INTERACCIONES DE UNIÓN MEJORADA EN ENSAYOS CON TIRAS REACTIVAS.

Una tira reactiva para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira cromatografica que tiene un extremo de contacto para su puesta en contacto con la disoluci6n de muestra; y una sonda de captura inmovilizada en una zona de captura de la tira cromatografica alejada del extremo de contacto, y la sonda de captura es capaz de hibridar al acido nucleico objetivo o a una sonda de captura de enganche unida al acido nucleico objetivo, en la que la sonda de captura esta unida a un separador de la sonda de captura y el separador de la sonda de captura esta unido a la zona de captura, por lo que inmoviliza la sonda de captura en la zona de captura y separa la sonda de captura de la zona de captura, caracterizadaºporuue:

i) el separador de la sonda de captura esta unido a un extremo de la sonda de captura, y el extremo de la sonda de captura que no esta unido al separador de la sonda de captura esta acoplado a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche cuando la sonda de captura ha hibridado a la sonda de captura de enganche;

ii) el separador de la sonda de captura esta unido a una parte de la sonda de captura entre los extremos de la sonda de captura, y uno o ambos extremos de la sonda de captura estan acoplados a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche cuando la sonda de captura ha hibridado a la sonda de captura de enganche;

iii) el separador de la sonda de captura comprende: un nucle6tido que comprende una nucleobase capaz de formar una interacci6n por apilamiento con un par de bases formado cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche; fosfato de 3hidroxipropilo; o fosfato de hexaetilen glicol;

o iv) el separador de la sonda de captura comprende una proteina adsorbida directamente en la zona de captura, y unida covalentemente a la sonda de captura mediante un ligador

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2001/003039.

Solicitante: DIAGNOSTICS FOR THE REAL WORLD, LTD.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 840 DEL REY AVENUE SUNNYVALE, CALIFORNIA 94085 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: DINEVA, MAGDA, ANASTASSOVA, HU, HSIANG-YUN, LEE,HELEN.

Fecha de Publicación: 20 de Enero de 2012.

Fecha Solicitud PCT: 6 de Julio de 2001.

Clasificación PCT:

B01L3/00 TECNICAS INDUSTRIALES DIVERSAS; TRANSPORTES. › B01 PROCEDIMIENTOS O APARATOS FISICOS O QUIMICOS EN GENERAL. › B01L APARATOS DE LABORATORIO PARA LA QUIMICA O LA FISICA, DE USO GENERAL (aparatos de uso médico o farmacéutico A61; aparatos para aplicaciones industriales o aparatos de laboratorio cuya estructura y funciones son comparables a las de aparatos industriales similares, ver las clases relativas a los aparatos industriales, en particular las subclases B01 y C12; aparatos de separación o de destilación B01D; dispositivos de mezcla o de agitación B01F; atomizadores B05B; tamices, cribas B07B; tapones, capuchones B65D; manipulación de líquidos en general B67; bombas de vacío F04; sifones F04F 10/00; grifos, válvulas F16K; tubos, empalmes para tubos F16L; aparatos especialmente adaptados al estudio y análisis de materiales G01, particularmente G01N; aparatos eléctricos u ópticos, ver las subclases apropiadas en las secciones G y H). › Recipientes o utensilios para laboratorios, p. ej. cristalería de laboratorio (botellas B65D; equipos para enzimología o microbiología C12M 1/00 ); Cuentagotas (recipientes para volumetría G01F).
C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
G01F23/04 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01F MEDIDA DEL VOLUMEN, FLUJO VOLUMETRICO, FLUJO MASICO O NIVEL DE LIQUIDOS; DOSIFICACION VOLUMETRICA. › G01F 23/00 Indicación o medida del nivel de líquidos o materiales sólidos fluyentes, p. ej. indicación en términos de volumen, indicación por medio de una señal de alarma. › mediante elementos sumergibles, p. ej. sondas de nivel.
G01N33/558 G01 […] › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › utilizando la difusión o la migración del anticuerpo o del antígeno.

