inventores con base en los antecedentes anteriormente mencionados, resultó en el hallazgo de que los virus de la influenza de algunos perros en Corea eran variantes del serotipo A, que se diferencian de los virus de influenza anteriores y, a pesar de pertenecer a un grupo aviar, mostró transmisión entre especies entre aves y perros a través de análisis virológico, serológico, patológico y filogenético. Además, se ha desarrollado con éxito una vacuna altamente estable contra a estos virus.

Solución Técnica Un objetivo de la presente invención es el de proporcionar un nuevo virus de la influenza canina del serotipo H3N2.

Otro objetivo de la presente invención es el de proporcionar una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína constituyente del virus de la influenza.

Aún un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar una composición de vacuna contra el nuevo virus.

Es todavía un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un kit de análisis para la detección del virus de la influenza del serotipo H3N2, que incluye al virus de la presente invención o a una proteína HA y NA del mismo.

Descripción de los dibujos La Figura 1 muestra la secuencia completa de aminoácidos codificada por un gen que codifica para NA del virus de influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) en comparación con aquellos de los virus de la influenza A/Dove/Korea/S11/03 (H3N2) , A/Duck/Korea/S7/03 (H3N2) y A/Chicken/Korea/S6/03 (H3N2) .

La Figura 2 muestra la secuencia completa de aminoácidos codificada por un gen que codifica para HA del virus de la influenza A/Equine/Jilin/1/1989 (H3N8) en comparación con aquellos de los virus de la influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) , A/Dove/Corea/S11/03 (H3N2) , A/Duck/Korea/S7/03 (H3N2) y A/Chicken/Korea/S6/03 (H3N2) .

La Figura 3 muestra una secuencia parcial de aminoácidos codificada por un gen que codifica para HA del virus de la influenza A/Equine/Jilin/1/1989 (H3N8) en comparación con los virus de la influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) , A/Canine/Korea/02/07 (H3N2) , A/Canine/Korea/03/07 (H3N2) , A/Dove/Korea/S11/03 (H3N2) , A/Duck/Korea/S7/03 (H3N2) y A/Chicken/Korea/S6/03 (H3N2) .

La Figura 4 muestra un árbol filogenético para el gen que codifica para HA, enraizado con el virus de la influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) .

La Figura 5 muestra un árbol filogenético para el gen que codifica para NA, enraizado con el virus de la influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) .

La Figura 6 es un gráfico que muestra los cambios en la temperatura corporal, el título de los anticuerpos y la producción de la progenie viral durante una semana en animales inmunizados con la influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) y los animales no inmunizados con la misma.

La Figura 7 muestra lesiones histopatológicas en los órganos y los pulmones de los animales inmunizados con virus de la influenza A/Canine/Korea/01/07 (H3N2) (grupo inmunizado B, D y F) y los animales no inmunizados con la misma (control, A y C) : (A) el revestimiento epitelial de la columna pseudoestratificada en un órgano normal del grupo de control 9 días después de la inoculación agresiva (amplificación 400 veces) , (B) órgano necrótico (n) , metaplasia escamosa (s) , e hiperplasia epitelial e inflamación crónica sobre tejido conectivo (C) en el grupo inmunizado 9 días después de la inoculación agresiva (amplificación 400 veces) , (C) alvéolos normales del grupo de control 3 días después de la inoculación agresiva (amplificación 200 veces) , (D) bronquitis necrotizante difusa severa y bronquiolitis purulenta en el lumen bronquial del grupo inmunizado 3 días después del grupo agresivo (amplificación 100 veces) ; (E) bronquiolitis necrotizante severa en el grupo inmunizado 6 días después de la inoculación agresiva (llena de células necrotizantes separadas y neutrófilos, e inflamación... [Seguir leyendo]

1. Un virus de la influenza del serotipo H3N2 que tiene:

(i) una proteína hemaglutinina (HA) representada por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 10; y

(ii) una proteína neuraminidasa (NA) representada por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 12.

2. El virus de la influenza del serotipo H3N2 de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además una proteína seleccionada entre una proteína estructural (NS) codificada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 3, una proteína matriz (M) codificada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 4, una nucleoproteína (NP) codificada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 5, una polimerasa (PA) codificada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 6, una proteína polimerasa 2 básica (PB2) codificada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 7, una proteína polimerasa 1 básica (PB1) codificada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 8, y combinaciones de las mismas.

3. El virus de la influenza del serotipo H3N2 de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene el número de acceso KCTC 11205BP.

4. El virus de la influenza del serotipo H3N2 de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene el número de acceso KCTC 11206BP.

5. El virus de la influenza del serotipo H3N2 de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene el número de acceso KCTC 11207BP.

6. Una secuencia de nucleótidos, que codifica una secuencia de aminoácidos de la hemaglutinina (HA) de la reivindicación 1.

7. La secuencia de nucleótidos de acuerdo con la reivindicación 6, representada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 9.

8. Una secuencia de nucleótidos, que codifica una secuencia de aminoácidos de la neuraminidasa (NA) de la reivindicación 1.

9. Una secuencia de nucleótidos de acuerdo con la reivindicación 8, representada por una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO. 11.

10. Una composición de una vacuna contra el virus de la influenza, que contiene como ingrediente activo al virus de una de las reivindicaciones 1 a 5 o a una proteína HA y NA de la misma.

11. La composición de la vacuna contra el virus de la influenza 10, para ser administrada a perros.

12. La composición de la vacuna contra el virus de la influenza 10, que comprende además un gel de hidróxido de aluminio o aceite como adyuvante.

13. La composición de la vacuna contra el virus de la influenza 10, que comprende además al menos un patógeno diferente del ingrediente activo.

14. La composición de la vacuna contra el virus de la influenza 10, en donde la composición de la vacuna es una vacuna viva atenuada.

15. La composición de la vacuna contra el virus de la influenza 10, que comprende al virus de la influenza en una cantidad de 25 HAU o superior.

16. La composición de la vacuna contra el virus de la influenza 10, en donde el ingrediente activo está contenido en una cantidad del 90% o superior.

17. Un virus de la influenza del serotipo H3N2 de acuerdo con la reivindicación 1, para uso en la prevención o el tratamiento de enfermedades resultantes de la infección con el virus de la influenza.

18. Un kit de ensayo para detectar una virus de la influenza del serotipo H3N2, que comprende al virus de una de las reivindicaciones 1 a 5 o una proteína HA y NA del mismo.