Un método in vitro para diagnosticar o pronosticar el cáncer de próstata en un paciente,

que comprende:

(i) amplificar un ARN de PCA3 específico de cáncer de próstata sometido a corte y empalme que carece de al menos el intrón 3, entre el exón 3 y el exón 4, de una muestra de orina de un paciente mediante el uso de un par de cebadores; y

(ii) detectar un producto de amplificación obtenido del mismo con una sonda que es específica para una unión exón 3-exón 4 de PCA3, en el que dicho producto de amplificación está asociado a la presencia de cáncer de próstata o a la predisposición a él en dicho paciente.

Método específico de detección de cáncer de próstata basado en el gen PCA3, y kits para el mismo.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere, en general, al cáncer de próstata. Más específicamente, la presente invención se refiere a un método para diagnosticar el cáncer de próstata en un paciente mediante la detección de una secuencia de PCA3, y más en particular un ARN de PCA3, y la secuencia de PCA3 detectada en una muestra del paciente está asociada específicamente al cáncer de próstata. La invención se refiere además a equipos que contienen cebadores de ácido nucleico y sondas de ácido nucleico para realizar un diagnóstico, determinación, o pronóstico en un ser humano que parece cáncer de próstata.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

A lo largo de la última década, el cáncer de próstata se ha convertido en la neoplasia maligna diagnosticada con más frecuencia en hombres, y la segunda causa más destacada de muerte por cáncer en hombres de la población occidental, tras el cáncer de pulmón.

La detección y el tratamiento tempranos del cáncer de próstata antes de que se haya propagado desde la glándula de la próstata reduce la mortalidad de la enfermedad. Esto es especialmente cierto para hombres jóvenes, que tienen mayor riesgo de morir por esta neoplasia maligna perniciosa pero de crecimiento lento. Esta comprensión ha estimulado los intentos cada vez mayores de realizar un diagnóstico y tratamiento tempranos. De hecho, la Sociedad Americana del Cáncer y la Asociación Americana de Urología recomiendan que la población masculina en general se someta a una prueba de cribado anual del cáncer de próstata comenzando a los 50 años de edad. La edad recomendada para el cribado se reduce a 40 para hombres que tienen un historial familiar de cáncer de próstata u otros factores de riesgo.

Con este interés creciente en el cribado del cáncer de próstata, se están examinando de manera rutinaria más hombres que nunca antes en busca de cáncer de próstata. No es sorprendente que esta práctica haya incrementado la detección temprana del inicio de la enfermedad, tal como se refleja por un incremento aparente de la incidencia del cáncer de próstata y una disminución de la edad media aparente de diagnóstico. La esperanza clínica es que la detección temprana del cáncer de próstata antes de que exista metástasis reducirá la tasa de mortalidad global. Los contribuyentes de la asistencia sanitaria desean el cribado y la detección temprana para que esto se traduzca en una reducción de la carga de la asistencia sanitaria, ya que el tratamiento temprano puede ser menos radical, más eficaz y, por lo tanto, proporcionar un coste menor por cada paciente tratado. La clave para llevar a cabo este objetivo sigue siendo proporcionar mejores herramientas de diagnóstico diferencial.

El cribado del cáncer de próstata implica actualmente tanto la palpación de la próstata mediante tacto rectal como el análisis de los niveles plasmáticos del antígeno específico de próstata (PSA) . El PSA es una serín proteasa producida por el epitelio prostático que se secreta normalmente en el líquido seminal para licuarlo. La alteración de la integridad anatómica de la glándula prostática puede afectar a las barreras celulares que limitan normalmente el PSA al interior del sistema de conductos de la próstata, lo que permite que se disperse a la sangre o la orina. Varias afecciones pueden dar como resultado el escape del PSA a la sangre. Estas incluyen la inflamación de la próstata, retención urinaria, infección prostática, hiperplasia prostática benigna, y cáncer de próstata. La manipulación física de la próstata también puede incrementar los niveles séricos de PSA, pero un estímulo suave, tal como un tacto rectal (TR) , no incrementa normalmente el PSA sérico. Por lo tanto, no es sorprendente que el cribado del PSA sérico como indicador del cáncer de próstata no tenga un valor de diagnóstico absoluto.

A pesar del hecho de que la medida de los niveles sanguíneos de PSA puede ser el resultado de una diversidad de causas diferentes, aun así es la base del cribado primario del cáncer de próstata. La medida del PSA total (tPSA) como ensayo de diagnóstico para predecir el cáncer de próstata se ha estado utilizando desde 1991. Los niveles de 4 ng/ml o mayores en suero sanguíneo se consideran anormales y con valor de pronóstico de cáncer de próstata. Sin embargo, la sensibilidad de tales niveles elevados de tPSA es solamente del 79%; por lo que se deja sin detectar un 21% de pacientes con cáncer de próstata. La especificidad para todos los valores de tPSA de 4 ng/ml o más es muy escasa. Además, se ha informado que las estimaciones de especificidad para los niveles de tPSA > 4, 0 ng/ml están en el intervalo del 20% al 59%, con una media de alrededor del 33%. La gran mayoría de falsos positivos se demuestra finalmente que son hiperplasias prostáticas benignas. La especificidad es la más baja para el tPSA moderadamente elevado, en la denominada zona gris de 4 a 10 ng/ml. Este nivel bajo de especificidad da como resultado otros procedimientos de diagnóstico más invasivos y costosos, tales como ultrasonido transrectal y biopsias de próstata. Tales pruebas son innecesarias, y también muy traumáticas para el paciente. Tampoco se debería subestimar el impacto psicológico de haber recibido un diagnóstico positivo hasta que se demuestra que es un falso positivo.

