Un método para predecir la respuesta de un paciente a un fármaco empleado en el tratamiento de una condición inflamatoria en el paciente,

el método comprende: determinar el nivel de la expresión del gen de epirregulina en la muestra de sangre del paciente; y predecir la respuesta del paciente al fármaco empleado en el tratamiento de la condición inflamatoria.

Método de el uso de una proteína de epirregulina y un á cido nucleico codificando la misma en condiciones inflamatorias

CAMPO DE LA INVENCION

La presente invención se refiere a unas secuencias de nucleótido y proteína de epirregulina y métodos de emplearlas como un marcador de respuesta a fármacos en condiciones inflamatorias. La invención también proporciona una proteína de epirregulina para el uso en el tratamiento de artritis reumatoide o artritis reumatoide juvenil.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

La epirregulina es un miembro de la familia de factores de crecimiento epidérmicos (EGF) de los factores de crecimiento, que incluye, entre otros, el EGF, el factor de crecimiento transformante alfa (TGF) , la anfiregulina, la heparina que enlaza con el EGF, la betacelulina, y las varias heregulinas. Fue primero identificada en el medio condicionado por la célula NIH 3T3 y es uno de los siete ligandos conocidos para el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) (Ver Yarden y otros, Nat. REv. Mol. Cell Biol., 2001, 2:127-137) . La secuencia de codificación del ADNc de la epirregulina humano predice un polipéptido de cadena única de 46 aminoácidos, exhibiendo un 24-50% de homología con las secuencias de otros ligandos EGFR.

La epirregulina es sintetizada como un precursor de la transmembrana antes de ser escindida proteolíticamente para liberar una proteína activa de 46 aminoácidos. El modo de acción de la epirregulina es similar al de otros miembros de la familia de EGF en que enlaza y activa la tirosina-quinasa, los receptores de la familia ErbB (ErbB1 a B4) . A diferencia de otros ligandos de la EGFR, la epirregulina muestra una actividad biológica dual; estimula la proliferación de fibroblastos, hepatocitos, células del músculo liso, y queratinocitos pero inhibe el crecimiento de varias líneas celulares epiteliales derivadas de tumores (Ver Toyoda y otros, Biochem. J., 1997, 326:69-75) . La epirregulina también muestra más bioactividad potente in vitro que otros factores de crecimiento similares del EGF. Los miembros de la familia EGF, incluyendo la epirregulina, juegan un papel fundamental en los tejidos epiteliales y los queratinocitos humanos de una forma autocrina; sin embargo, sus papeles en las respuestas inmunes y el papel fisiológico de la epirregulina aun no se ha dilucidado.

La epirregulina es uno de los ligandos para el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) . La súper familia de los EGF y la familia de los EGFR, incluyendo el EGFR (ErbB1) , ErbB2 (HER2) , ErbB3 (HER3) , y ErbB4 (HER4) (Ver Riese & Stern, BioEssays 1998, 20: 41-48) , juegan un papel fundamental en los tejidos epiteliales. Los miembros de la familia de EGF, incluyendo el EGF, el factor de crecimiento transformante a, la anfiregulina, la heparina que enlaza con el EGF (HB-EGF) , la epirregulina, y otros miembros, regulan estos receptores induciendo el homo- y hetero- oligomerización. (Ver Yarden & Sliwkowski, Nat. REv. Mol. Cell biol., 2001, 2:127-137) . Los miembros de la familia del EGF varían en su capacidad para activar distintos heterodímeros ErbB, y este mecanismo puede, en parte, explicar las diferencias en sus bioactiviades (Ver Jackson y otros, EMBO J., 2003, 22:2704-2716) .

El precursor anclado a la membrana de la familia de los EGF está enzimáticamente procesado externamente para liberar una forma soluble madura que actúa como factor de crecimiento autocrino y/o paracrinoa, mientras que algunos miembros de la familia de los EGF actúan en la forma anclada a la membrana. Se sugirió que un precursor de la membrana bioactivo , pro-HB-EGF, inducía la inhibición o la apoptosis del crecimiento en lugar de la respuesta proliferativa inducida por el HB-EGF soluble. La epirregulina actúa como un factor de crecimiento autocrino en los queratinocitos humanos normales in vitro, la diferenciación de las células del musculo liso vascular y como uno de los mediadores paracrinos que propagan las señales de hormonas luteinizantes en el folículo ovárico; sin embargo, su papel fisiológico in vivo todavía no es conocido.

Tanto la forma enlazada a la membrana con ola secretada de la epirregulina están identificas, Sirawasa y otros (Ver PNAS, 2004, 101:13921) han informado que la deficiencia de epirregulina causa dermatitis crónica en ratones.

La respuesta inflamatoria representa la respuesta del cuerpo a una lesión que puede surgir de una variedad de agentes como organismos infecciosos, toxinas incluyendo el alcohol, alergias, respuestas autoinmunes, traumas, laceraciones, quemaduras, oclusiones circulatorias y otros factores que incluyan daños en el tejido. Actualmente, la proteína C-reactiva se usa extensivamente como marcador del estado inflamatorio. Sin embargo, es un marcador no específico que no puede diagnosticar una enfermedad particular pero se usa para ganar comprensión de las condiciones de la inflamación. Se necesitan marcadores más sensibles ya sean marcadores individuales o usados en combinación con la proteína C-reactiva para un valor pronóstico mayor (Philips y otros, J. of Endocrinology, 1999; 161, 195-198) .

El curado de heridas es el proceso de reparar que sigue a la lesión a la piel y otros tejidos lisos. El proceso de curar heridas implica dos componentes esenciales - regeneración y reparación. En la regeneración, un tejido especializado es reemplazado por la proliferación de células especializadas no dañadas circundantes. En la reparación, el tejido perdido es reemplazado por tejido de granulación para formar tejido de cicatrización.