Clasificación antigua:

B01L3/00 B01L […] › Recipientes o utensilios para laboratorios, p. ej. cristalería de laboratorio (botellas B65D; equipos para enzimología o microbiología C12M 1/00 ); Cuentagotas (recipientes para volumetría G01F).
C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

PDF original: ES-2372477_T3.pdf

Fragmento de la descripción:

Interacciones de uni6n mejorada en ensayos con tiras reactivas.

La presente invenci6n se refiere a la detecci6n mejorada de acidos nucleicos mediante tiras reactivas. Las tiras reactivas de la invenci6n se usan para detectar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de mues5 tra, por ejemplo para identificar si un paciente esta infectado con un microorganismo pat6geno, tal como Chlamydia trachomatis.

Algunos ensayos convencionales para la detecci6n de la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra se basan en la amplificaci6n del acido nucleico objetivo mediante el uso de la reacci6n en cadena de la polimerasa (PCR) . Aunque esta reacci6n permite la detecci6n de pequenas cantidades del acido nucleico objetivo, puede implicar varias horas antes de que se obtenga un resultado. Esto puede ser una desventaja significativa, debido a que a menudo se desea obtener el resultado tan rapidamente como sea posible, por ejemplo, para mantener al minimo los tiempos de espera de los pacientes. Otras desventajas adicionales de tales metodos son la necesidad de un equipo especializado costoso para llevar a cabo la reacci6n, y el coste relativamente elevado de los reactivos.

En contraste, las tiras reactivas detectan el acido nucleico objetivo sin amplificar sin la necesidad de ningun equipo especializado, y los resultados se pueden obtener mucho mas rapidamente que en los metodos basados en PCR. Los pacientes se pueden tratar asi en la misma visita. Esto es especialmente ventajoso cuando es poco probable que el paciente vuelva en una fecha posterior, o no pueda hacerlo.

En una tira reactiva convencional tipica descrita en el documento US 5.310.650, se inmoviliza una sonda de captura de ADN monocatenario en un filtro de nitrocelulosa en una zona de captura alejada de un extremo del filtro (el extremo de contacto) . Parte de la secuencia de la sonda de captura es complementaria a la secuencia de una primera regi6n del acido nucleico objetivo a detectar. Una sonda de detecci6n de ADN monocatenario marcada esta inmovilizada en el filtro de nitrocelulosa en una zona de la sonda localizada entre la zona de captura y el extremo de contacto del filtro. La sonda de detecci6n tiene una secuencia complementaria a la secuencia de una segunda regi6n (distinta de la primera regi6n) del acido nucleico objetivo.

Para detectar el ADN objetivo en una disoluci6n de muestra que se piensa que contiene el ADN objetivo, el extremo de contacto del filtro de nitrocelulosa se pone en contacto con la disoluci6n de muestra. La disoluci6n de muestra impregna el filtro mediante acci6n capilar, y pasa por la zona de la sonda y la zona de captura. A medida que la disoluci6n de muestra pasa por la zona de la sonda, moviliza la sonda de detecci6n y provoca que se eleve con la disoluci6n de muestra hacia la zona de captura. La sonda de detecci6n movilizada puede hibridar despues a la segunda regi6n de cualquier ADN objetivo presente en la disoluci6n de muestra.

Cuando la sonda de detecci6n hibridada y el ADN objetivo llegan a la zona de captura, la primera regi6n del ADN objetivo puede hibridar a la sonda de captura inmovilizada. Se forma, por tanto, un complejo ternario entre el acido nucleico objetivo, la sonda de captura y la sonda de detecci6n marcada. La presencia de un marcador en la zona de captura, por lo tanto, indica que el ADN objetivo esta presente en la disoluci6n de muestra.

