Una composición adyuvante polinucleotídica que comprende un ácido polirriboinosínico polirribocitidílico (PIC),

kanamicina y un ión de calcio, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio superior a 138.000 Daltons o un tamaño molecular medio superior a 9 Svedbergs.

Sustancias inmunogénicas que comprenden un adyuvante a base de ácido poliinosínico y ácido policitidílico.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención generalmente se refiere a composiciones y procedimientos adyuvantes, de su uso para potenciar una respuesta inmunitaria, más en particular, a compuestos, vacunas y procedimientos para potenciar la inmunogenicidad de un antígeno y, más en particular, a composiciones y vacunas con adyuvantes polinucleotídicos que comprenden las composiciones adyuvantes polinucleotídicos. La invención también se refiere a dichas composiciones y vacunas adyuvantes polinucleotídicas para su uso en procedimientos según se reivindica.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

1. Descripción de la técnica relacionada

El sistema inmunitario puede mostrar tanto inmunidad específica como no específica. En general, los linfocitos B y T, que muestran receptores específicos en su superficie celular para un antígeno determinado, producen inmunidad específica. El sistema inmunitario puede responder a diferentes antígenos de dos formas: 1) inmunidad humoral, que incluye la estimulación de las células B y la producción de anticuerpos o inmunoglobulinas, células presentadoras de antígeno (APC) y células T colaboradoras (Th1 y Th2) y 2) inmunidad mediada por células (IMC) que generalmente implica a las células T incluyendo los linfocitos T citotóxicos (CTL) , aunque también están implicadas otras células en la generación de una respuesta CTL (p. ej., células Th1 y / o Th2 y APC) .

La inmunidad no específica abarca diversas células y mecanismos como la fagocitosis (la acción de engullir partículas o antígenos extraños) por macrófagos o granulocitos y la actividad de las células citotóxicas naturales (NK) , entre otras. La inmunidad no específica depende de mecanismos menos avanzados evolutivamente y no muestra la naturaleza adquirida de especificidad y memoria, que son ejemplos de rasgos característicos de una respuesta inmunitaria específica. Las diferencias claves entre la inmunidad específica y no específica se basan en la especificidad de las células B y T. Estas células predominantemente adquieren su sensibilidad tras la activación con un antígeno específico y tienen mecanismos para mostrar memoria en el caso de futuras exposiciones a este antígeno específico. Como resultado, la vacunación (que supone especificidad y memoria) es un protocolo eficaz como protección frente a patógenos dañinos.

Generalmente, los adyuvantes son compuestos, que cuando se administran con un antígeno (mezclado con el antígeno o administrado antes de la administración de este) potencia o modifica la respuesta inmunitaria frente a este antígeno en particular.

Entre los ejemplos de adyuvantes que se han usado para potenciar una respuesta inmunitaria se incluyen compuestos de aluminio (generalmente referidos todos como "alumbre") , emulsiones de aceite en agua (el adyuvante completo de Freund (ACF) es una emulsión de aceite en agua que contiene organismos Mycobacterium tuberculosis muertos por calor liofilizados) , saponina (aislada de la corteza de Quillaja saponaria, el componente activo del adyuvante conocido como Quile A) , CpG ODP (oligodeoxinucleótido sintético que contiene dinucleótidos CpG no metilados) , MPL (derivado del lipopolisacárido de Salmonella minnesota Re595) , liposomas (normalmente fabricadas con materiales biodegradables como fosfolípidos) y microesferas de polímeros biodegradables (fabricados con diversos polímeros como PLGA, polifosfaceno y polianhídridos) . Las propiedades adyuvantes de estos compuestos se han evaluado con cada adyuvantes que han mostrado ventajas y desventajas.

El principal problema con el uso de adyuvantes para vacunas humanas, especialmente vacunas rutinarias para niños, es la toxicidad y los efectos secundarios adversos de la mayoría de las formulaciones adyuvantes. La aplicación de nuevas tecnologías al desarrollo de vacunas está llevando a antígenos purificados, subunidades y sintéticos que tienden a ser poco inmunogénicos. El desarrollo de nuevos adyuvantes, para mejorar la inmunogenicidad / eficacia y reducir los efectos secundarios, representa uno de los principales desafíos de la investigación y desarrollo de vacunas. Se han estudiado diversas aplicaciones para los complejos polinucleotídicos incluyendo su actuación como adyuvantes. Los ARN de cadena doble (ARNcd) son modificadores biológicos muy potentes que puede ejercer una profunda influencia sobre las células a concentraciones nanomolares. Entre los efectos moduladores de los ARNcd incluyen un amplio espectro de acciones a los niveles molecular y celular.

