Métodos para movilizar las células madre/progenitoras.

Un método para obtener células progenitoras y/o madres de un sujeto,

método que comprende

(a) la administración a dicho sujeto de una cantidad de un compuesto suficiente para movilizar dichas células progenitoras y/o madres en la sangre periférica de dicho sujeto, seguido por

(b) la recolección de dichas células progenitoras y/o madres, en donde dicho compuesto es el 1,1'-[1,4-fenileno-bis- (metileno)]-bis-1,4,8,11-tetraazaciclotetradecano o una sal farmacéuticamente aceptable o complejo metálico de este.

Métodos para movilizar las células madre/progenitoras Campo Técnico La invención está en el campo de terapéuticos y química medicinal. Más particularmente, la invención se refiere a 5 los métodos para movilizar las células progenitoras/madre en sujetos, mediante la administración de ciertas poliaminas.

Antecedentes de la Técnica Las células sanguíneas juegan una parte crucial en el mantenimiento de la salud y la viabilidad de animales, incluyendo humanos. Los glóbulos blancos incluyen neutrófilos, macrófagos, eosinófilos y basófilos/células 10 mastoides así como las células B y T del sistema inmune. Los glóbulos blancos se reemplazan continuamente vía el sistema hematopoyético, mediante la acción de factores estimuladores de colonias (CSF) y varias citoquinas en células madre y células progenitoras en tejidos hematopoyéticos. Las secuencias de nucleótido que codifica un número de estos factores de crecimiento han sido clonadas y secuenciadas. Tal vez el más ampliamente conocido de estos es el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) , el cual ha sido probado para su uso en contrarrestar los efectos negativos de la quimioterapia, mediante la estimulación de la producción de glóbulos blancos y las células progenitoras (movilización de la célula madre de sangre periférica) . Una discusión de los efectos hematopoyéticos de este factor se pueden encontrar, por ejemplo, en U. S. Patent No. 5, 582, 823.

Se han reportado otros factores para incrementar los glóbulos blancos y las células progenitoras en ambos sujetos humanos y animales. Estos agentes incluyen factor estimulante de colonias de macrófagos-granulocitos (GM-CSF) , 20 Interleucina-1 (IL-1) , Interleucina-3 (IL-3) , Interleucina-8 (IL-8) , PIXY-321 (proteína de fusión GM-CSF/IL-3) , de una proteína inflamatoria de macrófagos, factor de célula madre, trombopoyetina y oncogen relacionado con el crecimiento, como agentes únicos o en combinación (Dale, D., et al., Am. J. of Hefnatol. (1998) 57: 7-15; Rosenfeld, C., et al., Bone Marrow Transplantation (1997) 17: 179-183; Pruijt, J., et al., Cur. Op. ira Hematol. (1999) 6: 152-158; Broxmeyer, H., et al., Exp. Hemato. (1995) 23: 335-340; Broxmeyer, et al., Blood Cells, Molecules and Diseases (1998) 24: 14-30; Glaspy, J., et al., Cancer Chemother. Pharmacol. (1996) 38 (suppl) : S53-S57 : Vadhan-Raj, S., et al., Aran. Inter^rz. Med. (1997) 126: 673-81 ; King, A., et al., Blood (2001) 97:1534-1542; Glaspy, J., et al., Blood (1997) 90: 2939-2951) .

Mientras que los factores de crecimiento endógenos son efectivos farmacológicamente, las desventajas bien conocidas de emplear proteínas y péptidos como productos farmacéuticos subyace la necesidad de añadir al repertorio de tales factores de crecimiento con agentes que sean moléculas pequeñas. En otro aspecto, tales moléculas pequeñas tienen ventajas sobre las proteínas y péptidos cuando se desea una producción de grandes cantidades.

Se ha descrito un número de agentes antivirales de poliamina cíclica, en una serie de solicitudes y patentes de EE. UU., en los últimos años. Estas son las patentes, U. S. Patent Nos. 5, 021, 409; 6, 001, 826; 5, 583, 131; 5, 698, 546; y 5, 817, 807. PCT publications WO 00/02870 basada en la solicitud presentada el 8 de Julio de 1998 y WO 01/44229, basada en la solicitud presentada el 17 de Diciembre de 1999, la cual describe los compuestos adicionales. Estas publicaciones describen las características estructurales de los agentes antivirales de poliamina cíclica.

