CONJUGADOS DE COMPLEMENTO PÉPTIDO.

La presente invención se refiere a conjugados de péptidos antifusogénicos y polipéptidos derivados de cabeza globular del factor del complemento C1q. Antecedentes de la invención La infección de células por el virus VIH se realiza mediante un proceso en el que se fusionan la membrana de las células que resultarán infectadas y la membrana vírica . Se propone un esquema general para este proceso. El complejo glucoproteína de cubierta vírica (gp120/gp41) interactúa con un receptor de superficie celular situado sobre la membrana celular que resultará infectada. La unión de gp120 a, por ejemplo, el receptor CD4 en combinación con un correceptor, tal como CCR-5 ó CXCR-4, provoca un cambio de conformación del complejo gp120/gp41. Como consecuencia de dicho cambio conformacional, la proteína gp41 logra insertarse en la membrana de la célula diana. Esta inserción es el inicio del proceso de fusión membranal. Es conocido que la secuencia de aminoácidos de la proteína gp41 difiere entre las diferentes cepas de VIH debido a la existencia de polimorfismos de origen natural. Sin embargo, puede reconocerse la misma arquitectura de dominios, concretamente: una señal de fusión, dos dominios héptadas repetidos (HR1, HR2) y un dominio transmembranal (en dirección extremo N-terminal hacia extremo C-terminal). Se ha sugerido que el dominio de fusión (o fusogénico) participa en la inserción en la membrana celular y en la desintegración de la misma. Las regiones HR se construyen a partir de tramos múltiples, comprendiendo cada uno 7 aminoácidos ("héptada") (ver, por ejemplo, Shu W. et al., Biochemistry 38:5378-5385, 1999). Aparte de las héptadas, se encuentran presentes uno o más motivos de tipo cremallera de leucinas. Esta composición explica la formación de una estructura superenrollada de la proteína gp41 e igualmente de un péptido derivado a partir de dichos dominios. Las hélices superenrolladas en general son oligómeros que consisten de dos o más hélices que interactúan. Los péptidos con secuencias de aminoácidos deducidas a partir del dominio HR1 ó HR2 de gp41 son inhibidores in vitro e in vivo eficaces de la incorporación del VIH en las células (por ejemplo para péptidos ver las patentes US nº 5.464.933, nº 5.656.480, nº 6.258.782, nº 6.348.568 ó nº 6.656.906). Por ejemplo, T20 (también conocido como DP178, Fuzeon ® , un péptido HR2) y T651 (patente US nº 6.479.055) son inhibidores muy potentes de la infección por VIH. Se ha intentado incrementar la eficacia de los péptidos derivados de HR2 con, por ejemplo, sustituciones de aminoácidos o el entrecruzamiento químico (Sia S.K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:14664-14669, 2002; Otaka A. et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41:2937-2940, 2002). La inmunidad innata del ser humano comprende la ruta del complemento. Esta ruta resulta activada por la unión de C1q, la subunidad de reconocimiento del factor del complemento C1, a una diana inmunológica. La molécula C1q completa es una molécula heteromérica que comprende seis copias de cada uno de los tres bloques monoméricos de construcción, que se denominan C1qA, C1qB y C1qC. Cada una de las unidades monoméricas comprende una región N-terminal (de 3 a 9 residuos), un dominio de tipo colágeno (que comprende aproximadamente 81 residuos) y un dominio globular (cabeza globular; que comprende aproximadamente 135 residuos) (Sellar G.C. et al., Biochem. J. 274:481-490, 1991). Moir et al. informan de la infección por VIH-1 de las células B mediante la activación de la ruta del complemento (Moir S. et al., J. Exp. Med. 192:637-646, 2000). La activación de la ruta del complemento humana surge de la unión de la región inmunodominante de gp41 (posiciones 590 a 620 de gp160; numeración según Ratner L. et al., Nature 313:277-284, 1985) con el factor del complemento C1q (Ebenbichler C.F., J. Exp. Med. 174:1417-1424, 1991). Thielens et al. informan de que el subcomponente C1q de la C1 humana y la glucoproteína de cubierta transmembranal gp41 de VIH-1 interactúan en la región de las posiciones aminoácidas 590 a 613 de gp160. Esta interacción puede resultar inhibida por un péptido que comprende los aminoácidos 601 a 613 de gp160 con un enlace disulfuro que conecta Cys605 y Cys611 (Thielens N.M. et al., J. Immunol. 