MÉTODO PARA PRODUCIR UNA LEVADURA SECA QUE CONTIENE S-ADENOSIL-L-METIONINA Y COMPOSICIÓN PARA INGESTIÓN ORAL.

Método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina y composición para ingestión oral. Campo técnico El presente invento se refiere a un método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina usando una levadura que tiene la capacidad para producir S-adenosil-L-metionina (que más adelante es descrita como SAMe), y a una composición para ingestión oral. Más específicamente, se refiere a un método para producir una levadura seca que contiene SAMe en elevada concentración, convenientemente con un buen rendimiento, y a una composición para ingestión oral formada al moldear una levadura seca que contiene SAMe obtenida mediante el método. Técnica fundamental La SAMe es una sustancia fisiológicamente activa y soluble en agua que desempeña un papel importante como dador de grupos metilo en la reacción de metilación con diversas transmetilasas en los organismos vivos, y se usa en gran medida como una medicación terapéutica para la depresión, el trastorno hepático, la artritis y similares, o como un alimento saludable. La célula de levadura contiene componentes útiles que incluyen 5'-nucleótido, un ami- noácido libre, glutatión, que ejerce una acción antioxidante y se utiliza como una medicación terapéutica para el trastorno hepático, ß-glucano, que ejerce una función de potenciación de la resistencia inmune y una función de mejora del estado intestinal, fibras dietéticas y similares, y se usa en gran medida como un alimento saludable. En cuanto al método de producción convencional de SAMe, dicho método ha sido corrientemente utilizado de modo que la SAMe se acumule en las células por producción fermentativa usando un medio de cultivo que contiene L- metionina como precursor (véanse, por ejemplo, los Documentos 1 y 2 no de Patente), sea extraída y purificada por cromatografía, y sea transformada en una sal de SAMe estable, tal como una sal con ácido sulfúrico o ácido ptoluenosulfónico o una sal con ácido butanodisulfónico (véanse, por ejemplo, los Documentos 3 y 4 no de Patente). Sin embargo, en el método de producción convencional, se requieren grandes cantidades de trabajo y coste para la extracción y purificación de la SAMe acumulada en las células y es difícil producir SAMe, que es importante como medicación terapéutica y alimento saludable, a bajo coste. Se conoce un método de síntesis enzimática, que no requiere la extracción y purificación a partir de las células, como un método sustitutivo del método fermentativo. En consecuencia, se sintetiza enzimáticamente SAMe con adenosina 5'-trifosfato (ATP) y L-metionina como sustratos usando una enzima sintetizadora de SAMe (metionina adenosiltransferasa), que es aislada y purificada a partir de microorganismos, tal como una levadura (véanse, por ejemplo, el Documento 1 de Patente y los Documentos 5 y 10 no de Patente). En comparación con el método fermentativo, este método tiene las ventajas de que la SAMe se acumula en una gran cantidad y no es necesario extraer la SAMe de las células, pero presenta varios problemas ya que la preparación de la enzima es complicada, la enzima resultante presenta una actividad débil, es necesario eliminar la actividad enzimática inhibitoria, tal como la actividad de degradación de ATP, y el ATP es considerablemente caro como sustrato, y, por lo tanto, el método no ha experimentado un uso práctico. De acuerdo con el desarrollo de la ingeniería génica en los últimos años, la enzima puede ser convenientemente preparada usando un gen clonado de la enzima sintetizadora de SAMe (véanse, por ejemplo, los Documentos 6 a 9 no de Patente) para resolver el problema de la preparación de la enzima, pero aún no se han resuelto otros problemas prácticos, tal como el uso del caro ATP como sustrato. En el Documento 2 de Patente se enseña un microorganismo o extracto de microorganismos secado que comprende SAM estabilizada, y un método para producir el mismo. De acuerdo con la reivindicación 1, se usa un microorganismo o extracto microbiano que contiene SAM, en combinación con un ácido carboxílico orgánico y/o un agente quelante (EDTA). Además, se usan un ácido tal como el ácido sulfónico y sus derivados para mejorar la estabilidad de la SAM. Son ejemplos de dichos ácidos el ácido sulfónico y el ácido p-toluenosulfónico. Los ácidos fueron aplicados a la biomasa de un cultivo de Saccharomyces cerevisiae. La biomasa que contenía la SAM fue aislada y fue luego tratada con 0,1 de citrato por célula secada (ejemplo 1 de trabajo) o 0,1 de ácido succínico por célula secada (ejemplo 2 de trabajo). En el Documento 2 de Patente no se describe el intervalo de pHs usado del método en su totalidad, ni siquiera el del ácido utilizado. Pero es importante controlar el pH para la estabilidad de la SAM, que depende del pH. Además de eso, al contrario que en el presente invento, en el que se aplica un tratamiento térmico con objeto de inactivar las enzimas que degradan la SAM, en el Documento 2 de Patente no se describe información alguna acerca de dichas enzimas, ni siquiera acerca de cualquier tratamiento que pudiera inactivar dichas