PÉPTIDOS PARA LA REGULACIÓN DE UROQUINASA (uPA) Y ACTIVADOR DE PLASMINÓGENO DE TIPO TEJIDO (tPA) Y MÉTODO PARA OPTIMIZAR LA EFICACIA TERAPÉUTICA.

- Un polipéptido Ac-RMAPEEIIMDRFLYVVR-amida que tiene un efecto inhibidor sobre la vasoactividad inducida por activadores de plasminógeno,

en donde el polipéptido tiene la secuencia de aminoácidos: Ac-Arg-Met-Ala-Pro- Glu-Glu-Ile-Ile-Met-Asp-Arg-Pro-Phe-Leu-Tyr-Val-Val-Arg-Amida

Peptidos para la regulaci6n de uroquinasa (uPA) y activador de plasmin6geno de tipo tejido (tPA) y metodo para optimizar la eficacia terapeutica CAMPO DE LA INVENCION

Esta invenci6n describe un peptido que comprende seis aminoacidos (EEIIMD) (SEC ID N°: 1) o una amida de dieciocho amino acidos (Ac-RMAPEEIIDRPFLYVVR) (SEC ID N°: 2) que tiene la propiedad de unirse al sitio de "acoplamiento" del activador de plasmin6geno de uroquinasa (uPA) y en el activador de plasmin6geno de tipo tejido (tPA) fuera del centro activo. La invenci6n tambien se refiere a la regulaci6n de la actividad cuando se administra tPA o uPA en el tratamiento de la apoplejfa isquemica, en particular a la capacidad del tPA o del uPA para inducir una hemorragia intracerebral (ICH) , al activador de plasmin6geno de uroquinasa de cadena sencilla (scuPA) para deshacer coagulos sangufneos que provocan apoplejfas o infartos de miocardio.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

El activador de plasmin6geno de tipo tejido es la unica terapia para la apoplejfa tromboemb6lica aguda, que esta aprobada por la Administraci6n de Alimentos y Farmacos (FDA, "Food and Drug Administration") . Sin embargo, hay 15 razones para la preocupaci6n porque el uso de tPA para el tratamiento de la apoplejfa isquemica puede exponer a los pacientes a una hemorragia intracerebral secundaria. Wardlaw JC y col., Lancet 1997, 350: 607-614. Esto es debido a que existe aproximadamente un seis por ciento de incidencia de una posterior hemorragia intracerebral sintomatica y aproximadamente el cincuenta por ciento de estos pacientes fallecen. La aparici6n de hemorragia intracerebral despues del tratamiento con tPA se atribuye a su capacidad para interferir con la vasoactividad normal de los vasos sangufneos cerebrales. Se ha demostrado que el tPA tiene efectos vasoconstrictores o vasodilatadores dependientes de la dosis ademas de promover la activaci6n de plasmin6geno.

El activador de plasmin6geno de tipo tejido es una molecula natural liberada por las celulas endoteliales vasculares, y se produce una desaparici6n rapida de tPA de la sangre por eliminaci6n en el hfgado. Los hepatocitos expresan la protefna relacionada con receptor de lipoprotefna de baja densidad o receptor de macroglobulina d2 que se une a tPA y a complejos de inhibidor de activador de plasmin6geno (PAI-1) con tPA y tcuPA. Alternativamente, las celulas endoteliales expresan un receptor dependiente de manosa de 170 kDa que tambien esta implicado en la desaparici6n rapida de tPA.

La pro-uroquinasa (Pro-UK) , tambien conocida como activador de plasmin6geno de uroquinasa de cadena sencilla (scuPA) , es una molecula natural liberada por las celulas endoteliales vasculares en respuesta a la formaci6n de coagulos sangufneos y otras afecciones patol6gicas. El scuPA o Pro-UK puede activarse mediante dos mecanismos diferentes: a) por ruptura de un unico enlace de peptido por acci6n de plasmina que conduce a la generaci6n de la forma activa compuesta por dos cadenas (tcuPA) , y b) por uni6n de scuPA a su receptor, el receptor de activador de plasmin6geno de uroquinasa (uPAR) .

El inhibidor de activador de plasmin6geno de tipo 1 (PAI-1) se une a tcuPA e inhibe su actividad catalftica. Sin embargo, el PAI-1, que se une a tcuPA con una elevada afinidad, se une s6lo con baja afinidad a scuPA, si es que se une.

El inhibidor de activador de plasmin6geno de tipo 1 interactua tanto con tPA como con uPA e inhibe la actividad catalftica de ambas protefnas. El PAI-1, que se une a tPA y uPA con una elevada afinidad esta presente a concentraciones elevadas en la circulaci6n de pacientes que padecen hipertensi6n. Y la reducci6n de la tensi6n sangufnea mediante tratamiento medico da como resultado un descenso de las concentraciones de PAI-1. El mecanismo de acci6n subyacente para el aumento de PAI-1 en determinadas afecciones patol6gicas no se comprende bien del todo. Sin embargo, la relaci6n inversa con el tPA y/o el uPA sugiere que el PAI-1 sirve para neutralizar de algun modo el efecto vasoactivo del tPA y/o uPA. Simmons M., Cardiol. Clin. 1995, 13: 339-345; Cipolla M. y col., Stroke, 2000, 31: 940-945; de PAI-1; y Higazi, A.A. R. y col., J. Biol. Chem., 1995, 270: 9472-9477.

