MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS INMUNOMODULADORES PARA LA PIEL.
Método de identificación de compuestos inmunomoduladores para la piel.
La presente invención se refiere a un método para identificar un compuesto o una mezcla de compuestos con efecto inmunomodulador en la piel, basado en el análisis de la cantidad del producto de la expresión de los genes PTPRE, ICOSL, Gal-1, Gal-3, SLA, SOCS1, THBS1 o GADD45A, y a un kit para llevar a cabo dicho método. Este método permite identificar si un compuesto o una mezcla de compuestos tienen un efecto inductor de tolerancia inmunológica y, por tanto, es útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria de la piel.
Asimismo, este método permite identificar si un compuesto o una mezcla de compuestos tiene un efecto fotoprotector frente a los rayos UV para la piel y, por tanto, es útil para la prevención del cáncer de piel.
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200930428.
Solicitante: UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: MITTELBRUNN HERRERO,MARIA, SANCHEZ MADRID,FRANCISCO, DE LA FUENTE FLORES,HORTENSIA, LAMANA DOMINGUEZ,AMALIA.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K49/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones para examen in vivo.
PDF original: ES-2366323_A1.pdf
Fragmento de la descripción:
Método de identificación de compuestos inmunomoduladores para la piel.
La presente invención se refiere a un método para identificar un compuesto o una mezcla de compuestos con efecto inmunomodulador en la piel, basado en el análisis de la cantidad del producto de la expresión de los genes PTPRE, ICOSL, Gal-1, Gal-3, SLA, SOCS1, THBS1 o GADD45A, y a un kit para llevar a cabo dicho método. Este método permite identificar si un compuesto o una mezcla de compuestos tiene un efecto inductor de tolerancia inmunológica y, por tanto, es útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria de la piel. Asimismo, este método permite identificar si un compuesto o una mezcla de compuestos tiene un efecto fotoprotector frente a los rayos UV para la piel y, por tanto, es útil para la prevención del cáncer de piel.
Estado de la técnica anterior
Las células dendríticas son células presentadoras de antígenos altamente especializadas que desempeñan un papel esencial en inmunidad y tolerancia. Las células dendríticas se encuentran en los tejidos periféricos donde actúan como "centinelas", capturando antígenos para su presentación a los linfocitos CD4+ y CD8+. La maduración de las células dendríticas es inducida por exposición a patógenos, exposición a citoquinas proinflamatorias o por interacción con CD40, entre otros estímulos. En respuesta a la maduración, las células dendríticas alteran su patrón de migración de receptores, aumentan la expresión de moléculas coestimulatorias y del complejo mayor de histocompatibilidad y secretan citoquinas y quimioquinas que inician o estimulan la respuesta linfocitaria (Steinman y Banchereau. 2007. Nature 449:419-426).
Las células dendríticas juegan un papel esencial en el desarrollo de los linajes de linfocitos T efectores o linfocitos Th (del inglés "T helper cells") de tipo 1, de tipo 2 y el recientemente identificado linaje Th17 (Bettelli y Kuchroo. 2006. Nature 441:235-238; Mangan et al. 2006. Nature 441:231-234), así como la inducción de linfocitos T reguladores. En condiciones normales, la mayoría de las células dendríticas periféricas tienen un fenotipo inmaduro; expresan bajos niveles de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC, del inglés "mayor histocompatibility complex") de clase II y coestimuladoras y, por tanto, no son capaces de activar a las células T naïve. A pesar de su papel como presentadoras de antígenos y coestimuladoras de las células T naïve, las células dendríticas son importantes mediadores de la tolerancia inmune periférica y contribuyen al mantenimiento de la homeostasis inmunitaria (Morelli y Thomson. 2007. Nat Rev Immunol 7:610-621). Históricamente, las células dendríticas inmaduras se han considerado principalmente no inflamatorias o tolerogénicas, mientras que las células dendríticas maduras se consideran capaces de inducir una respuesta proinflamatoria. Aunque generalmente correcta, esta visión es una simplificación (Wallet y Tisch. 2005. Clin Med Res 3:166-175). La tolerogenicidad de las células dendríticas no es una propiedad restringida únicamente a un subgrupo de células dendríticas ni a las células dendríticas inmaduras. De hecho, la tolerogenicidad de las células dendríticas se asocia a varios procesos, incluyendo resistencia a factores inductores de la maduración, producción de factores solubles tales como IL-10, y activación de enzimas tales como indoleamina 2,3-4 dioxigenasa (Morelli y Thomson. 2007. Nat Rev Immunol 7:610-621). A pesar de la importancia de células dendríticas como células presentadoras de antígenos, nuestro conocimiento acerca de las moléculas expresadas por las células dendríticas que podrían estar implicadas en el resultado final de la respuesta inmune (tolerancia o inflamación) es muy limitado.
