PROCEDIMIENTO DE DESACTIVACIÓN / ELIMINACIÓN DE AGENTES PATÓGENOS DE UN TEJIDO.

Procedimiento de desactivación / eliminación de agentes patógenos de un tejido. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a un procedimiento para limpiar y desinfectar tejido animal, y para la eliminación y/o desactivación de agentes patógenos del tejido animal, tal como tejido humano, incluyendo hueso o cualquier tejido, y, más particularmente, a la limpieza y desinfección del tejido para su uso como un implante. Es deseable limpiar físicamente un tejido de donante de contaminantes tales como sangre, así como eliminar o dejar inactivos los agentes patógenos potenciales (virus, bacterias, hongos, micoplasma y priones) para el uso clínico del tejido, tal como hueso, como agente de injerto, o como tejido de unión que se utilizará para reparar tendones, u otro tejido de unión. La mejor manera de conseguir esto es eliminar físicamente los contaminantes y agentes patógenos tanto como sea posible, y seguidamente atacar cualesquiera partículas patógenas, tales como virus y bacterias del hueso o del tejido de unión, con una o más soluciones de desactivación. En el curso de la vida, el hueso y el tejido de unión, ya sea alogénico, autogénico o xenográfico, es normalmente estéril con respecto a las bacterias. Esto es debido a que el sistema inmune mantiene el cuerpo aséptico. Cualquier acumulación significativa de bacterias internamente es anormal y puede conducir rápidamente a la muerte (sepsis). Sin embargo, en caso de muerte, incluso por causas distintas de esta sepsis, pueden entrar bacterias en el hueso o en el tejido de unión una vez que ha cesado la vida. Los caminos habituales son la migración desde el sistema digestivo o con origen en procesos de degradación debidos al almacenamiento y la manipulación. En consecuencia, las bacterias que se encuentran en el tejido recuperado tienden a ser más en la superficie o en zonas fácilmente accesibles desde la superficie. Los virus, sin embargo, se encuentran radicados más internamente. A diferencia de las bacterias, los virus pueden estar presentes en todo el cuerpo a lo largo de la vida sin causar una enfermedad fatal ni tan siquiera una afección evidente. Los virus se introducen en el tejido tal como hueso y tejido de unión a través del aporte sanguíneo y pueden estar presentes en capilares profundos del interior de cavidades internas del tejido, especialmente en los sistemas haversianos de los huesos. Los procedimientos de desinfección que normalmente se emplean para limpiar y desinfectar hueso y tejido de unión antes de su trasplante, son fundamentalmente tópicos y no penetran profundamente en el hueso u otros tejidos. Así, pues, son efectivos como desinfectantes tópicos, pero no combaten bien la potencial contaminación viral interna. La esterilización es una opción, pero las técnicas de esterilización dañan, típicamente, el hueso y el tejido cuando se emplean en la dosis que se necesita para dejar los virus inactivos. Puede emplearse un centrifugadora como parte de un sistema de limpieza de hueso, en la que las fuerzas centrífugas y una gravedad incrementada fuerzan los materiales y sustancias a abandonar el hueso, tanto en un estado seco como en un estado mojado o húmedo, a fin de eliminar la médula ósea y los residuos celulares. Esta acción centrífuga puede proporcionar una limpieza / desinfección efectiva para algunos contaminantes y agentes patógenos, pero los presentes inventores creen que se ocupa de los virus, especialmente de los que se encuentran en las cavidades internas del tejido, de manera eficaz. Las Patentes norteamericanas Nos. 6.682.695, 6.635.222 y 6.346.216, así como las Solicitudes de Patente norteamericanas publicadas Nos. 20040013562, 20040013561, 20030213920, 20030186421, 20030185702, 20030180181, 20030182163, 20030161753, 20030124023, 20030095890, 20030064000, 20030059920, 20030059338, 20030049245, 20030031584, 20030031581, 20030012687, 20020155519 divulgan, todas ellas, métodos para esterilizar materiales biológicos en los que pueden añadirse al material protectores contra la radiación, antes del procedimiento de esterilización. Estos protectores han sido diseñados de tal manera que reducen o evitan daños en el tejido durante el tratamiento de esterilización por radiación. La presente invención constituye una solución más rápida, eficaz, directa y eficiente para introducir protectores contra la radiación, crioprotectores, sustancias mecánicamente útiles, sustancias biológicamente útiles o agentes biológicamente activos en el seno del material biológico, tal como tejido, antes de, o durante, el procedimiento de esterilización, en comparación con los métodos anteriores. El documento US 5.977.432 (A) describe un procedimiento para limpiar injertos óseos utilizando fuerza centrífuga, así como