Procedimiento para la preparación de la 3,5-di-omicron-acil-2-fluoro-2-C-metil-D-ribono-gamma-lactona.

Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula:

en donde los R, independientemente entre sí, son fenilo de 1 a 6 átomos de carbono, opcionalmente substituido con alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o fenilo opcionalmente substituido, el cual procedimiento comprende uno o varios de los pasos siguientes:

(a) reacción de un compuesto de fórmula en donde R1 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con una base y un compuesto de fórmula en donde R2 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, para formar una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha indicado más arriba;

b) reacción de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba, con una enzima capaz de hidrolizar el compuesto de fórmula 23 para obtener el correspondiente ácido carboxílico y aislando una mezcla de los compuestos 22 y 24;

c) transformación de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba, mediante tratamiento con ácido en una mezcla de los compuestos

d) acilación de una mezcla de los compuestos con un haluro de acilo de fórmula RCOX

en donde R es como se ha especificado más arriba y X es un halógeno, o con un anhidrido de acilo RC (O) O (O) CR en donde R es como se ha especificado más arriba, en presencia de una base para formar una mezcla de los compuestos en donde R es como se ha especificado más arriba;

e) recristalización de una mezcla de los compuestos en donde R es como se ha especificado más arriba, en un disolvente orgánico y aislando el compuesto de fórmula

Procedimiento para la preparación de la 3, 5-di-omicron-acil-2-fluoro-2-C-metil-D-ribono-gamma-lactona La presente invención proporciona un nuevo procedimiento para la preparación de derivados de la 3, 5-di-O-acil-2fluoro-2-C-metil-D-ribono-y-lactona, de fórmula:

la cual es una clave intermedia en la preparación de la 1- (2-desoxi-2-fluoro-2-C-metil-º-D-ribofuranosil) citosina un compuesto que posee una potente y selectiva actividad contra el virus de la hepatitis C (Publicación PCT WO 2005/003147) .

Un buen número de rutas de síntesis para la preparación del producto intermedio 2 han sido descritas en la publicación PCT de la patente WO 2006/012440, pero estas rutas de síntesis tienen el defecto de un alto costo de fabricación y dificultades técnicas para la fabricación a escala industrial. El empleo de una pesada carga de un catalizador de dihidroxilación asimétrica (AD-mix-º) , un agente de fluoracoón, el trifluoruro de dietilaminoazufre, y el reactivo Wittig, son los principales responsables de los costos. El empleo de reactivos altamente tóxicos, como por ejemplo AD-mix-º, reactovos altamente reactovos, como por ejemplo, el trifluoruro de dietilaminoazufre, y el aislamiento cromatográfico de los productos intermedios contribuyen a aumentar las dificultades.

Objeto de la presente invención es el encontrar un método de síntesis alternativo que no tenga las desventajas conocidas de la síntesis ya conocida en la técnica.

El objetivo puede ser alcanzado con el procedimiento de la presente invención, como se especifica a continuación.

Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula:

en donde los R, independientemente entre sí, son alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, fenil-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono opcionalmente substituido, o fenilo opcionalmente substituido, el cual procedimiento comprende uno varios de los pasos:

(a) reacción de un compuesto de fórmula en donde R1 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con una base y un compuesto de fórmula en donde R2 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, para formar una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba; 10 b) reacción de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba, con una enzima capaz de hidrolizar el compuesto de fórmula 23 para obtener el correspondiente ácido carboxílico y aislar una mezcla de los compuestos 22 y 24; c) transformación de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba, mediante tratamiento con ácido en una mezcla de los 10 compuestos d) acilación de una mezcla de los compuestos con un haluro de acilo de fórmula RCOX, en donde R es como se ha especificado más arriba y X es un halógeno, o con un anhídrido de acilo RC (O) O (O) CR, en donde R es como se ha especificado más arriba, en presencia de una base para formar una mezcla de los compuestos en donde R es como se ha especificado más arriba; 10 e) recristalización de una mezcla de compuestos en donde R es como se ha especificado más arriba, en un disolvente orgánico e aislando el compuesto de fórmula 2. Como se emplean en la presente, los siguientes términos tienen los siguientes significados: La expresión "fenilo-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, como se emplea en la presente se refiere a un alquilo de 1

a 6 átomos de carbono substituido con un grupo fenilo, de preferencia bencilo. La expresión "fenilo-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, opcionalmente substituido", o "fenilo opcionalmente substituido" se refiere a fenilo-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono substituido con alquilo de 1 a 3 átomos de carbono o fenilo substituido con alquilo de 1 a 3 átomos de carbono.

