Péptidos asociados a tumor unidos a moléculas MHC.

Péptido asociado a tumor, donde el péptido muestra la capacidad de unirse a una molécula del complejomayor de histocompatibilidad humano (MHC) de clase I,

seleccionado de,

a) una secuencia de aminoácidos compuesta de la secuencia SEQ ID n.º 303 (TMLARLASA),

b) un péptido conforme a a), en el que un aminoácido es sustituido por otro aminoácido con propiedadesquímicas similares, y

c) un péptido conforme a a) o b), en el que el extremo N y/o C dispone de otro aminoácido.

Péptidos asociados a tumor unidos a moléculas MHC.

La presente invención se refiere a péptidos asociados a tumor con la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I.

Los péptidos de este tipo son utilizados, por ejemplo, en la inmunoterapia de las enfermedades tumorales.

La identificación de antígenos asociados a tumores (TAA) mediante componentes del sistema inmune desempeña un papel fundamental en la destrucción de células tumorales por parte del sistema inmune. Este mecanismo se basa en la condición de que entre las células tumorales y las células normales existen diferencias cualitativas o cuantitativas. Para desencadenar una respuesta antitumoral, las células tumorales deben expresar antígenos contra los que se desencadene una respuesta inmunológica que sea suficiente para la destrucción del tumor.

Los linfocitos T citotóxicos que expresan la molécula CD8 (en adelante, CTL) tienen un papel importante en el rechazo a tumores. Para que se desencadene una reacción inmune de este tipo a través de los linfocitos T citotóxicos, deben presentarse proteínas o péptidos foráneos ante los linfocitos T. Los linfocitos T sólo reconocen a los antígenos como fragmentos de péptidos cuando éstos son presentados por moléculas MHC en la superficie de la célula. Estas moléculas MHC (major histocompatibility complex) son receptoras de péptidos que normalmente unen péptidos dentro de la célula para transportarlos a su superficie. Este complejo formado por el péptido y la molécula MHC puede ser detectado por los linfocitos T. Las moléculas MHC del ser humano también se conocen como «antígenos de leucocito humano» (HLA) .

Existen dos clases de moléculas MHC: Las moléculas MHC de clase I, que aparecen en la mayoría de células con núcleo, presentan péptidos producidos por degradación proteolítica de proteínas endógenas. Las moléculas MHC de clase II sólo aparecen en células especializadas presentadoras de antígenos (APC) y presentan péptidos de proteínas exógenas que, en el transcurso de la endocitosis, son absorbidos y transformados por las APC. Los complejos formados por péptido y MHC de clase I son reconocidos por linfocitos T citotóxicos CD8+, y los complejos formados por péptido y MHC de clase II son reconocidos por linfocitos T colaboradores CD4.

Para que un péptido pueda desencadenar una respuesta celular inmune, debe estar unido a una molécula MHC. Este proceso depende del alelo de la molécula MHC y de la secuencia de aminoácidos del péptido. Los péptidos unidos a moléculas MHC de clase I suelen tener de 8 a 10 residuos y contienen en su secuencia dos residuos conservados (anchor) , que interactúan con el surco de unión correspondiente de la molécula MHC.

Para que el sistema inmune pueda desencadenar una respuesta efectiva de CTL contra los péptidos derivados de tumor, es necesario que dichos péptidos, además de poder unirse a las moléculas MHC de clase I expresadas por las células tumorales, también sean reconocidos por linfocitos T con receptores específicos de linfocitos T (TCR, Tcell receptor) .

El objetivo principal para el desarrollo de una vacuna antitumoral es la identificación y caracterización de antígenos asociados a tumores que son reconocidos por CTL CD8+.

Los antígenos que son reconocidos por linfocitos T citotóxicos específicos de tumores o sus epítopos pueden ser moléculas de cualquier clase de proteína como, por ejemplo, encimas, receptores, factores de transcripción, etc. Otra clase importante de antígenos asociados a tumores son las estructuras específicas de tejidos, como por ejemplo los antígenos CT (cancer testis) , que se expresan en distintos tipos de tumor y en el tejido sano de los testículos.

Para que las proteínas sean reconocidas por los linfocitos T citotóxicos como antígenos específicos de tumores y, por lo tanto, puedan ser aplicadas como tratamiento, deben cumplirse determinadas condiciones: el antígeno debe estar expresado fundamentalmente por células tumorales, y no por tejido normal o en cantidades muy pequeñas en comparación con los tumores. En caso de que el antígeno en cuestión no sólo se exprese en un tipo de tumor, sino en varios, también es deseable que lo haga en concentraciones altas. También es esencial la presencia de epítopos en la secuencia de aminoácidos del antígeno, ya que los péptidos derivados de un antígeno asociado a un tumor («péptidos inmunógenos») desencadenan una respuesta de linfocitos T, ya sea in vitro o in vivo.

Los TAA representan así un punto de partida para el desarrollo de una vacuna antitumoral. Los métodos para la identificación y caracterización de los TAA consisten por un lado en la acción de los CTL ya inducidos en el paciente o bien se basan en la producción de perfiles de transcripción diferenciados entre tumores y tejidos normales.