A nivel molecular, los ARNcd pueden mostrar efectos biológicos, como la síntesis de interferón, inducción de proteína quinasa, potenciación del antígeno de histocompatibilidad e inhibición del metabolismo. Y a nivel celular, el ARNcd puede mostrar efectos biológicos como pirogenicidad, mitogenicidad, activación de macrófagos, activación de la inmunidad medida por células e inducción del estado antivírico. Un potencial prometedor de los ARNcd es su efecto inmunomodulador en tratamientos antimicrobianos. En la patente de EE. UU. 4.124.702 se describe que los polinucleótidos de cadena doble inducen la inducción del interferón en células animales vivas. En la patente de EE. UU. Nº 3.906.092 se describe que la respuesta anticorpal a una vacuna de tipo adyuvante aumentaba incorporando a la vacuna un polinucleótido o un complejo de polinucleótidos. Houston y col., establecieron que los PICLC (complejo de ácido poliinosínico, ácido policitidílico y poli-L-lisincarboximetilcelulosa) como un potente adyuvante aumentando la respuesta anticorpal primaria sin la ayuda de un adyuvante adicional. Houston y col., en Infection and Immunity, 14: 318-9, 1976C. Se encontró que el ARNcd micoviral potenciaba significativamente la respuesta anticorpal hemaglutinante sobre glóbulos rojos de cordero (GRc) . Wright y Adler-Moore, Biochemical and Biophysical Research Communications, 131: 949-45, 1985.

Sin embargo, PIC (ácido poliinosínico ácido policitidílico) muestra toxicidad aguda cuando se utiliza en animales. Por ejemplo, Phillips y col. notificaron que se observaban manifestaciones tóxicas graves en perros tras la administración subcrónica de PIC a dosis de 2, 0 mg / kg. La toxicidad se caracterizó por una disminución espontánea de la actividad, mala coordinación, vómitos, anorexia, pérdida de peso, cambios hematológicos que reflejaban disminución de la hematopoyesis, aumento de las actividades fosfatasa alcalina y transaminasa, degeneración de timo, destrucción de la médula ósea, dilatación de los capilares sinusoidales hepáticos en las áreas centrolobulares, necrosis de las células hepáticas, colapso de las estructuras hepáticas y una artritis generalizada. Véase, Phillips y col., Toxicology and Applied Pharmacology, 18: 220-30, 1971.

PIC, uno de los complejos polinucleotídicos más estudiados, no fue eficaz cuando se usó en ratones y humanos debido a su inestabilidad en el organismo tras la administración. Por tanto, PIC ha sido modificado de muchas formas para superar una u otra deficiencia. Por ejemplo, un complejo de ácido polirriboinosínico polirribocitidílico con bromhidrato de poli-L-lisina es aproximadamente de 5 a 15 veces más resistente a la hidrólisis por la ribonucleasa pancreática que el PIC original. Otro ejemplo es el ARNcd poliICLC, o PICLC abreviado, que se encontró era muy eficaz como agente antivírico o antitumoral. PICLC es un ARNcd sintético compuesto de cadenas de ácido polirriboinosínico y ácido polirribocitidílico (PIC) . Aunque PICLC es un inmunomodulador prometedor que tiene un gran potencial en las terapias antimicrobianas y antineoplásicas, se ha encontrado que producen efectos secundarios graves en humanos, especialmente cuando el fármaco se administra en múltiples dosis altas. Algunos de los efectos secundarios notificados son fiebre, hipotensión, leucopenia, mialgia, trombocitopenia y poliartralgia. Debe superarse el problema inherente de toxicidad para hacer que PICLC sea seguro para su uso en humanos. Además, la eficacia terapéutica del poli ICLC está limitada por su estabilidad in vivo.

Para tratar las infecciones víricas se usa un fármaco antivírico compuesto de ácido poliinosínico-ácido policitidílico (Poli I: C) , kanamicina y calcio (Av-PICKCa) . Se ha demostrado que Av-PICKCa es capaz de inducir la producción de interferón e interleuquina-2. Av-PICKCa administrado sólo como fármaco antivírico estimula una respuesta inmunitaria no específica,... [Seguir leyendo]

1. Una composición adyuvante polinucleotídica que comprende un ácido polirriboinosínico polirribocitidílico (PIC) , kanamicina y un ión de calcio, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio superior a 138.000 Daltons o un tamaño molecular medio superior a 9 Svedbergs.

2. La composición adyuvante de la reivindicación 1 en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio igual o superior a 150.000 Daltons o un tamaño molecular medio igual o superior a 9, 3 Svedbergs.

3. La composición adyuvante de la reivindicación 1 en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio igual o superior a 250.000 Daltons o un tamaño molecular medio igual o superior a 11, 8 Svedbergs.