Uno de los más potentes supresores de la respuesta inmune es la radiación UV. La exposición a la luz UV provoca eritema y edema, así como la iniciación de neoplasias de la piel que serían normalmente eliminadas por acción del sistema inmune. La radiación UV es uno de los más potentes inmunosupresores de la respuesta inmune (Schwarz. 1999. Allergy 54:1252-1261). Las neoplasias de la piel como consecuencia de la exposición a la luz UV se desarrollan, probablemente, porque la radiación UVB también reduce la respuesta inmune que las destruirían. La radiación UVB ha demostrado también ser capaz de suprimir la respuesta inmune a una amplia variedad de antígenos, incluyendo microorganismos. El impacto sobre la respuesta inmune de la radiación UVA, que representa el 95% de la radiación UV solar, ha sido menos estudiada, aunque estudios recientes han puesto de manifiesto la importancia de esta clase de radiación en la supresión de la respuesta inmune inducida por luz UV. (Aubin, F. 2003. Eur J Dermatol 13:515-523; Furio, L. 2005. J Invest Dermatol. 125. 1032-8. Legitimo, A. 2007. Clin Exp Immunol, 148 564-72. Stoebner, P.E. Br J Dermatol, 2007. 156 1315-20).
La radiación UV penetra en la dermis superior causando lesiones celulares y moleculares en las células dendríticas allí localizadas (células de Langerhans y células dendríticas dérmicas). El efecto de la radiación UV en las células dendríticas ha sido estudiado in vivo e in vitro (Bechetoille et al. 2007. Tissue Eng 13:2667-2679; Hamakawa et al. 2006. Photodermatol Photoimmunol Photomed 22:116-123; Schwarz. 2005. Int Arch Allergy Immunol 137:187-193). Recientemente, varios grupos han descrito el efecto que la radiación UV tiene en el fenotipo y en la función de las células dendríticas derivadas de monocitos. La radiación UV provoca una maduración defectiva de las células dendríticas y un fenotipo migratorio anómalo (Bechetoille et al. 2007. Tissue Eng 13:2667-2679; Schwarz. 2005. Int Arch Allergy Immunol 137:187-193). Sin embargo, los cambios en la expresión génica inducidos en las células dendríticas en respuesta a la exposición a la radiación UVA/UVB no han sido examinados de manera sistemática.
El sistema inmune de la piel es un compartimento altamente reactivo desde el punto de vista inmunológico y está implicado en la mayoría de las enfermedades dermatológicas inflamatorias, incluyendo la psoriasis y la dermatitis (Nestle y Nickoloff. 2007. J Clin Invest 117:2382-2385). El uso de fototerapia para tratar enfermedades inflamatorias de la piel es otro ejemplo del efecto inmunosupresor de la radiación UV (Aubin, F. 2003. Eur J Dermatol 13:515-523; Kist y Voorhees. 2005. Adv Dermatol 21:235-250; Stern. 2007. P N Engl J Med 357:682-690). El papel que los linfocitos T desempeñan en la patogénesis de estas enfermedades ha sido ampliamente estudiado; por el contrario, la implicación del las células dendríticas dérmicas, más recientemente identificadas (Lenz et al. 1993. J Clin Invest 92:2587-2596; Nestle et al. 1993. J Immunol 151:6535-6545), está sólo comenzando a ser comprendida (Klechevsky et al. 2008. Immunity 29:497-510). La efectividad de la fototerapia puede depender de los efectos que la radiación UV tiene sobre la expresión de moléculas reguladoras del sistema inmune en las células dendríticas, sin embargo, las dianas y los mecanismos efectores de la fototerapia son hasta la fecha desconocidos.