Con un segundo tipo de tira reactiva convencional, la sonda de detecci6n de ADN marcada no esta inmovilizada en el filtro de nitrocelulosa. En su lugar, se anade la sonda de detecci6n a la disoluci6n de muestra en condiciones que permiten la hibridaci6n de la sonda de detecci6n a cualquier acido nucleico objetivo en la disoluci6n de muestra. El extremo de contacto del filtro de nitrocelulosa se pone en contacto despues con la disoluci6n de muestra, y a medida que la disoluci6n de muestra impregna la tira reactiva, el acido nucleico objetivo que esta hibridado a la sonda de detecci6n es capturado en la zona de captura por la sonda de captura.

Sin embargo, se ha descubierto que la sensibilidad de la detecci6n de acidos nucleicos mediante tiras reactivas convencionales puede ser baja. Si el acido nucleico objetivo es bicatenario, la sensibilidad de la detecci6n mediante tiras reactivas puede ser especialmente baja. Por lo tanto, a veces puede no detectarse la presencia del acido nu

45 cleico objetivo en una disoluci6n de muestra. Se desea, por lo tanto, mejorar la sensibilidad de la detecci6n de acidos nucleicos objetivo mediante tiras reactivas.

Segun un primer aspecto de la invenci6n, se proporciona una tira reactiva para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira cromatografica que tiene un extremo de contacto para su puesta en contacto con la disoluci6n de muestra; y 50 una sonda de captura inmovilizada en una zona de captura de la tira cromatografica alejada del extremo de contacto, y la sonda de captura es capaz de hibridar al acido nucleico objetivo o a una sonda de captura de enganche unida al acido nucleico objetivo, en la que la sonda de captura esta unida a un separador de la sonda de captura y el separador de la sonda de captura esta unido a la zona de captura, por lo que inmoviliza la sonda de captura en la zona de captura y separa la sonda de captura de la zona de captura, caracterizada porque:

E019476

i) el separador de la sonda de captura esta unido a un extremo de la sonda de captura, y el extremo de la sonda de captura que no esta unido al separador de la sonda de captura esta acoplado a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche cuando la sonda de captura ha hibridado a la sonda de captura de enganche;

ii) el separador de la sonda de captura esta unido a una parte de la sonda de captura entre los extremos de la sonda de captura, y uno o ambos extremos de la sonda de captura estan acoplados a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche cuando la sonda de captura ha hibridado a la sonda de captura de enganche;

iii) el separador de la sonda de captura comprende: un nucle6tido que comprende una nucleobase capaz de formar una interacci6n por apilamiento con un par de bases formado cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche; fosfato de 3hidroxipropilo; o fosfato de hexaetilen glicol; o iv) el separador de la sonda de captura comprende una proteina adsorbida directamente en la zona de captura, y unida covalentemente a la sonda de captura mediante un ligador.

La expresi6n "tira cromatografica" se usa en la presente memoria para significar cualquier tira porosa de un material capaz de transportar una disoluci6n por capilaridad.

El separador de la sonda de captura puede comprender cualquier componente que separe la sonda de captura de la zona de captura sin impedir que la sonda de captura pueda hibridar al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche. Preferiblemente, el separador de la sonda de captura comprende un biopolimero.

El separador de la sonda de captura puede comprender una proteina. El termino "proteina" se usa en la presente memoria para significar cualquier compuesto que comprende uno o mas residuos de aminoacidos. Los ejemplos de proteinas preferidas son las proteinas que se dan de manera natural, preferiblemente albumina de suero bovino (BSA) , tiroglobulina, o derivados de las mismas. Los derivados incluyen proteinas que difieren de BSA o tiroglobulina por la sustituci6n, adici6n o deleci6n de aminoacidos, o por la modificaci6n posttraduccional.

