Moléculas de RNA interferentes de extremos romos.

Un ácido ribonucleico que media en la interferencia de RNA, que comprende una estructura de doble hebra,

en donde la estructura de doble hebra comprende una primera hebra y una segunda hebra, en donde la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y en donde dicho primer tramo es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico diana, y la segunda hebra comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, en donde dicho segundo tramo es al menos parcialmente idéntico al ácido nucleico diana, caracterizado porque la estructura de doble hebra es de extremo romo en ambos lados de la doble hebra y la longitud de dicha primera hebra y dicho primer tramo y la longitud de dicha segunda hebra y dicho segundo tramo es de 18 o 19 bases, para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad.

Moléculas de RNA interferentes de extremos romos.

La presente invención se refiere a un ácido ribonucleico que media en la interferencia de RNA que comprende una estructura de doble hebra, en donde la estructura de doble hebra comprende una primera hebra y una segunda hebra, en donde la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y en donde dicho primer tramo es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico diana, y la segunda hebra comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos en donde dicho segundo tramo es al menos parcialmente idéntico a un ácido nucleico diana, al uso de tal ácido ribonucleico, a una célula y un organismo, respectivamente, que comprenden tal ácido ribonucleico, a una composición que contiene tal ácido ribonucleico y a una composición farmacéutica que contiene tal ácido ribonucleico.

La interferencia mediada por RNA (RNAi) es un mecanismo de silenciamiento de genes post-transcripcional iniciado por RNA de doble hebra (dsRNA) homólogo en secuencia al gen silenciado (Fire (1999) , Trends Genet 15, 358-63, Tuschl, et al., (1999) , Genes Dev 13, 3191-7, Waterhouse, et al., (2001) , Nature 411, 834-42, Elbashir, et al. (2001) , Nature 411, 494-8, para revisión véase Sharp (2001) , Genes Dev 15, 485-90, Barstead (2001) , Curr Opin Chem Biol 5, 63-6) . El RNAi se ha usado extensamente para determinar la función de genes en varios organismos, que incluyen plantas (Baulcombe (1999) , Curr Opin Plant Biol 2, 109-13) , nematodos (Montgomer y , et al. (1998) , Proc Natl Acad Sci U S A 95, 15502-7) , Drosophila (Kennerdell, et al. (1998) , Cell 95, 1017-26, Kennerdell, et al. (2000) , Nat Biotechnol 18, 896-8) . En el nematodo C. elegans aproximadamente un tercio del genoma ya ha sido sometido a análisis funcional por RNAi (Kim (2001) , Curr Biol 11, R85-7, Maeda, et al. (2001) , Curr Biol 11, 171-6) .

Hasta hace poco el RNAi en células de mamíferos no era generalmente aplicable, con la excepción del desarrollo temprano en ratones (Wianny, et al. (2000) , Nat Cell Biol 2, 70-5) . El descubrimiento de que la transfección de dúplex de 21-nt en células de mamíferos interfería con la expresión de genes y no inducía una respuesta antivírica dirigida por interferón independiente de secuencia obtenida usualmente con dsRNA largos condujo a una nueva aplicación potencial en células de mamíferos diferenciadas (Elbashir et al. (2001) , Nature 411, 494-8) . De modo interesante, estos RNAs interferentes pequeños (siRNAs) se asemejan a los productos de proceso de dsRNAs largos, lo que sugiere un mecanismo de circunvalación potencial en células de mamíferos diferenciadas. El complejo Dicer, un miembro de la familia RNAsa III, necesario para el procesamiento inicial del dsDNA, ha sido identificado (Bernstein, et al. (2001) , Nature 409, 363-6, Billy, et al. (2001) , Proc Natl Acad Sci U S A 98, 14428-33) . Uno de los problemas encontrados previamente cuando se usaban ribooligonucleótidos no modificados era la rápida degradación en células o incluso en el medio que contenía suero (Wickstrom (1986) , J Biochem Biophys Methods 13, 97-102, Cazenave, et al. (1987) . Nucleic Acids Res 15, 10507-21) . Dependerá de la función genética particular y

los sistemas de ensayo usados el que la reducción (“knock down”) respectiva inducida por siRNA transfectado se

mantenga el tiempo suficiente para conseguir un cambio fenotípico.

La solicitud de patente internacional WO 02/44321 describe moléculas de RNA pequeñas que median en la interferencia de RNA.

Elbashir et al. (Elbashir SM et al., Genes & Development 15: 188-200, 2001) describen que la interferencia de RNA es mediada por RNAs de 21 y 22 nucleótidos.

El problema que subyace en la presente invención era proporcionar moléculas de RNA interferentes sintéticas que sean tanto estables como activas en un entorno bioquímico tal como una célula viva.

Este problema es solventado por el tema de las reivindicaciones independientes adjuntas. Las realizaciones preferidas se pueden tomar de las reivindicaciones dependientes adjuntas.

Más específicamente, en un primer aspecto de la presente invención, el problema es resuelto por un ácido ribonucleico que media en la interferencia de RNA que comprende una estructura de doble hebra, en donde la estructura de doble hebra comprende una primera hebra y una segunda hebra, en donde la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y en donde dicho primer tramo es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico diana, y la segunda hebra comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, en donde dicho segundo tramo es al menos parcialmente idéntico al ácido nucleico diana, en donde la estructura de doble hebra es de extremos romos en ambos lados de la doble hebra, y la longitud de dicha primera hebra y dicho primer tramo y la longitud de dicha segunda hebra y dicho segundo tramo es de 18 o 19 bases, para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad.

