Un sistema de modulación de la expresión génica que comprende:

a) un primer casete de expresión génica que se puede expresar en una célula huésped que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un primer polipéptido híbrido que comprende:

i) un dominio de unión a ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se quiere modular; y

ii) un dominio de unión a ligando de receptor de ecdisona; y

b) un segundo casete de expresión génica que se puede expresar en la célula huésped que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un segundo polipéptido híbrido que comprende:

i) un dominio de transactivación; y

ii) un dominio de unión a ligando de receptor X retinoide quimérico que comprende, o bien (A) las hélices 1-7 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 8-12 de un RXR de invertebrado, o bien (B) las hélices 1-8 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 9-12 de un RXR de invertebrado, en el que el invertebrado es una especie que no es díptero ni es lepidóptero.

Receptores X retinoides quiméricos y su uso en un sistema inducible de expresión génica basado en receptores de ecdisona novedoso 5

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de la biotecnología o ingeniería genética. Específicamente, la presente invención se refiere al campo de la expresión génica. Más específicamente, la presente invención se refiere a un sistema inducible de expresión génica basado en receptores X retinoides quiméricos/receptores de ecdisona novedoso y a métodos de modulación de la expresión de un gen en una célula huésped usando este sistema inducible de expresión génica.

Antecedentes de la invención

La mención de cualquier referencia en el presente documento no debe considerarse una admisión de que dicha referencia está disponible como "técnica anterior" de la presente solicitud.

En el campo de la ingeniería genética, el control preciso de la expresión génica es una herramienta útil para el estudio, la manipulación y el control del desarrollo y otros procesos fisiológicos. La expresión génica es un proceso biológico complejo que implica una serie de interacciones proteína-proteína específicas. Para desencadenar la expresión génica, de forma que produzca el ARN necesario como la primera etapa de la síntesis de proteínas, debe aproximarse un activador de la transcripción a un promotor que controle la transcripción génica. Normalmente, el propio activador de la transcripción está asociado con una proteína que tiene al menos un dominio de unión a ADN

que se une a sitios de unión a ADN presentes en las regiones promotoras de genes. Por tanto, para que se produzca la expresión génica, una proteína que comprenda un dominio de unión a ADN y un dominio de transactivación a una distancia apropiada del dominio de unión a ADN debe situarse en la posición correcta en la región promotora del gen.

El enfoque transgénico tradicional utiliza un promotor específico de célula para dirigir la expresión de un transgén diseñado. En primer lugar, se incorpora en un genoma huésped una construcción de ADN que contiene el transgén. Cuando se desencadena por un activador de la transcripción, se produce la expresión del transgén en un tipo celular determinado.

Otro medio para regular la expresión de genes exógenos en células es por medio de promotores inducibles. Los ejemplos del uso de estos promotores inducibles incluyen el promotor PR1-a, sistemas procariotas de represoroperador, sistemas de inmunofilina inmunosupresores y sistemas de activación de la transcripción de eucariotas superiores, tales como sistemas de receptores de hormonas esteroideas, y se describen a continuación.

El promotor PR1-a del tabaco se induce durante la respuesta sistémica de resistencia adquirida tras un ataque patógeno. El uso de PR1-a puede ser limitado porque, frecuentemente, responde a materiales endógenos y factores externos tales como patógenos, radiación UV-B y contaminantes. Se han descrito sistemas de regulación génica basados en promotores inducidos por choque térmico, interferón y metales pesados (Wurn et al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 5414-5418; Arnheiter et al., 1990, Cell 62: 51-61; Filmus et al., 1992, Nucleic Acids Research 20:

45 27550-27560) . Sin embargo, estos sistemas presentan limitaciones debido a su efecto sobre la expresión de genes que no son su objetivo. Estos sistemas también son poco consistentes.