La expresión "alquilo de 1 a 4 átomos de carbono" o "alquilo de 1 a 6 átomos de carbono", se refiere a metilo, etilo, 10 n-propilo, iso-propilo, n-butilo, butilo secundario, butilo terciario junto con pentilo y sus isómeros y hexilo y sus isómeros.

El término "halógeno" se refiere a cloro, bromo, yodo y flúor, y de preferencia es cloro.

En una versión preferida del procedimiento de la presente invención, los substituyentes tienen el siguiente significado: R es fenilo, R1 es metilo, etilo, ó n-butilo, de preferencia etilo, R2 es metilo o etilo, de preferencia metilo, y 15 X es cloro.

Paso a)

El paso a) requiere la reacción de un compuesto de fórmula en donde R1 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con una base y un compuesto de fórmula en donde R2 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, para formar una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba.

La base empleada para el paso de reacción a) es una base no nucleofílica seleccionada del grupo formado por la 5 litio diisopropilamida (LDA) , la litio 2, 2, 6, 6- tetrametilpiperidina (LTMP) y la litio hexametildisilazida (LHMDS) .

La reacción en el paso (a) puede efectuarse en un disolvente adecuado orgánico no reactivo. Ejemplos ilustrativos incluyen el tetrahidrofurano (THF) , el 2-Me-THF, el tolueno, el dietil éter, el t-butil metil éter, y similares La temperatura de reacción se mantiene por norma por debajo de - 55 º C. El aislamiento de la mezcla de los compuestos de fórmula de 22, 23 y 24 puede tener lugar por adición de una solución acuosa de cloruro de amonio a 10 la mezcla de reacción, y extrayendo la fase acuosa con un disolvente orgánico adecuado, como por ejemplo, el diclorometano.

Paso b)

El paso b) requiere una mezcla de reacción de los compuestos en donde R1 y R2 son como se especificado más arriba, con una enzima capaz de hidrolizar el compuesto de fórmula 23 con el correspondiente ácido carboxílico y aislando una mezcla de los compuestos 22 y 24.

En principio, puede emplearse cualquier enzima que hidrolice preferentemente el compuesto 23 en el correspondiente ácido carboxílico en presencia de los compuestos 22 y 24.

Las enzimas útiles, que hidrolizan preferentemente el compuesto 23 en presencia del compuesto 22, incluyen la lipasa TOY de la Pseudomonas aeruginosa (Yoyobo) ; la estearasa HLE del hígado de caballo (Fluka) , la estearasa MME del Mucor miehei (Fluka) ; la estearasa CLE de la Candida lipolítica (Fluka) ; la lipasa L1 de la Burholderia cepacia (Roche) ; y la formulación purificada de CALB que es la de la lipasa L2 de la firma Roche.

La lipasa de la Candida Antarctica forma B (CALB) , Novozymes, es una enzima preferida debido a su alta reactividad y estereoselectividad. De preferencia, la hidrólisis selectiva del compuesto 23 se efectúa con CALB a una temperatura de aproximadamente 20-45 º C en un tampón acuoso de pH aproximadamente 7, 0 - 7, 5 , que puede contener sulfato de amonio, sulfato de potasio, sulfato de sodio, fosfato de dimetilamonio, acetato de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio, sorbitol, sucrosa, glicina u otros aditivos beneficiosos para la actividad enzimática.

El aislamiento de la mezcla de los compuestos 22 y 24 del medio acuoso alcalino puede ser efectuado por vía de la extracción con un disolvente orgánico adecuado, de preferencia con diclorometano.