injertos óseos producidos mediante este. Los presentes inventores constatan que una solución mucho mejor es utilizar un procedimiento de limpieza y desactivación de agentes patógenos que llegue a todos los espacios internos del tejido y que elimine los virus o los deje inactivos. Es posible llegar a los espacios internos del hueso mediante un procedimiento de presión / flujo que se sirve de bombas, según se ha divulgado en la Patente norteamericana poseída en común con la presente, Nº 5.846.484, o mediante un procedimiento de vacío según se divulga en la Patente norteamericana poseída en común con la presente, Nº 5.513.662. Es también de interés la Solicitud Internacional publicada con el Nº WO/29037. Sin embargo, los procedimientos patentados son de una implementación embarazosa y utilizan elementos de obturación para líquidos potencialmente poco fiables en un recipiente o vasija a presión. Estos sistemas patentados 2 E04706006 10-01-2012   no son deseables por estas razones. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1. De acuerdo con un aspecto de la presente invención, un procedimiento para la desactivación y/o la reducción de agentes patógenos de tejido que tiene un eje de tejido y que tiene una pluralidad de cavidades en las que residen los agentes patógenos, comprende centrifugar mediante giro o rotación en seco el tejido con una fuerza G dada que presenta una dirección dada, a fin de eliminar material del tejido y/o favorecer la penetración de disolvente en el seno del tejido, y al menos una etapa de centrifugación adicional que utiliza un fluido disolvente para dejar inactivos o reducir los agentes patógenos contenidos en el tejido. Durante la al menos una etapa de centrifugación adicional, el procedimiento incluye: orientar el eje del tejido en un ángulo no paralelo a la dirección dada de la fuerza G, siendo la fuerza G mayor que 1.000 G, para hacer penetrar de esta forma el fluido disolvente reductor de agentes patógenos en sustancialmente todas las cavidades del tejido en las que residen los agentes patógenos, a fin de dejar inactivo y/o reducir el contenido patógeno en el interior de las cavidades. En un aspecto adicional, el procedimiento comprende exponer el tejido a un volumen del disolvente de al menos 3 litros durante una etapa de centrifugación. En un aspecto adicional, el fluido disolvente se selecciona de entre al menos uno del grupo consistente en alcohol, un detergente, un oxidante, un disolvente y un agente surfactante o tensoactivo. En un aspecto adicional, el procedimiento comprende centrifugar el tejido en al menos una parte del procedimiento, en presencia del fluido disolvente, con una fuerza G mayor que 4.000 G. Según un aspecto adicional, un procedimiento para dejar inactivos y/o reducir los agentes patógenos en tejido que tiene una pluralidad de cavidades en las que residen los agentes patógenos, que comprende centrifugar el tejido con una solución de reducción de agentes patógenos en un único giro húmedo para producir una fuerza G en el material, a fin de eliminar material del tejido y favorecer la penetración de la solución en el tejido, de tal manera que la centrifugación hace penetrar la solución de reducción de agentes patógenos en sustancialmente todas las cavidades del tejido donde residen los agentes patógenos, para dejar con ello inactivos y/o reducir el contenido de los agentes patógenos en las cavidades. De acuerdo con la presente invención, la centrifugación con la solución de reducción de agentes patógenos es continua. En un aspecto adicional, el procedimiento incluye centrifugar en seco el tejido antes de centrifugar la solución de reducción de agentes patógenos, al objeto de eliminar trazas de disolventes y residuos. Preferiblemente, el tejido comprende al menos uno de entre hueso esponjoso y cortical, y tejido de unión. De acuerdo con un aspecto adicional, la solución disolvente de reducción comprende al menos una solución de desactivación de agentes patógenos virales y/o bacterianos para... [Seguir leyendo]

1.- Un procedimiento para dejar inactivos y/o reducir los agentes patógenos contenidos en tejido que tiene una pluralidad de cavidades en las que residen los agentes patógenos, el cual comprende centrifugar el tejido en una centrifugadora de flujo continuo con una solución de reducción de agentes patógenos, de tal manera que la solución se hace fluir continuamente al interior de la centrifugadora y se extrae continuamente de la centrifugadora que contiene el tejido, y de tal modo que dicha centrifugación produce una fuerza G sobre el material que es suficiente para eliminar los contaminantes y materiales de desecho del tejido y favorecer la penetración de la solución en el tejido, de manera que la centrifugación hace que la solución de reducción de agentes patógenos penetre en sustancialmente todas las cavidades del tejido en las que residen los agentes patógenos, a fin de dejar con ello inactivos y/o reducir el contenido de los agentes patógenos dentro de dichas cavidades. 