Uso de población de células nerviosas cultivadas transfectadas in vitro con un vector plasmídico o viral recombinante generado que comprende una secuencia de ADN que codifica una proteína morfogenética ósea ("BMP") ligada operativamente a un promotor,

para la preparación de un medicamento para regenerar o evitar la degeneración de un nervio lesionado, en el que las células nerviosas transfectadas se trasplantan a un área cerca del nervio lesionado, de modo que la expresión de la secuencia de ADN dentro del área cerca del nervio lesionado provoque regeneración del nervio.

Regeneración de nervios

5 Antecedentes de la invención

1. Campo de la invención:

La presente invención se refiere a la prevención de degeneración de nervios y promoción de la regeneración de nervios usando terapia basada en células.

2. Antecedentes Generales y Estado de la Técnica:

Se han realizado numerosos estudios sobre la regeneración de nervios para nervios lesionados. En general, el tratamiento quirúrgico clínico para lesión traumática de nervio periférico emplea una compleja serie de etapas que implican primero retirar los tejidos dañados cerca del sitio localizado de la lesión y proporcionar un ambiente que permita la regeneración del nervio periférico (Kline, J Neu-rosurg, 1989, 70: 166-174) . La mecánica del procedimiento quirúrgico típicamente implica directamente conectar o fusionar la parte superior e inferior del área lesionada (Kline y Judice, J Neurosurg, 1983, 58: 631-649) . Métodos quirúrgicos adicionales tales como trasplante de nervio periférico (Millesi, Clin Orthop, 1988, 237: 36-42) así como tratamientos de pacientes externos más conservativos tales como mantener la estimulación eléctrica para generar contracción muscular que ayuda a inhibir la degeneración de las uniones neuromusculares mientras se espera a la regeneración voluntaria del nervio (Kim et al., Korean Academy of Rehabilitation Medicine (coreano) , 1999, 23: 893-8983; al-Amood et al., J Physiol (Lond) , 1991, 441: 243-256) . Finalmente, la mayoría de estos procedimientos implican aún regímenes de terapia física exhaustivos que implican terapia de ejercicio controlado y a largo plazo para evitar el debilitamiento y contracción muscular y para promover el crecimiento colateral de nervios (Pyun et al., Korean Academy of Rehabilitation Medicine (coreano) , 1999, 23; 10631075) .

El documento US 2003/032 098 A1 describe el uso de proteína morfogenética ósea (BMP) para reparación del cartílago/hueso, formación o mantenimiento por administración directa del polipéptido o después de transfectar células fibroblásticas.

Patrick C. W., Tissue Engineering, vol. 7, nº 3, junio de 2001, páginas 303-311, describe la modificación exitosa por ingeniería de fibroblastos dérmicos humanos para secretar NGF. Se usó un modelo animal para ensayar con respecto a expresión o secreción de NGF, por inyección intramuscular.

Con frecuencia, se usan dispositivos ortopédicos mecánicos para proteger las articulaciones y evitar daño del músculo y ligamentos que rodean al área afectada (Gravois, Physical Medicine and Rehabilitation, Massachusetts: Blackwell Science, 2000, pág. 432-433) . Además, diversas técnicas experimentales para la regeneración de nervios también implican el uso de tubos biosintéticos para conectar nervios o están en combinación con agentes farmacéuticos que actúan colectivamente para reducir el daño del nervio y estimular la regeneración del nervio (al-Amood etal., J Physiol (Lond) , 1991, 441:243-256; Dumitru, In: Dumitru, editor. Electrodiagnostic medicine, 1ª ed, Philadelphia: Hanley & Belfus, 1995, pp341-384; Ebara y Nakayama, Spine, 2002, 16S: S10-S15; Horowitz, Muscle Nerve, 1989, 12: 314-322; Matzuk et al., Nature, 1995, 374: 360-363; Mengs, Arch Int Pharmacodyn Therp, 1984, 45 271 (2) : 315-323) .

Por lo tanto, existe la necesidad de regenerar o prevenir la degeneración del nervio lesionado y en particular el nervio periférico.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un uso como se define en la reivindicación 1. La BMP puede ser BMP-2 o BMP-9. Además, el nervio puede ser nervio periférico. El vector puede ser un vector viral. El vector puede ser un vector retroviral, vector viral adenoasociado, vector adenoviral o vector viral de herpes.

55 Además, la población de células puede almacenarse antes del transplante tal como en DMSO 10 % en nitrógeno líquido.

Breve descripción de los dibujos

La presente invención se entenderá más completamente a partir de la descripción detallada proporcionada en este documento posteriormente y los dibujos adjuntos que se proporcionan como ilustración solamente y por lo tanto no son limitantes de la presente invención, y en los que;

Las FIGURAS 1A-1B muestran un examen microscópico del nervio ciático de rata 2 semanas después de lesión en 65 el grupo de BMP-9, que muestra degeneración muy grave de axones y vaina de mielina y cambios vacuolados prominentes. Las FIGURAS 1A-1B también muestran una infiltración significativa de células inflamatorias mononucleares en el tejido blando perineural (A; tinción H y E, B; tinción con Tricromo modificado 200 X) .

