Procedimiento de normalización interna de ensayos.
Un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que comprende:
proporcionar dentro del sistema de ensayos un tampón que incluye una solución estándar interna;
obtener una medición de la conductancia eléctrica del tampón antes de comienzo del ensayo;
obtener un cambio de la concentración d 5 el tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica;
determinar la concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración deltampón para la normalización de los resultados de los ensayos.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2007/026523.
Solicitante: WAKO PURE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 1-2, DOSHOMACHI 3-CHOME CHUO-KU OSAKA-SHI OSAKA 540-8605 JAPON.
Inventor/es: KAWABATA, TOMOHISA, WADA,Henry G, BOUSSE,Luc.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N1/28 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 1/00 Muestreo; Preparación de muestras para la investigación (manipulación de materiales para un análisis automático G01N 35/00). › Preparación de muestras para el análisis (montaje de muestras sobre las placas del microscopio G02B 21/34; medios de soporte para los objetos o para los materiales a examinar en un microscopio electrónico H01J 37/20).
- G01N21/64 G01N […] › G01N 21/00 Investigación o análisis de los materiales por la utilización de medios ópticos, es decir, utilizando rayos infrarrojos, visibles o ultravioletas (G01N 3/00 - G01N 19/00 tienen prioridad). › Fluorescencia; Fosforescencia.
- G01N27/447 G01N […] › G01N 27/00 Investigación o análisis de materiales mediante el empleo de medios eléctricos, electroquímicos o magnéticos (G01N 3/00 - G01N 25/00 tienen prioridad; medida o ensayo de variables eléctricas o magnéticas o de las propiedades eléctricas o magnéticas de los materiales G01R). › utilizando la electroforesis.
- G01N33/53 G01N […] › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
- G01N33/58 G01N 33/00 […] › en los que intervienen sustancias marcadas (G01N 33/53 tiene prioridad).
PDF original: ES-2388005_T3.pdf
![Procedimiento de normalización interna de ensayos.](https://patentados.com/img/2012/06/1217465/procedimiento-de-normalizacion-interna-de-ensayos.jpg)
Fragmento de la descripción:
Procedimiento de normalización interna de ensayos
Campo de la invención
La presente invención versa acerca de un procedimiento para una estandarización de ensayos y acerca de un sistema del mismo.
Antecedentes de la invención
Puede usarse un estándar interno tal como un ADN marcado de forma fluorescente como un estándar interno para alinear picos en ensayos electroforéticos y también como un marcador de referencia cuantitativa para normalizar la señal de pico de los picos de analitos marcados de forma fluorescente. La intensidad del pico del analito es la señal usada para cuantificar la concentración del analito en las muestras sometidas a ensayo. Si hay fluctuaciones en el sistema de ensayo que afecten al volumen de la muestra inyectada o a la sensibilidad de la detección de la marca, tal como la fluctuación en la intensidad de luz láser de excitación, en el enfoque óptico, etc., la señal del analito se verá afectada, causando un error en la medición de la concentración del analito. Normalizando la señal con un estándar interno, puede ser controlada en cuanto a fluctuaciones del sistema en la sensibilidad de detección, error en el volumen de la muestra y en variaciones del chip, tales como una variación del volumen de detección debida a una variación en la profundidad del canal del chip.
Se conocen, por ejemplo, a partir del documento WO 02/052038 procedimientos de normalización que se valen de la medición de una señal óptica por una sustancia conocida usada como estándar interno. El problema de un estándar interno es que está contenido en el mismo tampón u otro reactivo y estaría sujeto a variación, debido, por ejemplo, a la evaporación o la condensación, que aumentarán o disminuirán su concentración cuando esté guardado en un sistema previsto para una operación continua durante días, semanas o incluso meses. Cambiar el tampón de muestra todos los días podría ser una solución, pero resultaría inconveniente y caro para el usuario. Otra posible solución es contar con un calibrador externo que se utilice como una muestra. Esto puede ser usado para calibrar el sistema y ajustar la curva de respuesta de concentración, pero no controla cada ensayo en cuanto a la variación del chip individual o a la variación del ensayo individual.