Las características estructurales de un número de agentes antivirales de amina no-cíclica, también han sido descritas en una serie de solicitudes de EE. UU., ahora publicadas como publicaciones PCT. Estas publicaciones son, WO 00/56729, basada en la solicitud presentada el 24 de Marzo del 2000; WO 02/22600, basada en las solicitudes presentadas el 15 y 20 de Septiembre del 2000; WO 02/22599, basada en las solicitudes presentadas el 15 y 22 de Septiembre del 2000, así como WO 02/34745 publicada el 2 de Mayo del 2002.

Además, métodos mejorados para la preparación de algunos de los compuestos de poliamina cíclica, se describen en U. S. Patent Nos. 5, 612, 478; 5, 756, 728; 5, 801, 281; y 5, 606, 053 y PCT publication WO 02/26721, basada en la 45 solicitud presentada el 29 de Septiembre del 2000.

Previamente hemos encontrado, y se han revelado en PCT publication WO 02/58653, basada en la solicitud presentada el 1 de Febrero del 2000, que algunos de los agentes antivirales de poliamina descritos en las publicaciones mencionadas anteriormente tienen el efecto de incrementar el recuento de glóbulos blancos. Ahora se ha encontrado que los agentes antivirales de poliamina descritos en las publicaciones mencionadas anteriormente 50 también tienen el efecto de incrementar las células progenitoras y/o las células madre.

El desarrollo y maduración de glóbulos rojos es un proceso complejo. Los glóbulos rojos maduros se derivan de células precursoras hematopoyéticas, células (progenitoras) y células madre presentes en tejidos hematopoyéticos específicos incluyendo la médula ósea. Dentro de estos ambientes las células hematopoyéticas proliferan y se diferencian antes de entrar en circulación. El receptor de quimiocina CXCR4 y su factor-1 derivado de la célula estromal del ligando natural (SDF-1) , parece que es importante en este proceso (para comentarios ver Maekawa, T., et al., Internal Med. (2000) 39:90-100; Nagasawa, T., et al., Int. J. Hematol. (2000) 72:408-411) . Esto se demuestra mediante informes de que ratones carentes de CXCR4 o SDF-1 muestran defectos hematopoyéticos (Ma, Q., et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA (1998) 95:9448-9453; Tachibana, K., et al., Nature (1998) 393:591-594; Zou, Y-R., et al., Nature (1998) 393:595-599) . También se conoce que las células progenitoras CD34+ expresan CXCR4 y necesitan SDF-1 producido por las células estromales de la médula ósea para quimioatracción e injerto (Peled, A., et al., Science (1999) 283:845-848) y que in vitro, SDF-1 es quimiotáctico para ambas células CD34+ (Aiuti, A., et al., J. Exp. Med. (1997) 185:111-120; Viardot, A., et al., Ann. Hematol. (1998) 77:194-197) y para las células progenitoras/madre (Jo, D-Y., et al., J. Clin. Invest. (2000) 105:101-111) . SDF-1 también es un importante quimioatrayente, que señala la vía del receptor CXCR4, para otras varias células progenitoras y glóbulos rojos maduros más comprometidos incluyendo linfocitos-T y monocitos (Bleul, C., et al., J. Exp. Med. (1996) 184:11011109) , linfocitos pro-y pre-B (Fedyk, E. R., et al., J. Leukoc. Biol. (1999) 66:667-673; Ma, Q., et al., Immunity (1999) 10:463-471) y megacariocitos (Hodohara, K., et al., Blood (2000) 95:769-775; Riviere, C., et al., Blood (1999) 95:1511-1523; Majka, M., et al., Blood (2000) 96:4142-4151; Gear, A., et al., Blood (2001) 97:937-945; Abi-Younes, S., et al., Circ. Res. (2000) 86:131-138) .

Así, en resumen, parece que SDF-1 es capaz de controlar el posicionamiento y la diferenciación de las células que llevan los receptores CXCR4 si estas células son células madre (i.e., células que son CD34+) y/o células progenitoras (que resultan en la formación de tipos específicos de colonias en respuesta a estímulos particulares; que pueden ser CD34+ o CD34-) o células que son algo más diferenciadas.

