La presente invención se relaciona con un método para el diagnóstico y/o el pronóstico de metástasis en cáncer de mama ER+ que comprende medir los niveles de expresión del gen c-MAF o de la proteína codificada por dicho gen en el tumor primario,

en donde si los niveles de expresión de dicho gen están incrementados respecto a sus niveles de expresión en la muestra control, entonces dicho sujeto presenta un diagnóstico positivo de metástasis o una mayor propensión a desarrollar una metástasis. Asimismo, la invención también se relaciona con el empleo del gen c-MAF y/o la proteína c-MAF como diana terapéutica para el tratamiento de la metástasis del cáncer de mama ER+.

MÉTODO PARA EL DIAGNÓSTICO, PRONÓSTICO Y TRATAMIENTO DE LA METÍSTASIS DE CÍNCER DE MAMA

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se relaciona con un método para el diagnóstico o el pronóstico de metástasis en cáncer de mama que comprende medir los niveles de expresión del gen o la proteína c-MAF en el tumor primario. Asimismo, la invención también se relaciona con el empleo del gen y/o la proteína c-MAF como diana terapéutica para el tratamiento de la metástasis del cáncer de mama.

ANTECEDENTES

Mundialmente, el cáncer de mama es el segundo tipo más común de cáncer (10, 4%; tras el cáncer de pulmón) y la quinta causa más común de muerte por cáncer (tras el cáncer de pulmón, cáncer de estómago, cáncer de hígado, y cáncer de colon) . Entre las mujeres, el cáncer de mama es la causa más común de muerte por cáncer. En 2005, el cáncer de mama produjo 502.000 muertes en el mundo (el 7% de las muertes por cáncer; casi el 1% de todas las muertes) . El número de casos mundiales ha aumentado significativamente desde la década de 1970, un fenómeno del que se echa la culpa parcialmente a los estilos de vida modernos en el mundo occidental.

El cáncer de mama se clasifica en fases según el sistema TNM. El pronóstico está íntimamente unido a los resultados de la clasificación en fases, y la clasificación en fases también se usa para asignar pacientes a tratamientos tanto en ensayos clínicos como en la práctica médica. La información para clasificar en fases es como sigue:

! TX: El tumor primario no se puede evaluar. T0: No hay evidencia de tumor. Tis:

Carcinoma in situ, no invasión. T1: El tumor es de 2 cm o menos. T2: El tumor es de más de 2 cm pero de menos de 5 cm. T3: El tumor es de más de 5 cm. T4:

Tumor de cualquier tamaño que crece en la pared del pecho o piel, o cáncer de mama inflamatorio.

! NX: Los ganglios linfáticos cercanos no se pueden evaluar. N0: El cáncer no se ha extendido a los ganglios linfáticos regionales. N1: El cáncer se ha extendido a 1 a 3 ganglios linfáticos de la axila o a uno mamario interno. N2: El cáncer se ha extendido a 4 a 9 ganglios linfáticos de la axila o a múltiples ganglios mamarios internos. N3: Aplica uno de los siguientes:

• El cáncer se ha extendido a 10 ó más ganglios linfáticos de la axila,

o el cáncer se ha extendido a los ganglios linfáticos bajo la clavícula,

o el cáncer se ha extendido a los ganglios linfáticos por encima de la clavícula o el cáncer afecta a los ganglios linfáticos de la axila y se ha extendido a los ganglios linfáticos mamarios internos, o el cáncer afecta a 4 ó más ganglios linfáticos de la axila, y se encuentran cantidades mínimas de cáncer en los ganglios mamarios internos o en biopsia de ganglios linfáticos centinelas.

! MX: La presencia de extensión distante (metástasis) no se puede evaluar. M0: No hay extensión distante. M1: Se ha producido la extensión a órganos distantes, que no incluyen el ganglio linfático supraclavicular.

El hecho de que la mayoría de las muertes en pacientes con cáncer por tumores sólidos se produzca por posterior metástasis hace que sea crucial comprender los mecanismos moleculares y celulares que permiten a un tumor metastatizar. Publicaciones recientes han demostrado cómo la metástasis se produce mediante mecanismos complejos aún poco conocidos y también cómo los diferentes tipos celulares metastáticos presentan un tropismo hacia determinados órganos.