Para unir la sonda de captura al separador proteico sera necesario en general funcionalizar la sonda de captura. Esto se puede llevar a cabo mediante el uso de un modificador que comprende un primer grupo reactivo capaz de reaccionar con la sonda de captura y un segundo grupo reactivo capaz de reaccionar con la proteina. Un modificador adecuado comprende un grupo fosforamidita y un grupo amino primario (o un grupo amino primario protegido que se desprotege antes del uso) . El grupo fosforamidita es capaz de reaccionar con un grupo hidroxilo (normalmente el 5'OH o el 3'OH de la sonda de captura cuando la sonda de captura es un acido nucleico) y el grupo amino primario es capaz de reaccionar... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

0. Una tira reactiva para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

iii) el separador de la sonda de captura comprende: un nucle6tido que comprende una nucleobase capaz de formar una interacci6n por apilamiento con un par de bases formado cuando la sonda de captura ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche; fosfato de 3hidroxipropilo; o fosfato de hexaetilen glicol; o iv) el separador de la sonda de captura comprende una proteina adsorbida directamente en la zona de 25 captura, y unida covalentemente a la sonda de captura mediante un ligador.

:. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 1 (iii) en la que el separador de la sonda de captura comprende ademas una proteina, y la sonda de captura esta acoplada al nucle6tido y el nucle6tido esta acoplado a la proteina, por lo que separa la sonda de captura de la proteina.

3. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 2 en la que el nucle6tido esta acoplado a la proteina mediante un 30 ligador.

4. Una tira reactiva segun cualquier reivindicaci6n precedente en la que la proteina es BSA, tiroglobulina, o un derivado de las mismas.

5. Una tira reactiva segun cualquier reivindicaci6n precedente que comprende ademas una sonda de detecci6n, inmovilizada de manera liberable en una zona de la sonda localizada entre el extremo de contacto y la zona de cap

tura de la tira cromatografica, y la sonda de detecci6n es capaz de hibridar al acido nucleico objetivo para permitir la detecci6n del acido nucleico objetivo.

6. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 5 en la que la sonda de detecci6n esta acoplada a un marcador que permite la detecci6n directa del acido nucleico objetivo cuando la sonda de detecci6n ha hibridado al acido nucleico objetivo.

7. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 5 en la que la sonda de detecci6n esta acoplada a un ligando de detecci6n que se puede unir a un resto de uni6n al ligando de detecci6n para permitir la detecci6n indirecta del acido nucleico objetivo cuando la sonda de detecci6n ha hibridado al acido nucleico objetivo.

8. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 6 6 7 en la que el marcador o el ligando de detecci6n esta unido a un separador de la sonda de detecci6n y el separador de la sonda de detecci6n esta unido a la sonda de detecci6n, por 45 lo que acopla el marcador o el ligando de detecci6n a la sonda de detecci6n y separa el marcador o el ligando de detecci6n de la sonda de detecci6n.

:. Una tira reactiva para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira cromatografica que tiene un extremo de contacto para su puesta en contacto con la disoluci6n de muestra;

50 un resto de captura, inmovilizado en una zona de captura alejada del extremo de contacto, y el resto de captura es capaz de unirse directamente o indirectamente al acido nucleico objetivo; y una sonda de detecci6n, inmovilizada de manera liberable en una zona de la sonda localizada entre el extremo de contacto y la zona de captura, y la sonda de detecci6n es capaz de hibridar al acido nucleico objetivo y la sonda de detecci6n esta acoplada a un marcador que permite la detecci6n directa del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n, o la sonda de detecci6n esta acoplada a un ligando de detecci6n que permite la detecci6n indirecta del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n, en la que el marcador o el ligando de detecci6n esta unido a un separador de la sonda de detecci6n, y el separador de la sonda de detecci6n esta unido a la sonda de detecci6n, por lo que acopla el marcador o el ligando de detecci6n a la sonda de detecci6n y separa el marcador o el ligando de detecci6n de la sonda de detecci6n, y en la que:

i) el separador de la sonda de detecci6n esta unido a un extremo de la sonda de detecci6n, y el extremo de la sonda de detecci6n que no esta unido al separador de la sonda de detecci6n esta acoplado a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda de detecci6n ha hibridado al acido nucleico objetivo;