151:6583-6592, 1993). En la patente WO nº 02/103026 se da a conocer un método para la producción recombinante de péptidos inhibidores de fusión antivíricos y de la acetilación de fragmentos de gp41. En Root et al. (Root M.J. et al., Curr. Pharm. Des. 10:1805-1825, 2004) se informa de gp41 de VIH-1 como diana para la inhibición de la entrada vírica. Descripción resumida de la invención La presente invención comprende un conjugado de polipéptidos que comprende un primer polipéptido seleccionado de SEC ID nº 01, y un segundo polipéptido seleccionado de entre el grupo de los péptidos antifusogénicos lineales. En una realización, el conjugado según la invención comprende el primer y el segundo polipéptidos en un orden seleccionado de entre el grupo de órdenes siguiente: extremo N-terminal - primer polipéptido - segundo polipéptido - extremo C-terminal, extremo N-terminal - segundo polipéptido - primer polipéptido - extremo C-terminal. En otra realización, el conjugado según la invención comprende entre el primer y el segundo polipéptidos un 2   polipéptido conector. La invención da a conocer además un conjugado de polipéptidos que comprende: a) un primer polipéptido (primer pp) seleccionado de SEC ID nº 01, b) un segundo polipéptido (segundo pp) seleccionado de entre el grupo de los péptidos antifusogénicos lineales, c) un tercer polipéptido (tercer pp) seleccionado de entre el grupo de las cadenas de anticuerpo anti-CCR5 ligantes de antígeno, cadenas de anticuerpo anti-CD4 ligantes de antígeno, cadenas de anticuerpo anti-VIH-1 neutralizador y fragmentos de los mismos, d) un polipéptido conector (pp conector) que conecta dichos primer, segundo y/o tercer polipéptidos. En dicho conjugado de polipéptidos, los polipéptidos constituyentes presentan un orden de extremo N-terminal a extremo C-terminal de: en el que a, b, c, d, e, f, g, m, n, o, p, q, r son todos un número entero 0 ó 1, y en el que: a+d+g=1, b+e=1, c+f=0 ó 1, m, n, o, p, q, r son, independientemente unos de otros, 0 ó 1. Un valor de 0 denota la ausencia del polipéptido correspondiente en la posición correspondiente, y un valor de 1 denota la presencia del polipéptido correspondiente en la posición correspondiente en el conjugado de polipéptidos. En una realización, el tercer polipéptido opcional se selecciona de entre el grupo de cadenas de anticuerpo anti- CCR5 ligantes de antígeno y fragmentos de las mismas. En otra realización, el tercer polipéptido opcional se selecciona de entre las cadenas de anticuerpo anti-CD4 ligantes de antígeno y los fragmentos de las mismas. En otra realización anti-VIH-1, el tercer polipéptido opcional se selecciona de entre las cadenas de anticuerpo anti- VIH-1 ligantes de antígeno y los fragmentos de las mismas. En una realización, el polipéptido conector se selecciona de entre el gurpo de polipéptidos que comprende SEC ID nº a SEC ID nº 48. En otra realización, el segundo polipéptido se selecciona de entre el grupo de polipéptidos antifusogénicos que comprende SEC ID nº a SEC ID nº 19. Otros aspectos de la presente invención son un ácido nucleico codificante de un conjugado de polipéptidos según la invención y una célula eucariótica que comprende el ácido nucleico según la invención. La invención comprende además un método para la producción de un conjugado de polipéptidos según la invención, que comprende las etapas siguientes: a) cultivar una célula que comprende un ácido nucleico codificante de un conjugado de polipéptidos según la invención bajo condiciones adecuadas para la expresión del conjugado de polipéptidos, y b) recuperar el conjugado de polipéptidos a partir de la célula o del medio de cultivo. La invención también comprende una composición farmacéutica, que contiene un conjugado de polipéptidos según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo conjuntamente con un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. También se encuentra comprendida en la presente invención la utilización de un conjugado de polipéptidos según la invención para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de infecciones víricas, preferentemente de una infección por VIH. Descripción detallada de la invención La presente invención comprende un conjugado de polipéptidos que comprende un primer polipéptido seleccionado de SEC ID nº 01, y un segundo polipéptido seleccionado de entre el grupo de los péptidos antifusogénicos lineales. La presente invención comprende además un conjugado de polipéptidos que comprende un primer polipéptido... [Seguir leyendo]