El hecho de que la mayoría de las muertes en pacientes con cáncer por tumores sólidos se produzca por posterior metástasis hace que sea crucial comprender los mecanismos moleculares y celulares que permiten a un tumor metastatizar. Publicaciones recientes han demostrado cómo la metástasis se produce mediante mecanismos complejos aún poco conocidos y también cómo los diferentes tipos celulares metastáticos presentan un tropismo hacia determinados órganos. Estas células metastáticas tejido específicas tienen una serie de funciones adquiridas que le permiten colonizar órganos concretos.

Todas las células tienen receptores en su superficie, en su citoplasma y el núcleo celular. Ciertos mensajeros químicos tales como las hormonas se unen a dichos receptores y esto provoca cambios en la célula. Son tres receptores importantes que pueden afectar a las células del cáncer de mama: receptor de estrógeno (ER) , receptor de progesterona (PR) y HER2/neu. Las células que tengan alguno de estos receptores se les coloca un signo positivo para el receptor presente y un signo negativo si está ausente: ER+ (positivo) , ER negativo (ER-) , PR+ (positivo) , PR negativo (PR-) , HER2+ (positivo) y HER2 negativo (HER2-) . El estado de receptor ha convertido en una evaluación crítica de todos los cánceres de mama, ya que determina la idoneidad del uso de tratamientos específicos, por ejemplo, tamoxifeno y o trastuzumab. La isoforma alfa del receptor de estrógenos (ER) , está sobreexpresada en alrededor del 65% de los casos de cáncer de mama diagnosticados. Este tipo de cáncer de mama se refiere como "ER-positivo" (ER+) . En este caso la unión del estrógeno al ER estimula la proliferación de las células mamarias tumorales. Las células tumorales ER+ son altamente dependientes de este estímulo para proliferar por lo que el ER se utiliza en la actualidad como una diana terapéutica.

El pilar principal del tratamiento de cáncer de mama es la cirugía cuando el tumor está localizado, con posible terapia adyuvante hormonal (con tamoxifeno o un inhibidor de aromatasa) , quimioterapia, y/o radioterapia. En la actualidad, las recomendaciones de tratamiento después de la cirugía (terapia adyuvante) siguen un patrón. Este patrón está sujeto a cambio, ya que cada dos años, tiene lugar una conferencia mundial en St. Gallen, Suiza, para discutir los resultados reales de los estudios multicentros mundiales. Asimismo, dicho patrón también se revisa según el criterio consenso del National Institute of Health (NIH) . Basándose en estos criterios, más del 85-90% de los pacientes que no presentan metástasis en nódulos linfáticos serían candidatos para recibir terapia sistémica adyuvante.

En la actualidad, ensayos de PCR como Oncotype DX o ensayos de microarrays como MammaPrint pueden predecir el riesgo de recaída del cáncer de mama basada en la expresión de determinados genes. En febrero de 2007, el ensayo MammaPrint se convirtió en el primer indicador de cáncer de mama en conseguir autorización oficial de la Food and Drug Administration.

La solicitud de patente EP1961825 describe un método para predecir la aparición de metástasis de cáncer de mama a hueso, pulmón, hígado o cerebro, que comprende determinar en una muestra de tejido tumoral el nivel de expresión de uno o más marcadores respecto a su correspondiente nivel de expresión en una muestra control, entre los que se encuentra c-MAF. Sin embargo, este documento requiere la determinación de varios genes simultáneamente para poder determinar la supervivencia de pacientes de cáncer de mama y la correlación entre la capacidad de la firma genómica de predecir la supervivencia libre de metástasis a hueso no resultó estadísticamente significativa.

Bos, P.D., et al. [Nature, 2009, 459:1005-1009] describe genes involucrados en la metástasis de cáncer de mama al cerebro.

La solicitud de patente US2005/0181375 describe métodos para la detección de cáncer de mama metastásico basados en la detección de los niveles de expresión de una serie de genes que se encuentran regulados al alza o a la baja en tumores metastasicos y, en particular, en tumores que metastizan al cerebro.