enzimas. [Documento 1 de Patente] JP-A-51-125717 [Documento 2 de Patente] JP-A-2005-229812 [Documento 1 no de Patente] F. Schlenk y R. E. DePalma, J. Biol. Chem., 229, 1037-1050 (1957) 2 E07742933 15-11-2011   [Documento 2 no de Patente] S. Shiozaki et al., Agric. Biol. Chem., 53, 3269-3274 (1989) [Documento 3 no de Patente] F. Schlenk y R. E. DePalma, J. Biol. Chem., 229, 1051-1057 (1957) [Documento 4 no de Patente] H. Kusakabe, A. Kuninaka y H. Yoshino, Agric. Biol. Chem., 38, 1669-1672 (1974) [Documento 5 no de Patente] S. H. Mudd, G. L. Cantoni et al., J. Biol. Chem., 231, 481-492 (1958) [Documento 6 no de Patente] G. D. Markham et al., J. Biol. Chem., 255, 9082-9092 (1980) [Documento 7 no de Patente] D. J. Markham y J. DeParisis, J. Biol. Chem., 259, 14.505-14.507 (1984) [Documento 8 no de Patente] S. Shiozaki et al., J. Biotechnology., 4, 345-354 (1986) [Documento 9 no de Patente] D. Thomas e Y. Surdin-Kerjan, J. Biol. Chem., 262, 16.704-16.709 (1987) [Documento 10 no de Patente] D. Thomas, H. Cherest et al., Mol. Cell. Biol., 8, 5132-5139 (1988) Descripción del invento Como se ha descrito anteriormente, el método fermentativo convencional en que se utilizan microorganismos requiere grandes cantidades de trabajo y coste para la extracción y la purificación, y el método enzimático convencional requiere grandes cantidades de trabajo y coste para la síntesis. En consecuencia, es considerablemente difícil producir a bajo coste un producto que contiene SAMe y pueda ser oralmente ingerido. Por lo tanto, un objeto del pre- sente invento es establecer un método que permita producir una levadura seca que contiene SAMe en elevada con- centración, convenientemente con un buen rendimiento, como un método para producir a bajo coste el producto que contiene SAMe, y proporcionar una composición para ingestión oral formada al moldear una levadura seca obtenida mediante el método de producción. Como resultado de una seria investigación realizada por los inventores para alcanzar los objetivos, se ha hallado que la levadura seca diana que contiene SAMe en elevada concentración puede ser convenientemente producida a bajo coste y con rendimiento elevado del modo siguiente. Se usa una levadura que tiene capacidad para la producción de SAMe y que puede ser oralmente ingerida, y se sintetiza y acumula SAMe en concentración elevada en las células. Las células de levadura son luego separadas del líquido de cultivo con un medio de separación, tal como una centrifugación, y son sometidas a al menos un tratamiento de entre un tratamiento de adición de un ácido mineral para ajustar el pH a un valor específico y un tratamiento de calentamiento de las células de levadura a una temperatura específica. Luego se secan las células de levadura. En consecuencia, se ha completado el presente invento. En consecuencia, el presente invento proporciona un método para producir una levadura seca que contiene SAMe en una concentración elevada, y una composición para ingestión oral formada al moldear la levadura seca, como se muestra en los puntos 1 a 5 siguientes. 1. Un método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina utilizando una levadura que tiene la capacidad para producir S-adenosil-L-metionina, que comprende las operaciones siguientes (i) separar un concentrado de células de levadura, de un líquido de cultivo celular de la levadura; (ii) someter el concentrado de células de levadura a un tratamiento de adición de un ácido mineral para ajustar el pH dentro del intervalo de 1 a 4 (1); y (iii) aplicar después al concentrado un tratamiento de calentamiento a una temperatura de 40 a 70 °C (2); y (iv) finalmente, secar el concentrado. 2. El método para producir una levadura... [Seguir leyendo]

1. Un método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina utilizando una levadura que tiene la capacidad para producir S-adenosil-L-metionina, que comprende las operaciones siguientes (i) separar un concentrado de células de levadura, de un líquido de cultivo celular de la levadura; (ii) someter el concentrado de células de levadura a un tratamiento de adición de un ácido mineral para ajustar el pH dentro del intervalo de 1 a 4; (iii) aplicar después al concentrado un tratamiento de calentamiento a una temperatura de 40 a 70 °C; y (iv) finalmente, secar el concentrado. 2. El método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina, de acuerdo con la reivindicación 1, en que se usa una levadura perteneciente a Saccharomyces como la levadura que tiene la capacidad para producir S-adenosil-L-metionina. 3. El método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina, de acuerdo con la reivindicación 2, en que la levadura que pertenece a Saccharomyces es Saccharomyces cerevisiae. 4. El método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina, de acuerdo con la reivindicación 1, en que el ácido mineral utilizado en el tratamiento de adición de un ácido mineral es ácido sulfúrico. 5. El método para producir una levadura seca que contiene S-adenosil-L-metionina, de acuerdo con la reivindicación 1, en que el concentrado es secado mediante un método de liofilización o un método de secado por pulverización. E07742933 15-11-2011