Paso c)

El paso c) requiere la transformación de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se especificado más arriba, mediante un tratamiento con ácido en una mezcla de los compuestos Como norma, el tratamiento con ácido en el paso c) se efectúa con un ácido seleccionado del grupo formado por el ácido acético, el ácido sulfúrico, el ácido clorhídrico, el ácido metansulfónico o el ácido trifluoroacético, de preferencia con el ácido sulfúrico acuoso.

La conversión de los compuestos 22 y 24 en los correspondientes 25 y 26 en el paso (a) puede efectuarse también empleando un ácido como catalizador en una solución mezcla de un disolvente orgánico y agua a elevada temperatura. Las condiciones adecuadas incluyen ácido acético/agua/95 º C, Amberlyst 15/acetonitrilo/agua/82 º C, ácido sulfúrico/etanol/agua/80 º C y ácido clorhídrico/1-propranol/agua/88 º C.

La mezcla de compuestos 25 y 26 puede ser aislada normalmente, neutralizando la mezcla de reacción con una base adecuada, extrayendo con un disolvente orgánico adecuado y seguidamente eliminando el disolvente.

Paso d)

El paso d) requiere la acilación de una mezcla con un haluro de acilo de fórmula RCOX, en donde R es como se especificado más arriba, y X es un halógeno,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula:

en donde los R, independientemente entre sí, son fenilo de 1 a 6 átomos de carbono, opcionalmente substituido con alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o fenilo opcionalmente substituido, el cual procedimiento comprende uno o varios de los pasos siguientes:

(a) reacción de un compuesto de fórmula en donde R1 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con una base y un compuesto de fórmula en donde R2 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, para formar una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha indicado más arriba; b) reacción de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha especificado más arriba, con una enzima capaz de hidrolizar el compuesto de fórmula 23 para obtener el correspondiente ácido carboxílico y aislando una mezcla de los compuestos 22 y 24; c) transformación de una mezcla de los compuestos en donde R1 y R2 son como se ha espÃcificado más arriba, mediante tratamiento con ácido en una mezcla de los compuestos d) acilación de una mezcla de los compuestos con un haluro de acilo de fórmula RCOX

en donde R es como se ha especificado más arriba y X es un halógeno, o con un anhidrido de acilo RC (O) O (O) CR en donde R es como se ha especificado más arriba, en presencia de una base para formar una mezcla de los compuestos en donde R es como se ha especificado más arriba; e) recristalización de una mezcla de los compuestos en donde R es como se ha especificado más arriba, en un disolvente orgánico y aislando el compuesto de fórmula 2.

2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R es fenilo, R1 es metilo, etilo o n-butilo, R2 es 10 metilo o etilo y X es cloro.

3. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, la base empleada para el paso de reacción a) se selecciona del grupo formado por la litio diisopropilamida, la litio 2, 2, 6, 6-tetrametilpiperidina, y la litio hexametildisilazida.

4. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, la enzima empleada en el paso (b) 15 es una lipasa 2 de la Candida Antarctica (CALB) .

5. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 ó 4, caracterizado porque, la hidrólisis enzimática del paso b) se efectúa en un medio tampón acuoso a un pH entre 7, 0 y 7, 5 y una temperatura entre 20 º C y 45 º C.

6. Procedimiento de acuerdo con la reivindicaciones 1, 4 ó 5, caracterizado porque, en el paso b) la mezcla de los compuestos 22 y 24 se recupera mediante la extracción de la mezcla de reacción con un disolvente orgánico.

7. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, el tratamiento con ácido en el paso c) se efectúa con un ácido seleccionado del grupo formado por el ácido acético, el ácido sulfúrico, el ácido clorhídrico, el ácido metansulfónico o el ácido trifluoroacético.

8. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 ó 7, caracterizado porque, la base empleada para la acilación en el paso d) es una amina terciaria.

9. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 ó 8, caracterizado porque, la acilación en el paso d) se efectúa con cloruro de benzoilo.

10. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, la recristalización en el paso e) se efectúa con un alcohol alifático seleccionado entre el metanol, el etanol, el n-propanol y el isopropanol.

11. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 ó 10, caracterizado porque, se emplea el isopropanol.