Recientemente, una considerable atención se ha centrado en el número de células CD34+ movilizadas en la mezcla de células progenitoras de sangre periférica utilizada para el trasplante de células madre. Se piensa que la población de CD34+ es el componente en primer lugar responsable del tiempo de recuperación mejorado después de la quimioterapia y las células más comúnmente responsables para el injerto a largo plazo y la restauración de la hematopoyesis (Croop, J. M., et al., Bone Marrow Transplantation (2000) 26:1271-1279) . El mecanismo por el cual las células CD34+ se re-injertan puede ser debido a los efectos quimiotácticos de SDF-1 en las células que expresan CXCR4 (Voermans, C. Blood, 2001, 97, 799-804; Ponomar y ov, T., et al., J. Clin. Invest. (2000) 106: 1331-1339) . Más recientemente, se demostró que las células hematopoyéticas madre adultas eran capaces de restaurar el tejido cardiaco dañado en ratones (Jackson, K., et al., J. Clin. Invest. (2001) 107:1395-1402; Kocher, A., et al., Nature Med. (2001) 7:430-436) .

Así, el papel del receptor CXCR4 en la administración del posicionamiento y diferenciación celular, ha asumido una significancia considerable.

La citación de los documentos anteriores, no tiene la intención de ser una admisión de que cualquiera... [Seguir leyendo]

1. Un método para obtener células progenitoras y/o madres de un sujeto, método que comprende

(a) la administración a dicho sujeto de una cantidad de un compuesto suficiente para movilizar dichas células progenitoras y/o madres en la sangre periférica de dicho sujeto, seguido por

(b) la recolección de dichas células progenitoras y/o madres, en donde dicho compuesto es el 1, 1'-[1, 4-fenileno-bis (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano o una sal farmacéuticamente aceptable o complejo metálico de este.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el compuesto es el 1, 1'-[1, 4-fenileno-bis- (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11tetraazaciclotetradecano.

3. El método de la reivindicación 1, en donde el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable del 1, 1'-[1, 4fenileno-bis- (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano.

4. El método de la reivindicación 3, en donde el compuesto es una sal clorhidrato del 1, 1'-[1, 4-fenileno-bis (metileno) ]-bis- 1, 4, 8, 111-tetraazaciclotetradecano.

5. El método de la reivindicación 1, en donde el compuesto es un complejo metálico del 1, 1'-[1, 4-fenileno-bis (metileno) ]-bis- 1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano.

6. El método de cualquier reivindicación precedente, en donde las células progenitoras y/o madres se recolectan mediante aféresis.

7. El método de cualquier reivindicación precedente, que además comprende la administración de una proteína inflamatoria de macrófagos con la sangre periférica o la médula ósea de dicho sujeto.

8. El método de cualquier reivindicación precedente, que además comprende la administración de G-CSF con la sangre periférica o la médula ósea de dicho sujeto.

9. Un compuesto para utilizar en un método para tratar un déficit hematopoyético en un sujeto, en donde dicho método comprende

(a) la administración a dicho sujeto de una cantidad de un compuesto suficiente para movilizar las células progenitoras y/o madres en la sangre periférica de dicho sujeto,

(b) la recolección de dichas células progenitoras y/o madres, y

(c) el trasplante de dichas células progenitoras y/o madres a dicho sujeto, en donde dicho compuesto es el 1, 1'-[1, 4fenileno-bis- (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano o una sal farmacéuticamente aceptable o complejo metálico de este.

10. El compuesto para utilizar de la reivindicación 9, en donde el compuesto es el 1, 1'-[1, 4-fenileno-bis- (metileno) ]bis-1, 4, 8, 11- tetraazaciclotetradecano.

11. El compuesto para utilizar de la reivindicación 9, en donde el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable de 1, 1'-[1, 4-fenilenobis- (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano.

12. El compuesto para utilizar de la reivindicación 11, en donde el compuesto es una sal clorhidrato del 1, 1'-[1, 4fenileno-bis- (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano.

13. El compuesto para utilizar de la reivindicación 9, en donde el compuesto es un complejo metálico del 1, 1'-[1, 4fenileno-bis- (metileno) ]-bis-1, 4, 8, 11-tetraazaciclotetradecano.

14. El compuesto para utilizar de cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en donde dicho déficit hematopoyético es un resultado de la quimioterapia.

15. El compuesto para utilizar de cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en donde dicho déficit hematopoyético es un resultado de radioterapia.

16. El compuesto para utilizar de cualquiera de las reivindicaciones 9-15, en donde las células progenitoras y/o madres se recolectan mediante aféresis.

17. El compuesto para utilizar de cualquiera de las reivindicaciones 9-16, en donde dicho método además comprende la administración de una proteína inflamatoria de macrófagos con la sangre periférica o la médula ósea de dicho sujeto.

18. El compuesto para utilizar de cualquiera de las reivindicaciones 9-17, en donde dicho método además comprende la administración de G-CSF con la sangre periférica o la médula ósea de dicho sujeto.