Los sistemas procariotas de represor-operador utilizan proteínas represoras bacterianas y las secuencias de ADN de operador único a las que se unen. Tanto el sistema de represor-operador de tetraciclina ("Tet") como el de lactosa ("Lac") de la bacteria Escherichia coli se han usado en plantas y animales para controlar la expresión génica. En el sistema Tet, la tetraciclina se une a la proteína represora TetR, dando lugar a un cambio conformacional que libera la proteína represora del operador, que como consecuencia, permite que se produzca la transcripción. En el sistema Lac, se activa un operón lac en respuesta a la presencia de lactosa o análogos sintéticos tales como isopropil-b-Dtiogalactósido. Desafortunadamente, el uso de estos sistemas está restringido por la química inestable de los

55 ligandos, es decir, tetraciclina y lactosa, su toxicidad, su presencia natural o los niveles relativamente altos necesarios para la inducción o la represión. Por motivos similares, la utilidad en animales de estos sistemas es limitada.

Las moléculas inmunosupresoras tales como FK506, rapamicina y ciclosporina A se pueden unir a inmunofilinas FKBP12, ciclofilina, etc. Usando esta información se ha ideado una estrategia general para juntar dos proteínas cualesquiera simplemente situando FK506 sobre cada una de las dos proteínas o situando FK506 sobre una y ciclosporina A sobre la otra. Después, se puede usar un homodímero sintético de FK506 (FK1012) o un compuesto resultante de la fusión de FK506-ciclosporina (FKCsA) para inducir la dimerización de estas moléculas (Spencer et al., 1993, Science 262:1019-24; Belshaw et al., 1996, Proc Natl Acad Sci USA 93:4604-7) . El dominio de unión a 65 ADN de Gal4 fusionado con FKBP12 y el dominio activador VP16 fusionado con ciclofilina, y el compuesto FKCsA se usaron para mostrar la heterodimerización y activación de un gen indicador bajo el control de un promotor que

contiene sitios de unión a Gal4. Desafortunadamente, este sistema incluye inmunosupresores que pueden tener efectos secundarios no deseados y, por lo tanto, limita su uso para diversas aplicaciones de interruptores génicos de mamífero.

También se han empleado sistemas de activación de la transcripción de eucariotas superiores, tales como sistemas de receptores de hormonas esteroideas. Los receptores de hormonas esteroideas son miembros de la superfamilia de receptores nucleares y se encuentran en células de vertebrado e invertebrado. Desafortunadamente, el uso de compuestos esteroideos que activan los receptores para la regulación de la expresión génica, en particular en plantas y mamíferos, está limitado debido a su implicación en muchas otras rutas biológicas naturales en estos organismos. Para superar estas dificultades, se ha desarrollado un sistema alternativo usando receptores de ecdisona (EcR) de insecto.

El crecimiento, la muda y el desarrollo de los insectos están regulados por la hormona esteroidea ecdisona (hormona de la muda) y las hormonas juveniles (Dhadialla, et al., 1998, Annu. Rev. Entomol. 43: 545-569) . El objetivo

molecular de la ecdisona en insectos consiste en al menos un receptor de ecdisona (EcR) y una proteína ultraespiráculo (USP) . El EcR es un miembro de la superfamilia de receptores esteroideos nucleares que se caracteriza por dominios de unión a ADN distintivo y a ligando y un dominio de activación (Koelle et al. 1991, Cell, 67:59-77) . Los receptores EcR son sensibles a una serie de compuestos esteroideos tales como ponasterona A y muristerona A. Recientemente, se han descrito compuestos no esteroideos con actividad ecdiesteroide agonista, incluidos los insecticidas comercialmente disponibles tebufenozida y metoxifenozida, que se comercializan en todo el mundo por Rohm and Haas Company (véase la solicitud de patente internacional n.º PCT/EP96/00686 y la patente de EE. UU. 5.530.028) . Ambos análogos tienen perfiles de seguridad excepcionales para otros organismos.