La solicitud de patente internacional WO2010/000907 describe una firma genética útil como predictor genómico de metástasis distal en pacientes de cáncer de mama.

Sin embargo, no existen en el estado de la técnica marcadores genéticos que permitan diagnosticar y/o pronosticar si un paciente que sufre un determinado cáncer de mama, como es el cáncer de mama ER+ , va a sufrir o no metástasis, pudiendo aplicar de esta manera una terapia adecuada al sujeto que padece dicho cáncer. Por lo tanto, existe la necesidad de identificar nuevos marcadores que permitan diagnosticar la presencia de metástasis en sujetos que padecen cáncer de mama ER+ y/o predecir la probabilidad de un sujeto que padece cáncer de mama ER+ a desarrollar metástasis. La identificación de nuevos factores de pronóstico servirá para guiar... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro para diagnosticar metástasis en un sujeto afectado de cáncer de mama ER+ y/o para pronosticar la propensión a desarrollar metástasis en un sujeto afectado de cáncer de mama ER+ que comprende

(i) cuantificar el nivel de expresión del gen c-MAF en una muestra de tejido tumoral de dicho sujeto y

(ii) comparar el nivel de expresión previamente obtenido con el nivel de expresión

de dicho gen en una muestra control, en donde si los niveles de expresión de dicho gen están incrementados respecto los niveles de expresión de dicho gen en la muestra control, entonces dicho sujeto presenta un diagnóstico positivo de metástasis o una mayor propensión a desarrollar una metástasis.

2. Método según la reivindicaciones 1, en donde la muestra control es una muestra de tejido tumoral de cáncer de mama ER+ de un sujeto que no ha sufrido metástasis.

3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde la cuantificación de los niveles de expresión del gen c-MAF comprende la cuantificación del ARN mensajero (ARNm) de dicho gen, o un fragmento de dicho ARNm, el ADN complementario (ADNc) de dicho gen, o un fragmento de dicho ANDc, o sus mezclas.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la cuantificación de los niveles de expresión se realiza mediante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa o un array de ADN o ARN.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde la cuantificación de los niveles de expresión del gen c-MAF comprende la cuantificación de los niveles de proteína codificada por dicho gen o de una variante de la misma.

6. Método según la reivindicación 5, en donde la cuantificación de los niveles de proteína se realiza mediante western blot, ELISA o un array de proteínas.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la metástasis es metástasis en hueso.

8. Método según la reivindicación 7 en donde la metástasis en hueso es metástasis osteolítica.

9. Uso de un agente inhibidor de c-MAF en la elaboración de un medicamento para en el tratamiento y/o la prevención de la metástasis de cáncer de mama ER+.

10. Uso según la reivindicación 9, en donde el agente inhibidor de c-MAF se selecciona del grupo formado por un ARNip específico para c-MAF, un oligonucleótido antisentido específico para c-MAF, una ribozima específica para c-MAF, un anticuerpo inhibidor de c-MAF, una variante de c-MAF dominante negativa y un compuesto de la tabla 1 o de la tabla 2.

11. Uso según la reivindicación 9 en donde la metástasis es metástasis en hueso.

12. Uso según la reivindicación 11 en donde la metástasis en hueso es metástasis osteolítica.

13. Uso de un reactivo capaz de cuantificar los niveles de expresión del gen c-MAF para diagnosticar y/o pronosticar metástasis en un sujeto que padece cáncer de mama ER+

o para diseñar una terapia personalizada a un sujeto afectado de cáncer de mama ER+.

14. Uso según la reivindicación 13, en donde el reactivo para cuantificar los niveles de expresión del gen c-MAF es un ácido nucleico que hibrida con la secuencia de nucleótidos del gen c-MAF o un anticuerpo, o un fragmento del mismo capaz de detectar un antígeno, capaz de unirse específicamente a la proteína codificada por el gen c-MAF o cualquier variante de dicha proteína.

15. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 13 ó 14 en donde la metástasis es metástasis en hueso.