ii) el separador de la sonda de detecci6n esta unido a una parte de la sonda de detecci6n entre los extremos de la sonda de detecci6n, y uno o ambos extremos de la sonda de detecci6n estan acoplados a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda de detecci6n ha hibridado al acido nucleico objetivo;

iii) el separador de la sonda de detecci6n comprende: un nucle6tido que comprende una nucleobase capaz de formar una interacci6n por apilamiento con un par de bases formado cuando la sonda de detecci6n ha hibridado al acido nucleico objetivo; fosfato de 3hidroxipropilo; o fosfato de hexaetilen glicol; o iv) el separador de la sonda de detecci6n comprende una proteina.

0º. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 9 (iv) en la que la proteina es BSA, tiroglobulina, o un derivado de las mismas.

00. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 9 (iv) o 10 en la que el marcador o el ligando de detecci6n esta unido a, o forma parte de, una microesfera, y la proteina esta adsorbida directamente en la microesfera.

0:. Una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 9 (iv) , 10, o 11 en la que la proteina esta unida a la sonda de detecci6n mediante un ligador.

03. Una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 9 (iv) , o 10 a 12 en la que el separador de la sonda de detecci6n comprende ademas una molecula no proteica.

04. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 13 en la que la sonda de detecci6n esta acoplada a la molecula no proteica y la molecula no proteica esta acoplada a la proteina, por lo que separa la sonda de detecci6n de la proteina.

05. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 14 en la que la molecula no proteica esta acoplada a la proteina mediante un ligador.

06. Una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 en la que la molecula no proteica tiene una longitud de al menos tres nucle6tidos.

07. Una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16 en la que la molecula no proteica comprende un nucle6tido.

08. Una tira reactiva segun la reivindicaci6n 17 en la que la molecula no proteica consiste solamente en uno o mas nucle6tidos.

0:. Una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18 en la que el resto de captura comprende una sonda de captura capaz de hibridar al acido nucleico objetivo o a una sonda de captura de enganche unida al acido nucleico objetivo.

:º. Una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18 en la que el resto de captura es capaz de unirse a un ligando de captura acoplado a una sonda de captura unida al acido nucleico objetivo.

:0. Un equipo para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y una sonda de detecci6n capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, por lo que permite la detecci6n del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n.

E0194763.

2. 11-2011

::. Un equipo segun la reivindicaci6n 21 en el que la sonda de detecci6n esta acoplada a un marcador que permite la detecci6n directa de la sonda de detecci6n hibridada al acido nucleico objetivo, o un ligando de detecci6n que permite la detecci6n indirecta de la sonda de detecci6n hibridada al acido nucleico objetivo mediante un resto de uni6n al ligando de detecci6n, en el que el marcador o el ligando de detecci6n esta unido a un separador de la sonda de detecci6n, y el separador de la sonda de detecci6n esta unido a la sonda de detecci6n, por lo que acopla el marcador o el ligando de detecci6n a la sonda de detecci6n y separa el marcador o el ligando de detecci6n de la sonda de detecci6n.

:3. Un equipo para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira reactiva segun la reivindicaci6n 20; y una sonda de captura capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, o a una sonda de captura de enganche unida al acido nucleico objetivo, en la que la sonda de captura esta acoplada a un ligando de captura que se puede unir al resto de captura.

:4. Un equipo segun la reivindicaci6n 23 en el que el ligando de captura esta unido a un separador de la sonda de captura y el separador de la sonda de captura esta unido a la sonda de captura, por lo que acopla el ligando de captura a la sonda de captura y separa el ligando de captura de la sonda de captura.