Las solicitudes de patente internacional N.º PCT/US97/05330 (documento WO 97/38117) y PCT/US99/08381

(documento WO 99/58155) divulgan métodos para modular la expresión de un gen exógeno en los que una construcción de ADN que comprende el gen exógeno y un elemento de respuesta a ecdisona se activa por una segunda construcción de ADN que comprende un receptor de ecdisona que, en presencia de un ligando para ello, y opcionalmente en presencia de un receptor que puede actuar como compañero silencioso, se une al elemento de respuesta a ecdisona para inducir la expresión génica. El receptor de ecdisona elegido se aisló a partir de Drosophila melanogaster. Normalmente, estos sistemas requieren la presencia de un compañero silencioso, preferentemente un receptor X retinoide (RXR) , para proporcionar una activación óptima. En células de mamífero, el receptor de ecdisona de insecto (EcR) forma un heterodímero con el receptor X retinoide (RXR) y regula la expresión de genes objetivo de manera dependiente de ligando. La solicitud de patente internacional N.º PCT/US98/14215... [Seguir leyendo]

1. Un sistema de modulación de la expresión génica que comprende:

a) un primer casete de expresión génica que se puede expresar en una célula huésped que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un primer polipéptido híbrido que comprende:

i) un dominio de unión a ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se quiere modular; y

ii) un dominio de unión a ligando de receptor de ecdisona; y

b) un segundo casete de expresión génica que se puede expresar en la célula huésped que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un segundo polipéptido híbrido que comprende:

i) un dominio de transactivación; y

ii) un dominio de unión a ligando de receptor X retinoide quimérico que comprende, o bien (A) las hélices 1-7 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 8-12 de un RXR de invertebrado, o bien (B) las hélices 1-8 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 9-12 de un RXR de invertebrado, en el que el invertebrado es una especie que no es díptero ni es lepidóptero.

2. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además un casete de expresión que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión a ADN del primer polipéptido híbrido;

ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido; y

iii) un gen cuya expresión se quiere modular.

3. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el dominio de unión a ligando (LBD) del receptor de ecdisona del polipéptido híbrido es un LBD de EcR de gusano de las yemas de la pícea Choristoneura fumiferana ("CfEcR") o un LBD de EcR de la mosca de la fruta Drosophila melanogaster ("DmEcR") .

4. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el dominio de unión a ligando del receptor de ecdisona del primer polipéptido híbrido está codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 65 (CfEcR-DEF) , SEQ ID NO: 59 (CfEcR-CDEF) y SEQ ID NO: 67 (DmEcR-DEF) .

5. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el dominio de unión a ligando del receptor de ecdisona del primer polipéptido híbrido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 57 (CfEcR-DEF) , SEQ ID NO: 58 (DmEcR-DEF) y SEQ ID NO: 70 (CfEcR-CDEF) .

6. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico del segundo polipéptido híbrido está codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en

a) Los nucleótidos 1-408 de la SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los nucleótidos 1-465 de la SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

7. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico del segundo polipéptido híbrido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

8. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el primer casete de expresión génica comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica el primer polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión a ADN seleccionado del grupo que consiste en un dominio de unión a ADN GAL4 y un dominio de unión a ADN LexA, y un dominio de unión a ligando del receptor de ecdisona.

9. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el segundo casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el segundo polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación seleccionado del grupo que consiste en un dominio de transactivación VP16 y un dominio de transactivación activador ácido B42, y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico.

10. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el segundo casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el segundo polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en un AD de VP16 (SEQ ID NO: 51) y un AD de B42 (SEQ ID NO: 53) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en

a) los nucleótidos 1-408 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los nucleótidos 1-465 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

11. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el segundo casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el segundo polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en un AD de VP16 (SEQ ID NO: 52) y un AD de B42 (SEQ ID NO: 54) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

12. Un sistema de modulación de la expresión génica que comprende:

a) un primer casete de expresión génica que se puede expresar en una célula huésped que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un primer polipéptido híbrido que comprende: i) un dominio de unión a ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se

quiere modular; y ii) un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico que comprende (A) las hélices 1-7 de un receptor

X retinoide de vertebrado y las hélices 8-12 de un RXR de invertebrado, o bien (B) las hélices 1-8 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 9-12 de un RXR de invertebrado, en el que el invertebrado es una especie que no es díptero ni es lepidóptero; y b) un segundo casete de expresión génica que se puede expresar en la célula huésped que comprende una

secuencia polinucleotídica que codifica un segundo polipéptido híbrido que comprende: i) un dominio de transactivación; y ii) un dominio de unión a ligando de receptor de ecdisona.

13. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, que comprende además un casete de expresión que comprende: i) un elemento de respuesta que reconoce el dominio de unión a ADN del primer polipéptido híbrido;

ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido; y iii) un gen cuya expresión se quiere modular.

14. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico del primer polipéptido híbrido está codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en

a) los nucleótidos 1-408 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los nucleótidos 1-465 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

15. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el dominio de

unión a ligando del receptor X retinoide quimérico del primer polipéptido híbrido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

16. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el dominio de unión a ligando del receptor de ecdisona del segundo polipéptido híbrido está codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 65 (CfEcR-DEF) , SEQ ID NO: 59 (CfEcR-CDEF) y SEQ ID NO: 67 (DmEcR-DEF) .

17. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el dominio de unión a ligando del receptor de ecdisona del segundo polipéptido híbrido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 57 (CfEcR-DEF) , SEQ ID NO: 58 (DmEcR-DEF) y SEQ ID NO: 70 (CfEcR-CDEF) .

18. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el primer casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el primer polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión a ADN seleccionado del grupo que consiste en un dominio de unión a ADN GAL4 y un dominio de unión a ADN LexA, y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico.

19. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el primer casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el primer polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión a ADN codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en un DBD de GAL4 (SEQ ID NO: 47) y un DBD de LexA (SEQ ID NO: 49) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en

a) los nucleótidos 1-408 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los nucleótidos 1-465 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

20. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el primer casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el primer polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión a ADN que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en un DBD de GAL4 (SEQ ID NO: 48) y un DBD de LexA (SEQ ID NO: 50) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

21. El sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el segundo casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica el segundo polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación seleccionado del grupo que consiste en un dominio de transactivación VP16 y un dominio de transactivación activador ácido B42, y un dominio de unión a ligando del receptor de ecdisona.

22. Un casete de expresión génica que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido que comprende

a) un dominio de unión a ADN y

b) un dominio de unión a ligando de receptor X retinoide quimérico que comprende, o bien i) las hélices 1-7 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 8-12 de un RXR de invertebrado, o bien ii) las hélices 1-8 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 9-12 de un RXR de invertebrado, en el que el invertebrado es una especie que no es díptero ni es lepidóptero.

23. El casete de expresión génica de acuerdo con la reivindicación 22, en el que el dominio de unión a ADN es un dominio de unión a ADN GAL4 o un dominio de unión a ADN LexA.

24. El casete de expresión génica de acuerdo con la reivindicación 22, en el que el casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión a ADN codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en un DBD de GAL4 (SEQ ID NO: 47) y un DBD de LexA (SEQ ID NO: 49) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos

nucleicos seleccionada del grupo que consiste en a) los nucleótidos 1-408 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y b) los nucleótidos 1-465 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

25. El casete de expresión génica de acuerdo con la reivindicación 22, en el que el casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión a ADN que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en un DBD de GAL4 (SEQ ID NO: 48) y un DBD de LexA (SEQ ID NO: 50) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

26. Un casete de expresión génica que comprende

a) un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación y

b) un dominio de unión a ligando de receptor X retinoide quimérico que comprende, o bien i) las hélices 1-7 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 8-12 de un RXR de invertebrado, o bien ii) las hélices 1-8 de un receptor X retinoide de vertebrado y las hélices 9-12 de un RXR de invertebrado, en el que el invertebrado es una especie que no es díptero ni es lepidóptero.

27. El casete de expresión génica de acuerdo con la reivindicación 26, en el que el dominio de transactivación es un dominio de transactivación VP16 o un dominio de transactivación activador ácido B42.