Resumen de la invención
El sistema de ensayos aborda el problema del uso de un estándar interno para sistemas tales como sistemas de ensayo electroforético microfluídico. Con el sistema, puede controlarse la variación de la concentración estándar interna debida a factores tales como la evaporación, la condensación o incluso el acarreo de sondas de la solución de lavado de sondas. El sistema puede usar la conductividad del tampón a partir del momento en que el reactivo está fresco para corregir la calibración estándar interna de la señal del analito. Las sales tampón son las principales aportadoras a la conductividad del tampón, y la concentración de estas sales por evaporación o su disolución por condensación o acarreo de sondas cambiarán la conductividad de la solución tampón. Por lo tanto, la medición de la conductividad del tampón en el chip antes de iniciar el ensayo permitirá la medición del nivel de evaporación de los reactivos usados para llenar el chip, incluyendo el tampón de muestra. Cuando no resulte posible medir directamente la conductividad del tampón de muestra debido a la disposición de los electrodos en los canales del chip, puede medirse el nivel de evaporación de uno de los componentes reactivos y explorar el efecto de la evaporación al tampón de muestra y al estándar interno.
Puede usarse la misma medición de cambio de la conductancia como una medida de la geometría del chip, porque la conductancia medida es una función de la conductividad del tampón, de la longitud del canal y del área del corte transversal. Una variable dominante para la geometría del canal para los chips producidos por procedimientos fotolitográficos o moldeo de materiales termoplásticas puede estar en la dimensión de la profundidad. Referenciando la conductancia a las mediciones iniciales de chips nuevos en el instrumento a un chip de referencia en el instrumento, será posible normalizar las señales del ensayo para corregir la geometría del chip, que afecta la intensidad de la señal, que es predominante la longitud y la profundidad del canal del chip, de las cuales la profundidad puede ser la variable predominante.
Así, las mediciones de la conductancia son un parámetro valioso cuando se usan en ensayos electroforéticos microfluídicos y pueden mejorar la precisión y la reproducibilidad de estos ensayos.
Según la invención, también se presenta un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que incluye proporcionar dentro del sistema de ensayo un tampón que incluye una solución estándar interna; obtener una medición de la conductancia eléctrica del tampón antes de comienzo del ensayo; obtener un cambio de la concentración del tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica; determinar la concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración del tampón para la normalización de los resultados de los ensayos.
Se proporciona el tampón del procedimiento para el estándar interno y puede incluir una pluralidad de constituyentes, uno de los cuales es la solución estándar interna. La conductancia eléctrica del tampón es una medición de la conductancia eléctrica total de la pluralidad de constituyentes. La concentración de la solución estándar interna puede ser obtenida extrapolando el cambio de concentración del tampón. La conductancia eléctrica del tampón es aproximadamente proporcional a la concentración de sales o iones en el tampón.
Pueden obtenerse una concentración inicial del tampón y una correspondiente medición de la conductancia eléctrica del tampón antes de obtener la medición de la conductividad eléctrica previa al comienzo de un ensayo.
El sistema descrito en el procedimiento puede ser un sistema de ensayo electroforético microfluídico, en el que los resultados del ensayo pueden ser normalizados con base en una señal estándar interna fluorescente y en la concentración de la solución estándar interna.
La invención es, además, un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que incluye las etapas de proporcionar dentro del sistema de ensayo una pluralidad de constituyentes del tampón, uno de los cuales incluye una solución estándar interna; obtener una medición de la conductancia eléctrica de la pluralidad de constituyentes del tampón antes de iniciar un ensayo; obtener un cambio de concentración de sales o iones dentro de la pluralidad de constituyentes del tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica; y determinar una concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración de sales o iones para normalizar los resultados del ensayo.
La invención está relacionada, además, con un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que incluye2proporcionar dentro del sistema de ensayo un tampón que incluye una solución estándar interna; obtener una medición de la conductancia eléctrica del tampón antes de iniciar un ensayo; y normalizar los resultados del ensayo con base en la medición de la conductancia eléctrica.
El procedimiento puede incluir, además, las etapas de obtener un cambio de concentración del tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica; y determinar la concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración del tampón para normalizar los resultados del ensayo.
El procedimiento puede incluir, además, las etapas de2comparar la medición de la conductancia eléctrica con datos predeterminados; y normalizar los resultados del ensayo con base en la comparación.