1. Conjugado de polipéptidos, caracterizado porque dicho conjugado comprende: a) un primer polipéptido seleccionado de entre la subunidad A del factor del complemento humano C1q de SEC ID nº 01, b) un segundo polipéptido seleccionado de entre el grupo de péptidos antifusogénicos lineales que inhibe sucesos asociados a la fusión de membranas o el suceso mismo de fusión membranal, incluyendo, entre otras cosas, la inhibición de la infección por un virus de células no infectadas debido a la fusión membranal. 2. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque dicho primer y dicho segundo polipéptidos presentan un orden seleccionado de entre el grupo de órdenes siguiente: extremo N-terminal - primer polipéptido - segundo polipéptido - extremo C-terminal, oextremo N-terminal - segundo polipéptido - primer polipéptido - extremo C-terminal. 3. Conjugado según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque dicho conjugado comprende entre dicho primer y dicho segundo polipéptidos, un polipéptido conector. 4. Conjugado de polipéptidos, caracterizado porque dicho conjugado comprende: a) un primer polipéptido (primer pp) seleccionado de entre la subunidad A del factor del complemento humano C1q de SEC ID nº 01, y b) un segundo polipéptido (segundo pp) seleccionado de entre el grupo de los péptidos antifusogénicos lineales que inhibe sucesos asociados a la fusion membranal o al suceso mismo de fusión membranal, incluyendo, entre otros, la inhibición de la infección por un virus de células no infectadas debido a la fusión membranal, y c) un tercer polipéptido (tercer pp) seleccionado de entre el grupo de fragmentos ligantes de antígeno de anticuerpos anti-CCR5, o fragmentos ligantes de antígeno de anticuerpos anti-VIH-1, o el grupo de fragmentos ligantes de antígeno de anticuerpos anti-CD4, y d) un polipéptido conector (pp conector) que conecta dichos primer, segundo y/o tercer polipéptidos, en el que los polipéptidos de dicho conjugado de polipéptidos presentan un orden de extremo N-terminal a extremo C-terminal de: en el que a, b, c, d, e, f, g, m, n, o, p, q, r son todos un número entero 0 ó 1, con a + d + g = 1, b + e =1, c + f = 0 ó 1, m, n, o, p, q, r son, independientemente unos de otros, 0 ó 1, en el que 0 denota la ausencia y 1 denota la presencia del polipéptido correspondiente en la posición correspondiente de dicho conjugado. 5. Conjugado según la reivindicación 3 ó 4, caracterizado porque dicho polipéptido conector se selecciona de entre el grupo de polipéptidos que comprende SEC ID nº 20 a SEC ID nº 48. 6. Conjugado según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque dicho segundo polipéptido se selecciona de entre el grupo de péptidos antifusogénicos que comprende SEC ID nº 08 a SEC ID nº 19. 7. Método para la producción de un conjugado de polipéptidos según la reivindicación 1 ó 4, caracterizado porque el método comprende: a) cultivar una célula huésped que comprende un ácido nucleico codificante de un conjugado de polipéptidos según la reivindicación 1 ó 4 bajo condiciones adecuadas para la expresión del conjugado de polipéptidos, y b) recuperar el conjugado de polipéptidos a partir de la célula o del medio de cultivo. 8. Composición farmacéutica, que contiene un conjugado de polipéptidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo conjuntamente con un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. 9. Utilización de un conjugado de polipéptidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de una infección vírica. 10. Utilización según la reivindicación 9, caracterizada porque dicha infección vírica es una infección por VIH. 41   42   43   44     46   47