2.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que incluye exponer el tejido a un volumen de dicha solución de reducción que es mayor que 3 litros. 3.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual la fuerza G supera 1.000 G. 4.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que incluye centrifugar en seco el tejido tras la centrifugación de la solución de reducción de agentes patógenos, a fin de eliminar trazas de disolventes y de residuos. 5.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el tejido es al menos uno de entre hueso esponjoso, hueso cortical y hueso de unión. 6.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual la solución de reducción de agentes patógenos comprende al menos una solución de desactivación de agentes patógenos virales y/o bacterianos, destinada a dejar inactivos los agentes patógenos. 7.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual la solución de reducción de agentes patógenos está destinada a dejar inactivos agentes patógenos virales y/o bacterianos, la centrifugación a hacer fluir la solución de reducción para eliminar mediante lavado por circulación los agentes patógenos de las cavidades y dejar inactivos los agentes patógenos dentro de las cavidades, y, a continuación, eliminar la solución de reducción que transporta los agentes patógenos eliminados mediante lavado por circulación, de las proximidades del tejido. 8.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el tejido comprende hueso, los agentes patógenos comprenden lípidos y/o proteínas, y la solución de reducción de agentes patógenos está destinada a eliminar los lípidos y/o proteínas del hueso, de tal manera que el procedimiento comprende hacer fluir continuamente y centrifugar la solución de reducción de agentes patógenos con el hueso, de modo que la solución se infunde continuamente dentro y fuera de las cavidades del hueso, a fin de eliminar continuamente mediante lavado por circulación los lípidos y/o las proteínas del hueso. 9.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el tejido comprende hueso, los agentes patógenos comprenden lípidos y/o proteínas contenidos en las cavidades del tejido, y el procedimiento está destinado a disolver los lípidos y/o las proteínas mediante la centrifugación del hueso con la solución de reducción de agentes patógenos, a fin de hacer que la solución de reducción de agentes patógenos fluya al interior de sustancialmente todas las cavidades del tejido. 10.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que incluye infundir sustancias útiles biológica y/o mecánicamente en las cavidades del tejido durante una etapa de centrifugación. 11.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el cual la etapa de infusión incluye infundir al menos un antibiótico para formar un preservador o conservante del tejido durante el almacenamiento del tejido. 12.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el cual la etapa de infusión incluye infundir al menos un antibiótico que constituye un conservante del tejido durante el almacenamiento del tejido, y al menos un factor de crecimiento del tejido destinado a ser liberado del tejido tras la implantación del tejido en un animal. 13.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el cual la etapa de infusión de la sustancia mecánicamente útil incluye infundir un agente plastificante para mantener la flexibilidad o capacidad de doblamiento del tejido tras un secado de congelación o un secado. 14.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el cual la etapa de infusión de la sustancia mecánicamente útil incluye infundir glicerol para mantener la capacidad de doblamiento del tejido tras un secado de congelación o un secado. 15.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el cual la etapa de infusión de la sustancia mecánicamente útil incluye infundir materiales de mejora estructural, que son endurecidos térmica o químicamente. 16 E04706006 10-01-2012   16.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el cual la etapa de infusión de la sustancia mecánicamente útil incluye infundir polímeros, que se endurecen térmica o químicamente. 17.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 8, que incluye infundir una sustancia químicamente reactiva tal como un agente oxidante, a fin de romper o descomponer los lípidos y/o las proteínas. 18.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual la solución de reducción de agentes patógenos se selecciona de al menos uno del grupo consistente en un alcohol, un detergente, un oxidante, un disolvente y un agente surfactante o tensoactivo. 17 E04706006 10-01-2012