Debe entenderse que tanto la anterior descripción general como la siguiente descripción detallada son únicamente ejemplares y explicativas y no son restrictivas de la invención, tal como se reivindica.
Los dibujos adjuntos, que se incorporan en esta memoria y constituyen parte de la misma, ilustran realizaciones de la invención y, junto con la descripción, sirven para explicar los principios de la invención.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1A es un ejemplo de una relación entre la conductividad y la... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que comprende:
proporcionar dentro del sistema de ensayos un tampón que incluye una solución estándar interna; obtener una medición de la conductancia eléctrica del tampón antes de comienzo del ensayo; obtener un cambio de la concentración del tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica; determinar la concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración del tampón para la normalización de los resultados de los ensayos.
2. El procedimiento según la reivindicación 1 en el que:
(i) se proporciona el tapón para el estándar interno; o
(ii) el tampón comprende una pluralidad de constituyentes, uno de los cuales es la solución estándar interna; o
(iii) la conductancia eléctrica del tampón es aproximadamente proporcional a la concentración de sales o iones en el tampón.
3. El procedimiento según la reivindicación 1 en el que el tampón comprende una pluralidad de constituyentes, uno de los cuales incluye la solución estándar interna; y la medición de la conductancia eléctrica del tampón es una medición de la conductancia eléctrica total de la pluralidad de constituyentes, preferentemente la concentración de la solución estándar interna, se obtiene extrapolando el cambio de concentración del tampón.
4. El procedimiento según la reivindicación 1 que, además, comprende:
antes de la obtención de la medición de la conductancia eléctrica previa al comienzo de un ensayo, obtener una concentración inicial del tampón y una correspondiente medición de la conductancia eléctrica del tampón.
5. El procedimiento según la reivindicación 1 en el que el sistema es un sistema de ensayo electroforético microfluídico.
6. El procedimiento según la reivindicación 1 en el que los resultados del ensayo son normalizados con base en una señal estándar interna fluorescente y en la concentración de la solución estándar interna.
7. Un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que comprende:
proporcionar dentro del sistema de ensayo una pluralidad de constituyentes del tampón, uno de los cuales incluye una solución estándar interna; obtener una medición de la conductancia eléctrica de la pluralidad de constituyentes del tampón antes de iniciar un ensayo; obtener un cambio de concentración de sales o iones dentro de la pluralidad de constituyentes del tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica; determinar una concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración de sales o iones para normalizar los resultados del ensayo.
8. El procedimiento según la reivindicación 7 en el que:
(i) la medición de la conductancia eléctrica de los constituyentes del tampón es una medición de la conductancia eléctrica total de los constituyentes del tampón; preferentemente, se obtiene la concentración de la solución estándar interna extrapolando el cambio de concentración de sales o iones dentro de la pluralidad de los constituyentes del tampón; o
(ii) la conductancia eléctrica del tampón es aproximadamente proporcional a la concentración de sal o iones en el tampón.
9. El procedimiento según la reivindicación 7 que, además, comprende:
antes de la obtención de la medición de la conductancia eléctrica previa al comienzo de un ensayo, predeterminar una concentración inicial de los constituyentes del tampón y una correspondiente medición de la conductancia eléctrica de los constituyentes del tampón.
10. El procedimiento según la reivindicación 7 en el que el sistema es un sistema de ensayo electroforético microfluídico.
11. El procedimiento según la reivindicación 7 en el que los resultados del ensayo son normalizados con base en una señal estándar interna fluorescente y en la concentración de la solución estándar interna.
12. Un procedimiento de normalización para un sistema de ensayos que comprende:
proporcionar dentro del sistema de ensayo un tampón que incluye una solución estándar interna; 10
obtener una medición de la conductancia eléctrica del tampón antes de iniciar un ensayo; y normalizar los resultados del ensayo con base en la medición de la conductancia eléctrica.
13. El procedimiento de normalización según la reivindicación 12 que, además, comprende:
obtener un cambio de concentración del tampón con base en la medición de la conductancia eléctrica; y 5 determinar la concentración de la solución estándar interna con base en el cambio de concentración del tampón para normalizar los resultados del ensayo.
14. El procedimiento de normalización según la reivindicación 12 que, además, comprende: comparar la medición de la conductancia eléctrica con datos predeterminados; y
normalizar los resultados del ensayo con base en la comparación. 10
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