En una realización del ácido ribonucleico acorde con la presente invención, al menos un nucleótido del ácido ribonucleico tiene una modificación en la posición 2’, y la modificación se selecciona preferiblemente del grupo que comprende amino, fluoro, metoxi y alquilo.

En una realización preferida del ácido ribonucleico acorde con la presente invención, la complementariedad entre dicha primera hebra y el ácido nucleico diana es perfecta.

En una realización del ácido nucleico acorde con la presente invención, el dúplex formado entre la primera hebra y el ácido nucleico diana comprende al menos 15 nucleótidos, en donde hay una discordancia o dos discordancias entre dicha primera hebra y el ácido nucleico diana que forman dicha estructura de doble hebra.

En una realización preferida del ácido ribonucleico acorde con la presente invención, el gen diana se selecciona del grupo que comprende genes estructurales, genes constitutivos, factores de transcripción, factores de motilidad, factores de ciclo celular, inhibidores de ciclo celular, enzimas, factores de crecimiento, citocinas y supresores de tumores.

En una realización, la enfermedad se selecciona del grupo que comprende glioblastoma, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de colon, cáncer pancreático y leucemia, diabetes, obesidad, enfermedades cardiovasculares y enfermedades metabólicas.

En un segundo aspecto, el problema que subyace en la presente invención es resuelto por el uso de un ácido ribonucleico acorde con cualquiera de los aspectos de la presente invención, para la fabricación de un medicamento.

En una realización del uso según el segundo aspecto de la presente invención, el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad o de una afección que se selecciona del grupo que comprende glioblastoma, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de colon, cáncer pancreático y leucemia, diabetes, obesidad, enfermedades cardiovasculares y enfermedades metabólicas.

En un tercer aspecto, el problema que subyace en la presente invención es resuelto por una célula, preferiblemente una célula reducida, que contiene un ácido ribonucleico acorde con el primer aspecto de la presente invención, en donde si la célula es una célula humana, la célula humana es una célula humana aislada.

En un cuarto aspecto, el problema que subyace en la presente invención es resuelto por un organismo, preferiblemente un organismo reducido, que contiene un ácido ribonucleico acorde con el primer aspecto de la presente invención, en donde el organismo es diferente de un ser humano.

En un quinto aspecto, el problema que subyace en la presente invención es resuelto por una composición que contiene un ácido ribonucleico acorde con el primer aspecto de la presente invención.

En un sexto aspecto, el problema que subyace en la presente invención es resuelto por una composición farmacéutica que contiene un ácido ribonucleico acorde con el primer aspecto de la presente invención.

También se describe un método para inhibir la expresión de un gen diana en una célula o un derivado de la misma, que comprende la introducción de un ácido ribonucleico acorde con cualquiera de los aspectos de la presente invención en la célula en una cantidad suficiente para inhibir la expresión del gen diana, en donde... [Seguir leyendo]

1. Un ácido ribonucleico que media en la interferencia de RNA, que comprende una estructura de doble hebra, en donde la estructura de doble hebra comprende una primera hebra y una segunda hebra, en donde la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y en donde dicho primer tramo es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico diana, y la segunda hebra comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, en donde dicho segundo tramo es al menos parcialmente idéntico al ácido nucleico diana, caracterizado porque la estructura de doble hebra es de extremo romo en ambos lados de la doble hebra y la longitud de dicha primera hebra y dicho primer tramo y la longitud de dicha segunda hebra y dicho segundo tramo es de 18 o 19 bases, para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad.

2. El ácido ribonucleico según la reivindicación 1, en donde al menos un nucleótido del ácido ribonucleico tiene una

modificación en la posición 2’, y la modificación se selecciona preferiblemente del grupo que comprende amino,

fluoro, metoxi y alquilo.

3. El ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la complementariedad entre dicha primera hebra y el ácido nucleico diana es perfecta.

4. El ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde el dúplex formado entre la primera hebra y el ácido nucleico diana comprende al menos 15 nucleótidos, en donde hay un discordancia o dos discordancias entre dicha primera hebra y el ácido nucleico diana que forman dicha estructura de doble hebra.

5. El ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el gen diana se selecciona del grupo que comprende genes estructurales, genes constitutivos, factores de transcripción, factores de motilidad, factores del ciclo celular, inhibidores del ciclo celular, enzimas, factores de crecimiento, citocinas y supresores de tumores.

6. El ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que comprende glioblastoma, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de colon, cáncer pancreático y leucemia, diabetes, obesidad, enfermedades cardiovasculares y enfermedades metabólicas.

7. Uso de un ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la fabricación de un medicamento.

8. El uso según la reivindicación 7, en donde el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad o de una afección que se selecciona del grupo que comprende glioblastoma, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de colon, cáncer pancreático y leucemia, diabetes, obesidad, enfermedades cardiovasculares y enfermedades metabólicas.

9. Una célula, preferiblemente una célula reducida, que contiene un ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde si la célula es una célula humana, la célula humana es una célula humana aislada.

10. Un organismo, preferiblemente un organismo reducido, que contiene un ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el organismo es diferente de un ser humano.

11. Una composición que contiene un ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

12. Una composición farmacéutica que contiene un ácido ribonucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.