4. La composición adyuvante de la reivindicación 1 en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio igual o superior a 337.386 Daltons o un tamaño molecular medio igual o superior a 13, 5 Svedbergs.

5. La composición adyuvante de la reivindicación 1 en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio igual o superior a 13, 5 Svedbergs.

6. La composición adyuvante de la reivindicación 1, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio igual o superior a 350.000 Daltons o un tamaño molecular medio igual o superior a 15, 3 Svedbergs.

7. La composición adyuvante de la reivindicación 1 en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un peso molecular medio igual o superior a 500.000 Daltons o un tamaño molecular medio igual o superior a 16, 14 Svedbergs.

8. Una composición adyuvante polinucleotídica que comprende un ácido polirriboinosínico polirribocitidílico (PIC) , kanamicina y un ión de calcio, en la que la composición contiene moléculas heterogéneas en la composición adyuvante polinucleotídica en cuanto al peso molecular, donde el intervalo de peso molecular es de 66.000 a

1.200.000 Daltons o de tamaño es de 6, 4 a 24, 0 Svedbergs.

9. La composición adyuvante de la reivindicación 8, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un intervalo de peso molecular de 300.000 a 1.200.000 Daltons o un intervalo de tamaño molecular de 12, 8 a 24, 0 Svedbergs.

10. La composición adyuvante de la reivindicación 8, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un intervalo de peso molecular de 337.000 a 1.200.000 Daltons o un intervalo de tamaño molecular de 13, 5 a 24, 0 Svedbergs.

11. La composición adyuvante de la reivindicación 8, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un intervalo de tamaño molecular de 13, 5 a 24, 0 Svedbergs.

12. La composición adyuvante de la reivindicación 8, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un intervalo de peso molecular de 66.000 a 660.000 Daltons o un intervalo de peso tamaño de 6, 4 a 18, 3 Svedbergs.

13. La composición adyuvante de la reivindicación 8, en la que la composición adyuvante polinucleotídica tiene un intervalo de peso molecular de 300.000 a 660.000 Daltons o un intervalo de tamaño molecular de 12, 8 a 18, 3 Svedbergs.

14. La composición adyuvante de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la fuente de iones de calcio es cloruro cálcico, carbonato cálcico, fluoruro cálcico, hidróxido cálcico, fosfatos de calcio o sulfato cálcico.

15. La composición adyuvante de las reivindicaciones 1 a 13, en la que kanamicina es sulfato de kanamicina y el ión de calcio es proporcionado por cloruro cálcico.

16. Una composición inmunogénica que comprende la composición adyuvante polinucleotídica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un antígeno.

17. La composición inmunogénica de la reivindicación 16, en la que la fuente del antígeno es un humano, un animal no humano, vegetal, bacteriano, fúngico, un parásito o un cáncer.

18. La composición inmunogénica de la reivindicación 16, en la que el antígeno es un antígeno del virus de la rabia.

19. La composición inmunogénica de la reivindicación 18, en la que el antígeno es un antígeno del virus de la rabia purificado inactivado obtenido en células de riñón de hámster.

20. La composición inmunogénica de la reivindicación 19, en la que la presencia del antígeno del virus de la rabia purificado inactivado obtenido en células de riñón de hámster es superior a 1 unidad internacional.

21. La composición inmunogénica de la reivindicación 19, en la que la proporción entre la composición adyuvante polinucleotídica y el antígeno del virus de la rabia purificado inactivado obtenido en células de riñón de hámster es superior a 3 a 1.

22. Una composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21 en un tampón fisiológicamente aceptable.

23. La composición inmunogénica de una cualquiera de la reivindicaciones 16 a 22 en la que la composición inmunogénica es una vacuna.

24. La composición adyuvante o composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la composición inmunogénica o la composición adyuvante está en forma sólida o líquida, en solución o en suspensión.

25. La composición adyuvante o composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, en la que la composición adyuvante y / o la composición inmunogénica están liofilizadas.

26. La composición adyuvante o composición inmunogénica según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en un procedimiento desencadenamiento o potenciación de una respuesta inmunitaria frente a un antígeno en un huésped.

27. La composición adyuvante o la composición inmunogénica para su uso según la reivindicación 26 en la que el procedimiento comprende administrar el adyuvante junto con un antígeno.

28. Una composición adyuvante, una composición inmunogénica o una vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones 1-25 para su uso en un procedimiento de desencadenamiento o potenciación de una respuesta inmunitaria en un humano.

29. Uso de un compuesto adyuvante polinucleotídico de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para la preparación de un medicamento para potenciar la respuesta inmunogénica de un huésped.

30. El uso de la reivindicación 29 en el que el huésped es humano.

31. El uso de la reivindicación 29 en el que el huésped es un animal.

32. Un kit que comprende la composición adyuvante de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un compuesto antigénico.