28. El casete de expresión génica de acuerdo con la reivindicación 26, en el que el casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en un AD de VP16 (SEQ ID NO: 51) y un AD de B42 (SEQ ID NO: 53) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en

a) los nucleótidos 1-408 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los nucleótidos 1-465 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

29. El casete de expresión génica de acuerdo con la reivindicación 28, en el que el casete de expresión génica comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en un AD de VP16 (SEQ ID NO: 52) y un AD de B42 (SEQ ID NO: 54) y un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y

b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

30. Un polinucleótido aislado que codifica un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico, en el que el polinucleótido comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en

a) los nucleótidos 1-408 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

33. 630 de la SEQ ID NO: 21, y b) los nucleótidos 1-465 de SEQ ID NO: 13 y los nucleótido.

40. 630 de la SEQ ID NO: 21.

31. Un polipéptido aislado codificado por el polinucleótido aislado de acuerdo con la reivindicación 30.

32. Un polipéptido del receptor X retinoide quimérico aislado que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

a) los aminoácidos 1-136 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

11. 210 de la SEQ ID NO: 21, y b) los aminoácidos 1-155 de la SEQ ID NO: 13 y los aminoácido.

13. 210 de la SEQ ID NO: 21.

33. Un método in vitro de modulación de la expresión de un gen en una célula huésped que comprende el gen que

se quiere modular que comprende las etapas de: a) introducir en la célula huésped el sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1; y 5

b) introducir en la célula huésped un ligando; en el que el gen que se quiere modular es un componente de un casete de expresión génica que comprende: i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión a ADN del primer polipéptido híbrido; ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido; y iii) un gen cuya expresión se quiere modular;

de modo que después de la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión del gen de b) iii) .

34. El método de acuerdo con la reivindicación 33, en el que el ligando es un compuesto de la fórmula:

en la que: E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario; 25 R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN o SCHF2; R2

es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, CI, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3 OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3 CH=CHCN, alilo, azido, OCF3 OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN, o se une con R3 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R3 es H, Et, o se une con R2 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un 35 anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, CI, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2O, CN, C=CH, CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe o SEt.

35. El método de acuerdo con la reivindicación 33, que comprende además introducir en la célula huésped un segundo ligando, en el que el segundo ligando es ácido 9-cis-retinoico o un análogo sintético de un ácido retinoico.

36. Un método in vitro de modulación de la expresión de un gen en una célula huésped que comprende el gen que 45 se quiere modular que comprende las etapas de:

a) introducir en la célula huésped el sistema de modulación de la expresión génica de la reivindicación 12; y b) introducir en la célula huésped un ligando; en el que el gen que se quiere modular es un componente de un casete de expresión génica que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión a ADN del primer polipéptido híbrido; ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido; y

55 iii) un gen cuya expresión se quiere modular; de modo que después de la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión del gen de b) iii) .

37. El método de acuerdo con la reivindicación 36, en el que el ligando es un compuesto de la fórmula:

en la que:

E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario;

R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN o SCHF2;

R2

es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, CI, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3 OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3 CH=CHCN, alilo, azido, OCF3 OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN, o se une con R3 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R3 es H, Et, o se une con R2 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, CI, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CN, C=CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe o SEt.

38. El método de acuerdo con la reivindicación 36, que comprende además introducir en la célula huésped un segundo ligando, en el que el segundo ligando es ácido 9-cis-retinoico o un análogo sintético de un ácido retinoico.

39. Una célula huésped aislada que comprende el sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1.

40. La célula huésped aislada de acuerdo con la reivindicación 39, en la que la célula huésped se selecciona del grupo que consiste en una célula bacteriana, una célula fúngica, una célula de levadura, una célula animal y una célula de mamífero.

41. La célula huésped aislada de acuerdo con la reivindicación 40, en la que la célula de mamífero es una célula murina o una célula humana.

42. Una célula huésped aislada que comprende el sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 12.

43. La célula huésped aislada de acuerdo con la reivindicación 42, en la que la célula huésped se selecciona del grupo que consiste en una célula bacteriana, una célula fúngica, una célula de levadura, una célula animal y una célula de mamífero.

44. La célula huésped aislada de acuerdo con la reivindicación 43, en la que la célula de mamífero es una célula murina o una célula humana.