Debido a las desventajas del tPSA, la investigación se ha centrado en intentar desarrollar derivados de PSA para incrementar la sensibilidad y especificidad de esta aproximación de diagnóstico general.

Una modificación es el PSA libre (fPSA) , que fue aprobado por la FDA en 1998. El PSA en el suero se puede hallar en una forma sin unir o complejado con inhibidores de proteasas circulantes, de manera más habitual con alfa-1antitripsina (ACT) . Los médicos han demostrado que la proporción de PSA unido a ACT era significativamente mayor en hombres con cáncer de próstata que en hombres sin afectación, o en aquellos con hipertrofia prostática benigna (BPH) . Como directriz, si el 25% o menos del PSA total está libre, esto es un indicador de un posible cáncer de próstata. El análisis del fPSA se aprobó para el uso en hombres con tPSAs de 4 a 10 ng/ml. Así, el análisis de fPSA se situó para mejorar la especificidad respecto de la del tPSA solo. Sin embargo, la capacidad de predicción del análisis de fPSA no es tan buena en personas con niveles de tPSA realmente bajos o realmente altos. El tPSA muy bajo, independientemente del fPSA medido, tiene valor pronóstico de no tener cáncer, mientras lo contrario es cierto con niveles muy elevados de tPSA. La utilidad diagnóstica del fPSA es relativamente limitada, ya que puede estar asociada a BPH o cáncer de próstata. Se ha demostrado que el uso de fPSA en combinación con tPSA reduce el número de biopsias innecesarias en alrededor de un 20%.

Evidentemente, la biopsia de próstata es el método de referencia para confirmar el cáncer de próstata. Sin embargo, incluso una biopsia no es segura al 100%. El método de referencia es la biopsia sextante, en la que la recogida de muestras de tejido se guía mediante ultrasonido transrectal. A menudo, las seis muestras no detectan el cáncer, y es necesario un segundo procedimiento de biopsia o más de seis muestras.

A pesar de las mejoras en el cribado del cáncer de próstata que han surgido en los últimos diez años, sigue existiendo una gran necesidad insatisfecha en cuanto a la sensibilidad y especificidad del diagnóstico, incluso cuando estas herramientas se usan en combinación. Uniendo esto a la gran incidencia del cáncer de próstata y a la necesidad de una detección temprana y precisa, el potencial de una auténtica herramienta de diagnóstico diferencial es muy significativo.

Hace unos años se descubrió un nuevo marcador de cáncer de próstata, PCA3, mediante un análisis de expresión diferencial destinado a destacar los genes asociados al desarrollo de cáncer de próstata (documentos USN 09/402.713; 09/675.650; 09/996.953; 60/445.436; WO 98/45420; y WO 01/23550) . PCA3 está localizado en el cromosoma 9, y está compuesto de cuatro exones. Codifica al menos cuatro transcritos diferentes que se generan mediante corte y empalme alternativo y poliadenilación. Mediante análisis de RT-PCR, se descubrió que la expresión de PCA3 se limitaba a la próstata y no existía en todos los demás tejidos, lo que incluye testículo, ovario, mama y vejiga. El análisis mediante transferencia de Northern demostró que PCA3 se expresa... [Seguir leyendo]

1. Un método in vitro para diagnosticar o pronosticar el cáncer de próstata en un paciente, que comprende:

(i) amplificar un ARN de PCA3 específico de cáncer de próstata sometido a corte y empalme que carece de al menos el intrón 3, entre el exón 3 y el exón 4, de una muestra de orina de un paciente mediante el uso de un par de cebadores; y

(ii) detectar un producto de amplificación obtenido del mismo con una sonda que es específica para una unión exón 3-exón 4 de PCA3,

en el que dicho producto de amplificación está asociado a la presencia de cáncer de próstata o a la predisposición a él en dicho paciente.

2. El método de la reivindicación 1, en el que el ARN de PCA3 específico de cáncer de próstata sometido a corte y empalme también carece de

(i) el intrón 1 entre el exón 1 y el exón 2; o

(ii) el intrón 2 entre el exón 2 y el exón 3.

3. El método de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho ARN de PCA3 no tiene intrones.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicha sonda es una sonda de hibridación.

5. El método de la reivindicación 4, en el que dicha sonda está marcada de manera detectable.

6. Un equipo de diagnóstico para detectar la presencia de un ARN de PCA3 específico de cáncer de próstata sometido a corte y empalme que carece de al menos el intrón 3, entre el exón 3 y el exón 4, en una muestra de orina de un paciente, que comprende:

(i) al menos un par de cebadores que están diseñados para permitir la amplificación de dicho ARN de PCA3, en el que un cebador es específico para una unión exón 3-exón 4 de PCA3; y

(ii) una sonda que es específica para la unión exón 3-exón 4 de dicho PCA3.

7. Un equipo de diagnóstico para detectar la presencia de un ARN de PCA3 específico de cáncer de próstata sometido a corte y empalme que carece del intrón 3, entre el exón 3 y el exón 4, en una muestra de orina de un paciente, que comprende:

(i) al menos un par de cebadores que están diseñados para permitir la amplificación de dicho ARN de PCA3 a través de una unión exón 3-exón 4 de PCA3; y

(ii) una sonda que es específica para la unión exón 3-exón 4 de dicho PCA3.