El hallazgo de genes sobreexpresados en tejidos tumorales o en líneas celulares tumorales humanas, o expresados de manera selectiva en dichos tejidos o líneas celulares no proporciona, sin embargo, información precisa sobre la acción de los antígenos transcritos por estos genes en la inmunoterapia. La causa de ello es que sólo los péptidos aislados de estos antígenos son aptos para una acción de ese tipo, ya que sólo los epítopos de los antígenos –no todo el antígeno– son capaces de provocar una respuesta de linfocitos T mediante la presentación de MHC. Por eso es importante seleccionar péptidos de proteínas sobreexpresadas o expresadas de manera selectiva, presentados con moléculas MHC y así obtener blancos para el reconocimiento específico de células primarias o de líneas celulares tumorales de células primarias de tejido tumoral mediante linfocitos T citotóxicos.

El documento DE 102 25 144 A1 describe la identificación de péptidos asociados a tumores aparte de la SEQ ID n.º 303, que muestran la capacidad de unirse a una molécula del MHC humano de clase I.

Pluschke y col. (en Pluschke y col, Molecular cloning of a human melanoma-associated chondroitin sulfate proteoglycan, PNAS, Vol. 93, n.º 18, 01/09/1996, páginas 9710-9715) describen el proteoglicano 4 de sulfato de condroitina (CSPG4) incluyendo la secuencia TMLARLASA (SEQ ID n.º 303) . No se describe su correspondiente aplicación inmunológica como péptido asociado a tumor.

Ante estos antecedentes, el objetivo de la presente invención es facilitar al menos una nueva secuencia de aminoácidos para un péptido con la capacidad de unirse a una molécula de complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I.

Este objetivo se alcanza conforme a la presente invención mediante la preparación de un péptido asociado a tumor, en donde el péptido muestra la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I, seleccionado de, a) una secuencia de aminoácidos compuesta de la secuencia SEQ ID n.º 303 (TMLARLASA) del protocolo de secuencias adjunto, b) un péptido conforme a a) , en el que un aminoácido es sustituido por otro aminoácido con propiedades químicas similares, y c) un péptido conforme a a) o b) en el que en los extremos N y/o C hay disponible otro aminoácido.

De esta forma, se alcanza el objetivo que sirve de base para la presente invención.

Con ello se entiende que los péptidos identificados por el tumor son sintetizados para obtener mayores cantidades y para su aplicación para el fin descrito más abajo, o transportados en células para su expresión.

Los inventores pudieron aislar e identificar los péptidos mencionados como ligandos específicos de moléculas MHC de clase I a partir de tejido tumoral. Se denominan péptidos «asociados a tumores» a aquellos aislados e identificados a partir de material tumoral. Estos péptidos, que son presentados en tumores auténticos (primarios) están sujetos al procesamiento de antígenos en una célula tumoral.

Los ligandos específicos se pueden aplicar en la terapia contra el cáncer; por ejemplo para inducir una respuesta inmune contra células tumorales que expresan los antígenos de los que proceden los péptidos.

Dicha respuesta inmune en forma de una inducción de CTL se puede obtener in vivo. Para ello, se administra el péptido por ejemplo en forma de composición farmacéutica a un paciente con una enfermedad tumoral asociada a TAA.

Por otro lado, también se puede desencadenar una respuesta CTL... [Seguir leyendo]

1. Péptido asociado a tumor, donde el péptido muestra la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad humano (MHC) de clase I, seleccionado de, a) una secuencia de aminoácidos compuesta de la secuencia SEQ ID n.º 303 (TMLARLASA) , b) un péptido conforme a a) , en el que un aminoácido es sustituido por otro aminoácido con propiedades químicas similares, y c) un péptido conforme a a) o b) , en el que el extremo N y/o C dispone de otro aminoácido.

2. Utilización de uno o varios péptidos conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un producto farmacéutico para el tratamiento de enfermedades tumorales y/o enfermedades adenomatosas.

3. Utilización del péptido conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades tumorales y/o enfermedades adenomatosas.

4. Utilización conforme a las reivindicaciones 2 o 3 cuando la enfermedad es cáncer de riñón, mama, páncreas, estómago, cerebro, vejiga, testículos y/o una enfermedad tumoral del sistema nervioso.

5. Utilización conforme a las reivindicaciones 3 o 4 cuando el péptido es aplicado junto con un adyuvante.

6. Utilización conforme a las reivindicaciones 3 o 4 cuando el péptido es aplicado unido a una célula presentadora de antígeno.

7. Utilización del péptido conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un anticuerpo.

8. Composición farmacéutica que contiene uno o varios péptidos conforme a la reivindicación 1.

9. Molécula de ácidos nucléicos que codifica el péptido con la secuencia SEQ ID n.º 303.

10. Célula que, con ayuda de la molécula de ácidos nucléicos conforme a la reivindicación 9, es modificada genéticamente de tal forma que produce un péptido conforme a la reivindicación 1.