45 Hasta la fecha no se ha evaluado la cuesti6n de si esto relaciona el aumento del nivel de concentraci6n de PAI-1 en determinadas afecciones patol6gicas y el tPA producido de forma natural, o de si existe una relaci6n entre el PAI-1 y la hemorragia intracerebral debido al uso de tPA producida comercialmente. La presente invenci6n esta dirigida a obtener un mejor entendimiento del control, si lo hay, de PAI-1 o tPA o uPA, y a proporcionar una composici6n o producto que sea 6ptimamente efectivo para regular la actividad de tPA o uPA, reduciendo con ello el riesgo de 50 hemorragia intracerebral en pacientes que reciben una terapia tromboemb6lica tal como tPA y/o uPA.

Se han investigado varias estrategias de terapia trombolftica, una de ellas sobre la infusi6n sistemica de activadores de las variedades naturales y de las recombinantes producidas comercialmente de agentes fibrinolfticos. La uroquinasa es un agente trombolftico activo a traves de la conversi6n de plasmin6geno en plasmina. La uroquinasa es una protefna compleja de estructura conocida que se encuentra en la orina en cantidades traza. Se han 55 desarrollado formas recombinantes de uroquinasa y su eficacia clfnica esta siendo evaluada, por ejemplo la Patente de EE.UU. 4.558.010 expedida para Abbott Laboratories describe un acido desoxirribonucleico recombinante que

codifica para la protefna de activador de plasmin6geno que tiene actividad de uroquinasa humana.

La presente invenci6n demuestra que un peptido de seis aminoacidos EEIIMD o un peptido de dieciocho aminoacidos (Ac-RMAPEEIIMDRPFLYVVR-amida) , puede reducir los efectos secundarios no deseados de los agentes fibrinolfticos, por ejemplo, el riesgo de hemorragia intracerebral en pacientes que reciben tPA, uPA, tcuPA, estreptoquinasa, rt-PA o alteplasa, derivados de rt-PA o complejo de estreptoquinasa anisoilada. En el protocolo empleado el peptido se introdujo en el regimen trombolftico en las etapas finales para prevenir los efectos vasoactivos o secundarios del agente trombolftico primario.

Hasta la fecha no se ha investigado la cuesti6n de si el peptido tiene algun efecto cuando se administra en la etapa inicial de la terapia trombolftica. La presente invenci6n describe algunos resultados inesperados obtenidos cuando el peptido se administra en combinaci6n con un activador de plasmin6geno justo desde el inicio de la terapia trombolftica. Los resultados son inesperados debido a que demuestran un efecto sinergico cuando el peptido y el activador de plasmin6geno se administran juntos en sistemas in vitro e in vivo. Por tanto, la presente invenci6n proporciona nuevas composiciones de diferentes activadores de plasmin6geno y el peptido, y metodos para optimizar la eficacia de los agentes trombolfticos en regfmenes terapeuticos de combinaci6n. Dicha estrategia sugiere que la dosis efectiva del agente trombolftico puede reducirse en presencia del peptido. Esto a su vez reduce el riesgo de efectos secundarios de estos agentes, manifestandose los efectos secundarios en la etapa final de la terapia.

RESUMEN DE LA INVENCION

La presente invenci6n tambien se refiere a la composici6n y al uso de un polipeptido como el reivindicado en la Reivindicaci6n 1.

Especfficamente, los polipeptidos son utiles para potenciar la actividad del agente trombolftico (que incluye, aunque sin limitaci6n, scuPA, tPA, uPA, tcuPA, estreptoquinasa, rt-PA o alteplasa, derivados de rt-PA (tales como reteplasa, lanoteplasa y TNK-rt-PA) , complejo de estreptoquinasa de plasmin6geno anisoilado (APSC) o anistreplasa, o derivado de estreptoquinasa) reduciendo con ello la dosis efectiva de agente trombolftico requerida para la prevenci6n y/o el tratamiento de trastornos tromboemb6licos.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

Las ventajas y caracterfsticas de la presente invenci6n seran facilmente percibidas tras leer la siguiente descripci6n detallada y figuras de referencia, que son:

Figura 1A: es un diagrama que describe los resultados de experimentos sobre el efecto de tPA en la contracci6n inducida por PE de anillos de aorta de rata aislados. La contracci6n de anillos a6rticos fue inducida aumentando las concentraciones de fenilefrina (PE) , en ausencia de tPA (triangulos rellenos) o en presencia de tPA 1nM (cuadrados rellenos) 6 20nM (cuadrados huecos) .

Figura 1B: describe los resultados de experimentos... [Seguir leyendo]

1. Un polipeptido Ac-RMAPEEIIMDRFLYVVR-amida que tiene un efecto inhibidor sobre la vasoactividad inducida por activadores de plasmin6geno, en donde el polipeptido tiene la secuencia de aminoacidos: Ac-Arg-Met-Ala-Pro5 Glu-Glu-Ile-Ile-Met-Asp-Arg-Pro-Phe-Leu-Tyr-Val-Val-Arg-Amida.

2. Una composici6n que comprende una cantidad efectiva del polipeptido Ac-RMAPEEIIMDRPFLYVVR-amida para prevenir hemorragias.

3. La composici6n de acuerdo con la reivindicaci6n 2, que ademas comprende un agente fibrinolftico seleccionado del grupo que consiste en scuPA, tPA, uPA, tcuPA, estreptoquinasa, rt-PA, alteplasa, derivados de rt-PA, reteplasa, 10 lanoteplasa, TNK-rt-PA, complejo de estreptoquinasa de plasmin6geno anisoilado, anistreplasa o un derivado de estreptoquinasa.

4. Una composici6n farmaceutica que comprende el polipeptido Ac-RMAPEEIIMDRPFLYVVR-amida.