:5. Un equipo para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira reactiva que comprende una tira cromatografica que tiene un extremo de contacto para su puesta en contacto con la disoluci6n de muestra y una sonda de captura capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, o a una sonda de captura de enganche unida al acido nucleico objetivo, y la sonda de captura esta inmovilizada en una zona de captura de la tira cromatografica alejada del extremo de contacto; y una sonda de detecci6n capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, y la sonda de detecci6n esta acoplada a un marcador que permite la detecci6n directa del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n, o la sonda de detecci6n esta acoplada a un ligando que permite la detecci6n indirecta del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n, en la que el marcador o el ligando de detecci6n esta unido a un separador de la sonda de detecci6n, y el separador de la sonda de detecci6n esta unido a la sonda de detecci6n, por lo que acopla del marcador o el ligando de detecci6n a la sonda de detecci6n y separa el marcador o el ligando de detecci6n de la sonda de detecci6n, y en la que:

:6. Un equipo para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra que comprende:

una tira reactiva que comprende una tira cromatografica que tiene un extremo de contacto para su puesta en contacto con la disoluci6n de muestra y un resto de captura inmovilizado en una zona de captura de la tira cromatografica alejada del extremo de contacto, y el resto de captura es capaz de unirse directamente o indirectamente al acido nucleico objetivo;

una sonda de captura capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, o a una sonda de captura de enganche unida al acido nucleico objetivo, en la que la sonda de captura esta acoplada a un ligando de captura que se puede unir al resto de captura; y una sonda de detecci6n capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, y la sonda de detecci6n esta acoplada a un marcador que permite la detecci6n directa del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n, o la sonda de detecci6n esta acoplada a un ligando de detecci6n que permite la detecci6n indirecta del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda de detecci6n;

en el que la sonda de captura esta unida a un separador de la sonda de captura y el separador de la sonda de captura esta unido al ligando de captura, por lo que acopla el ligando de captura a la sonda de captura y separa el ligando de captura de la sonda de captura, o el marcador o el ligando de detecci6n esta unido a un separador de la sonda de detecci6n, y el separador de la sonda de detecci6n esta unido a la sonda de detecci6n, por lo que acopla el marcador o el ligando de detecci6n a la sonda de detecci6n y separa el marcador o el ligando de detecci6n de la sonda de detecci6n; y en el que:

i) el separador esta unido a un extremo de la sonda, y el extremo de la sonda que no esta unido al separador esta acoplado a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche;

ii) el separador esta unido a una parte de la sonda entre los extremos de la sonda, y uno o ambos extremos de la sonda estan acoplados a uno o mas nucle6tidos que no hibridan al acido nucleico objetivo cuando la sonda ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche;

iii) el separador comprende: un nucle6tido que comprende una nucleobase capaz de formar una interacci6n por apilamiento con un par de bases formado cuando la sonda ha hibridado al acido nucleico objetivo o a la sonda de captura de enganche; fosfato de 3hidroxipropilo; o fosfato de hexaetilen glicol; o iv) el separador comprende una proteina.

:7. Una sonda de ensayo de tira reactiva para la detecci6n o la captura de un acido nucleico objetivo en un ensayo de tira reactiva como se define en la presente memoria, y la sonda comprende un acido nucleico o analogo de acido nucleico capaz de hibridar al acido nucleico objetivo, y un marcador que permite la detecci6n directa del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda, o un ligando que permite la captura o la detecci6n indirecta del acido nucleico objetivo mediante la utilizaci6n de la sonda, en la que el marcador o el ligando esta unido a un separador y el separador esta unido al acido nucleico o analogo de acido nucleico, por lo que separa el marcador o el ligando del acido nucleico o analogo de acido nucleico, caracterizadaºporuueº

iii) el separador comprende: un nucle6tido que comprende una nucleobase capaz de formar una interacci6n por apilamiento con un par de bases formado cuando la sonda ha hibridado al acido nucleico objetivo; fosfato de 3hidroxipropilo; o fosfato de hexaetilen glicol; o iv) el separador comprende una proteina.

:8. El uso de una tira reactiva segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, un equipo segun cualquiera de las reivindicaciones 21 a 26, o una sonda segun la reivindicaci6n 27, para analizar la presencia de un acido nucleico objetivo en una disoluci6n de muestra.

Figura 12

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