Explicación de la invención
La exposición solar induce una inmunosupresión local y sistémica en el cuerpo humano. Distintas evidencias indican que este fenómeno es principalmente consecuencia del efecto que la luz UV ejerce en las células dendríticas de la piel. Sin embargo, los cambios en la expresión génica inducidos en las células dendríticas en respuesta a la exposición a la radiación UV no han sido examinados de manera sistemática.
Con el fin de investigar las bases moleculares de este tipo de inmunosupresión, en la presente invención se han analizado in vitro los cambios en el perfil de expresión génica inducidos por la radiación UV en células dendríticas derivadas a partir de monocitos, prestando especial interés a los genes implicados en la regulación de la respuesta inmune. La radiación UV promueve la disminución de la expresión de los genes del receptor de proteína tirosina fosfatasa de tipo E (PTPRE), el ligando del coestimulador inducible (ICOSL), galectina-1 (Gal-1), galectina-3 (Gal-3), la proteína adaptadora similar a Src (SLA) o el supresor de la señalización de citoquinas 1 (SOCS1); y el aumento de la expresión de los genes de trombospondina-1 (THBS1) o la proteína de arresto del crecimiento y daño al DNA (GADD45A) en las células dendríticas derivadas... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Método para identificar un compuesto o una mezcla de compuestos con efecto inmunomodulador en la piel, que comprende:
2. Método según la reivindicación 1, que además comprende entre los pasos (b) y (d):
3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 donde en el paso (d) se detecta la cantidad del producto de expresión de los genes PTPRE, ICOSL, Gal-1, Gal-3, SLA, SOCS1, THBS1 y GADD45A.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde el efecto inmunomodulador es un efecto inductor de tolerancia inmunológica.
5. Método según la reivindicación 4 donde el efecto inductor de tolerancia inmunológica se asigna si la diferencia significativa del paso (f) es:
6. Método según la reivindicación 5 donde el efecto inductor de tolerancia inmunológica se asigna si la diferencia significativa del paso (f) es:
7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 3 donde el efecto inmunomodulador es un efecto fotoprotector de rayos UV.
8. Método según la reivindicación 7 donde el efecto fotoprotector de rayos UV se asigna si la diferencia significativa del paso (f) es:
9. Método según la reivindicación 8 donde el efecto fotoprotector de rayos UV se asigna si la diferencia significativa del paso (f) es:
10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde la radiación UV es radiación UVA y/o UVB.
11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 donde el producto de expresión de los genes es el RNAm.
12. Método según la reivindicación 11 donde el RNAm se detecta mediante un microarray de ácidos nucleicos.
13. Método según la reivindicación 11 donde el RNAm se detecta mediante RT-PCR.
14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 donde el producto de expresión de los genes es la proteína.
15. Método según la reivindicación 14 donde la proteína se detecta en un extracto de células totales.
16. Método según cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 15 donde la proteína se detecta mediante western-blot.
17. Kit para llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 que comprende cebadores, sondas, y/o anticuerpos para la detección del producto de la expresión de, al menos, uno de los genes seleccionados de la lista que comprende: PTPRE, ICOSL, Gal-1, Gal-3, SLA, SOCS1, THBS1 o GADD45A.
18. Kit según la reivindicación 17 que comprende cebadores, sondas, y/o anticuerpos para la detección del producto de la expresión de los genes PTPRE, ICOSL, Gal-1, Gal-3, SLA, SOCS1, THBS1 y GADD45A.
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