La psoriasis (PS) es una enfermedad de la piel común caracterizada por la inflamación de la piel y la hiperproliferación de los queratinocitos epidérmicos que puede ser provocada tanto por factores de riesgo genéticos como medioambientales. Afecta aproximadamente a un 2% de individuos de la población del norte de Europa. Las tres características cardinales de las lesiones psoriásicas son eritema, endurecimiento y escamación. Se ve una asociación en la artritis psoriásica en un 6-10% de los casos. En los pacientes jóvenes es frecuentemente provocada por la infección con el estreptococo del grupo A, y puede también aparecer con la infección del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) (ver Duvic y otros, J. Invest. Dermatol. 1990, 95:38S-40S) . La patogénesis de la psoriasis todavía no es conocida.

La artritis reumatoide (RA) es una enfermedad sistémica con manifestaciones clínicas altamente variables. La artritis reumatoide generalmente afecta a las articulaciones de las extremidades e implica las articulaciones sinoviales entre dos huesos. Es una enfermedad inflamatoria crónica que pasa a través de varias etapas y finalmente resulta en una destrucción masiva de las articulaciones o inflamaciones en el área del tendón. DE acuerdo al estado reciente del conocimiento, se considera que las células T inician y mantienen la inflamación. En este proceso, las citocinas así como las células mesenquimales (macrófagos y fibroblastos sinoviales) están activas. Es muy probable que la TNF-a citocina sea uno de los mediadores de la inflamación. Promueve la formación del pannus, que es típico de la RA, y promueve la destrucción del cartílago. La TNF-a aumenta el número de moléculas de adhesión para los leucocitos en la superficie de las células endoteliales y la penetración de la capa endotelial capilar. Esto resulta en una afluencia masiva de leucocitos en la sinovia. La citocina promueve la secreción de metaloproteinasas de la matriz por los sinoviocitos. Estos enzimas están directamente implicados en la destrucción de los huesos y el cartílago. La TNF-a también sintetiza receptores de dolor, lo que está asociado con la inducción de sensaciones de dolor. La TNF-a juega un papel crítico en la iniciación y el mantenimiento de la RA.

Los cambios en la expresión del gen y/o proteína se han descrito anteriormente en la psoriasis y otras enfermedades inflamatorias. La IL-1 y la TNF-a están reguladas por aumento la psoriasis y activan varias vías de señalización celular incluyendo la vía NF-KB. Se ha informado de la expresis

ón del gen diferencial de mucho transcritos en la piel psoriásica en comparación con la piel normal (Ver Bowcock y otros, Human Molecular Genetics, 2001, 10:1793) . La modificación puede ser por regulación por aumento (por ejemplo: IL-8R) o por regulación por disminución (por ejemplo proteína 1 rica en cisteína.

Draper Bradley K. y otros "la epirregulina mejora la reparación de las heridas por escisión del murino", Wound Repair and Regeneration: Publicación... [Seguir leyendo]

1. Un método para predecir la respuesta de un paciente a un fármaco empleado en el tratamiento de una condición inflamatoria en el paciente, el método comprende: determinar el nivel de la expresión del gen de epirregulina en la muestra de sangre del paciente; y predecir la respuesta del paciente al fármaco empleado en el tratamiento de la condición inflamatoria.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el nivel de la expresión del gen de epirregulina es elevado en la muestra de sangre del paciente.

3. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la condición inflamatoria comprende artritis reumatoide, psoriasis, dermatitis atópica, artritis psoriásica, artritis reumatoide juvenil, o una combinación de las mismas.

4. Un método para monitorizar la respuesta al fármaco en un paciente que está recibiendo tratamiento para una condición inflamatoria, el método comprende: determinar el nivel de proteína de epirregulina en la muestra de suero del paciente; y monitorizar la respuesta al fármaco en el paciente que está recibiendo tratamiento para una condición inflamatoria.

5. El método de la reivindicación 4, en donde el nivel de proteína de epirregulina es elevado en la muestra de suero del paciente.

6. El método de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde la condición inflamatoria comprende artritis reumatoide, psoriasis, dermatitis atópica, artritis psoriásica, artritis reumatoide juvenil, o una combinación de las mismas.

7. Un método para determinar la probabilidad de que un sujeto desarrolle una condición inflamatoria, el método comprende: determinar el nivel de la expresión del gen de epirregulina en la muestra de sangre del sujeto.

8. El uso de la proteína de epirregulina sola o en combinación con al menos un compuesto antiinflamatorio en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide o la artritis reumatoide juvenil.

9. El uso de la reivindicación 8, en donde la epirregulina es administrada como una formulación oral, parenteral, subcutánea o tópica.

10. Un método para monitorizar la respuesta al fármaco en un paciente que está recibiendo tratamiento para una condición inflamatoria con un compuesto antiinflamatorio, el método comprende: medir la expresión del gen de epirregulina en la sangre del paciente o la muestra de suero para niveles elevados de la expresión del gen de epirregulina; y monitorizar la respuesta al fármaco en el paciente que está recibiendo el tratamiento para la condición inflamatoria con el compuesto antiinflamatorio.

11. La Proteína de epirregulina para el uso en el tratamiento de la artritis reumatoide o la artritis reumatoide juvenil.

12. La proteína de epirregulina en combinación con al menos un compuesto antiinflamatorio para el uso en el tratamiento de la artritis reumatoide o la artritis reumatoide juvenil.

13. La proteína de epirregulina de la reivindicación 11 o la combinación de la reivindicación 12, un una forma adecuada para la administración oral, parenteral, subcutánea o tópica.