45. Un organismo no humano que comprende la célula huésped de la reivindicación 39.

46. El organismo no humano de acuerdo con la reivindicación 45, en el que el organismo no humano se selecciona del grupo que consiste en una bacteria, un hongo, una levadura, un animal y un mamífero.

47. El organismo no humano de acuerdo con la reivindicación 46, en el que el mamífero se selecciona del grupo que consiste en un ratón, una rata, un conejo, un gato, un perro, un bóvido, una cabra, un cerdo, un caballo, una oveja, un mono y un chimpancé.

48. Un organismo no humano que comprende la célula huésped de la reivindicación 42.

49. El organismo no humano de acuerdo con la reivindicación 48, en el que el organismo no humano se selecciona del grupo que consiste en una bacteria, un hongo, una levadura, un animal y un mamífero.

50. El organismo no humano de acuerdo con la reivindicación 49, en el que el mamífero se selecciona del grupo que consiste en un ratón, una rata, un conejo, un gato, un perro, un bóvido, una cabra, un cerdo, un caballo, una oveja,

un mono y un chimpancé.

51. El sistema de modulación de la expresión génica de la reivindicación 1 ó 12, en el que el sistema de modulación de la expresión génica presenta un incremento en la sensibilidad para un ligando no esteroide con respecto a un

sistema de modulación de la expresión génica que contiene un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico.

52. El casete de expresión génica de la reivindicación 22 ó 26, en el que el polipéptido presenta un incremento en la sensibilidad para un ligando no esteroide con respecto a un polipéptido que contiene un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico.

53. El sistema de modulación de la expresión génica de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 12 ó 51 en el que el sistema presenta un incremento en la magnitud de inducción génica en comparación con un sistema de modulación de la expresión génica que contiene un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico.

54. Los casetes de expresión génica de una cualquiera de las reivindicaciones 22, 26 ó 52 en el que el polipéptido presenta un incremento en la magnitud de inducción génica en comparación con un polipéptido que contiene un dominio de unión a ligando del receptor X retinoide quimérico.

55. Uso de un ligando en la fabricación de un medicamento para modular la expresión de un gen en una célula huésped que comprende el gen que se quiere modular; en el que la célula huésped comprende el sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo con la reivindicación 1, y en el que el gen que se quiere modular es un componente de un casete de expresión génica que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión a ADN del primer polipéptido híbrido;

ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido; y

iii) un gen cuya expresión se quiere modular.

56. Uso de acuerdo con la reivindicación 55, en el que el ligando es un compuesto de la fórmula:

en la que:

E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario;

R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN o SCHF2;

R2 es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1

propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, CI, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3 OCF2CF2H,

COEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3 OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN, o se une

45 con R3 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R3 es H, Et, o se une con R2 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, CI, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2O, CN, OCH, CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe o SEt.

57. Uso de acuerdo con la reivindicación 55, en el que dicho medicamento comprende además un segundo ligando, en el que el segundo ligando es un ácido 9-cis-retinoico o un análogo sintético de un ácido retinoico.

58. Uso de un ligando en la fabricación de un medicamento para modular la expresión de un gen en una célula huésped que comprende el gen que se quiere modular; en el que la célula huésped comprende el sistema de modulación de la expresión génica de acuerdo de la reivindicación 12, y en el que el gen que se quiere modular es

un componente de un casete de expresión génica que comprende: i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión a ADN del primer polipéptido híbrido; 5 ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido; y iii) un gen cuya expresión se quiere modular.

59. Uso de acuerdo con la reivindicación 58, en el que el ligando es un compuesto de la fórmula:

en la que:

E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario;

R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN o SCHF2;

R2

es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, CI, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3, OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3, OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN, o se une con R3 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de

fenilo;

R3 es H, Et, o se une con R2 y los carbonos de fenilo a los que están unidos R2 y R3 para formar un etilendioxilo, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo;

R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, CI, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CN, C=CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe o SEt.

60. Uso de acuerdo con la reivindicación 58, en el que dicho medicamento comprende además un segundo ligando, 35 en el que el segundo ligando es un ácido 9-cis-retinoico o un análogo sintético de un ácido retinoico.