Las FIGURAS 2A-2B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 4 semanas después de lesión en el grupo de BMP-9, que muestra aproximadamente el 70 % del área lesionada está ocupada por cambio vacuolado. 5 Se observan algunas cámaras de digestión de mielina y también se observa fibrosis endoneural leve (A; tinción H y E, B; tinción con Tricromo modificado 200 X) .

Las FIGURAS 3A-3C muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 8 semanas después de lesión en el grupo de BMP-9, que muestra cambios vacuolados en aproximadamente el 50 % de los axones. Se infiltran varias células inflamatorias mononucleares en el espacio epineural. También está presente hemorragia focal en el haz nervioso. (A; tinción H y E X 200, B y C; tinciones con Tricromo modificado 200 X y 100 X, respectivamente.

Las FIGURAS 4A-4B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 8 semanas después de lesión en el grupo de BMP-9, que muestra cambios vacuolados en aproximadamente 33 % de los axones. Algunas células inflamatorias mononucleares permanecen en el espacio epineural (A y B; tinciones de Tricromo modificado 200 X)

Las FIGURAS 5A-5B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 2 semanas después de lesión en el grupo de BMP-2, que muestra cambios vacuolares en la mayoría de los axones. Se observa atrofia axonal y desmielinización en el centro. (A y B; tinciones de Tricromo modificado 100 X y 200 X, respectivamente) .

Las FIGURAS 6A-6B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 4 semanas después de lesión en el grupo de BMP-2, que muestra cambios vacuolares en aproximadamente la mita de los axones. Se observa desmielinización con fibrosis endoneural leve. (A y B; tinciones de Tricromo modificado 100 X y 200 X, respectivamente) .

Las FIGURAS 7A-7B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 8 semanas después de lesión en el grupo de BMP-2, que muestra cambios vacuolados en aproximadamente la mitad de los axones. Algunas células inflamatorias mononucleares permanecen en el espacio epineural. (A y B; tinciones de Tricromo modificado 100 X y 200 X, respectivamente) .

Las FIGURAS 8A-8B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 2 semanas después de lesión en grupo de simulación, que muestra que todos los axones se degeneran y se infiltran células inflamatorias mononucleares en la periferia de los axones. También se observa fibrosis epineural. (A y B; tinciones de Tricromo modificado 100 X y 200 X, respectivamente) .

Las FIGURAS 9A-9B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 4 semanas después de lesión en grupo de simulación, que muestra que aproximadamente el 33 % de los axones se degeneran y los cambios vacuolares son prominentes. (A y B; tinciones de Tricromo modificado 100 X y 200 X, respectivamente) .

Las FIGURAS 10A-10B muestran examinación microscópica del nervio ciático de rata 8 semanas después de lesión en grupo de simulación, que muestra que aproximadamente 10-20 % de los axones se degeneran y los cambios vacuolares son prominentes. (A y B; tinciones de Tricromo modificado 100 X y 200 X, respectivamente) .

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

45 En la presente solicitud, “un” y “una” se usan para referirse tanto a uno sencillo como a una pluralidad de objetos.

Como se usa en este documento, la expresión “célula de tejido conectivo” o “células de un tejido conectivo” incluye células que se hallan en el tejido conectivo, tales como fibroblastos, células de cartílago (condrocitos) y células del hueso (osteoblastos/osteocitos) , que secretan matriz extracelular de colágeno, así como células grasas (adipocitos) y células... [Seguir leyendo]

1. Uso de población de células nerviosas cultivadas transfectadas in vitro con un vector plasmídico o viral recombinante generado que comprende una secuencia de ADN que codifica una proteína morfogenética ósea (“BMP”) ligada operativamente a un promotor, para la preparación de un medicamento para regenerar o evitar la degeneración de un nervio lesionado, en el que las células nerviosas transfectadas se trasplantan a un área cerca del nervio lesionado, de modo que la expresión de la secuencia de ADN dentro del área cerca del nervio lesionado provoque regeneración del nervio.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el factor de crecimiento transformante es BMP-2 y BMP-9.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el nervio es nervio periférico.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el vector es un vector viral, en particular vector retroviral, 15 vector viral adenoasociado, vector adenoviral o vector viral de herpes.

5. El uso de la reivindicación 1, en el que dicha población de células se almacena antes del trasplante.

6. El uso de la reivindicación 1, en el que dicha población de células transfectadas se almacena en DMSO 10 % en 20 nitrógeno líquido antes del trasplante.