16. Uso según la reivindicación 15 en donde la metástasis en hueso es metástasis osteolítica.

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

Nº solicitud: 201031478

ESPAÑA

Fecha de presentación de la solicitud: 06.10.2010

Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : C12Q1/68 (2006.01)

DOCUMENTOS RELEVANTES

53. 549. Todo el documento. 1-16 A GIANCOTTI V. "Breast cancer markers." Cancer Letters (2006) Vol. 243, página.

14. 159. Página.

14. 146 y 151. 1-16 Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº : Fecha de realización del informe 01.02.2012 Examinador M. J. García Bueno Página 1/4

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

Nº de solicitud: 201031478

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación) C12Q Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) INVENES, EPODOC, WPI, TXTE, TXTF, MEDLINE, BIOSIS, NPL.

Informe del Estado de la Técnica Página 2/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201031478

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 01.02.2012

Declaración

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986) .

Base de la Opinión.

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Informe del Estado de la Técnica Página 3/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201031478

1. Documentos considerados.

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

53. 549. Todo el documento. 2003 D03 GIANCOTTI V. "Breast cancer markers." Cancer Letters (2006) Vol. 243, página.

14. 159. Página.

14. 146 y 151. 2006

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración La presente solicitud de invención consiste en un método in vitro para diagnosticar y/ o pronosticar metástasis en un sujeto afectado de cáncer de mama ER+ que comprende cuantificar el nivel de expresión del gen c-MAF en una muestra de tejido tumoral de dicho sujeto y comprar el nivel de expresión previamente obtenido con el de una muestra control, en donde si los niveles de expresión de dicho gen están incrementados con respecto a la muestra control, entonces dicho sujeto presenta un diagnóstico positivo (reivindicaciones 1-8) .

La presente solicitud de invención también consiste en el uso de un agente inhibidor de c-MAF en la elaboración de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la metástasis del cáncer de mama ER+ (reivindicaciones 9-16) .

El documento D01 se considera el más próximo al estado de la técnica al objeto de las reivindicaciones 1-16, y divulga un método de diagnóstico de metástasis de hueso, de pulmón y de cerebro en un sujeto afectado por cáncer de mama, donde se cuantifica el nivel de expresión de un marcador seleccionado de una lista de marcador donde se encuentra v-Maf para el diagnóstico de metástasis de hueso, y se compara con una muestra control (ver todo el documento) .

El documento D02 divulga una investigación sobre las bases moleculares de la metástasis ósea osteolítica en el cáncer de mama humano a través de líneas celulares con actividad metastásica elevada y la validación de los genes que están sobrexpresados en dichas células (ver todo el documento) .

El documento D02 no menciona la sobreexpresión del gen c-Maf para el diagnóstico o pronóstico de metástasis ósea en pacientes con cáncer de mama.

El documento D03 divulga que c-Maf es un coactivador del complejo estrógeno-receptor de estrógeno, al igual que otros miembros de la familia de proteínas AP1, como Fra-1 o Jun-B. Se ha demostrado que la proteína Fra-1 se expresa en altos niveles en los carcinomas de tiroides, y podría ser considerado como un marcador del fenotipo agresivo de cáncer de mama (ver página.

14. 146 y 151) .

1. NOVEDAD (Art. 6.1 Ley 11/1986) Y ACTIVIDAD INVENTIVA (Art. 8.1 Ley 11/1986) .

1.1. Reivindicaciones 1-16

La invención reivindicada difiere principalmente de los documentos D01-D03 en que ninguno de los documentos citados muestra el uso de c-Maf como marcador para el diagnóstico o pronóstico de metástasis óseas en pacientes con cáncer de mama.

Aunque en los documentos D01-D03 se divulga el uso de genes que codifican para las proteínas de la familia de proteínas activadoras AP-1, familia a la que pertenece C-Maf, no se considera obvio que se utilice este gen como marcador de la misma forma que v-Maf, Jun-B o Fra-1.

Así, la invención reivindicada en los reivindicaciones 1-16 es, con referencia a los documentos D01-D03, nueva y se considera que implica actividad inventiva según los artículos 6.1 y 8.1 Ley 11/1986.

Informe del Estado de la Técnica Página 4/4