COMPRIMIDOS DE VALSARTÁN.

Un comprimido que comprende de 20 a 65% del valsartán en forma libre y más del 30% de celulosa microcristalina en peso basándose en el peso total de los componentes del núcleo de dicho comprimido,

en donde los siguientes comprimidos se excluyen: Formulación del Comprimido de Valsartán 80 mg + Amlodipino 5 mg (Compactación de rodillo) **Fórmula**

Comprimidos de Valsartán El angiotensinógeno, una a2-macroglicoproteína, se divide por la enzima renina en el decapéptido angiotensina I, que es por sí mismo solo muy ligeramente biológicamente activo. En la siguiente etapa de la cascada, dos otros aminoácidos se transforman completamente por la acción de la enzima angiotensina convertidora de la enzima (ACE) , que principalmente se une en el endotelio, con la formación de la angiotensina II. Esta última se considera que es uno de los más poderosos vasoconstrictores naturales.

La angiotensina II interactúa con receptores específicos en la superficie de la célula diana. Por ahora, el éxito se ha logrado en identificar los subtipos del receptor que son, por ejemplo, designados receptores AT1 y receptores AT2. Estudios en el sistema angiotensina-renina, particularmente en relación con la hipertensión, han incrementado casi exponencialmente durante la última década. Como resultado, el número de receptores para la Angiotensina II han sido identificados y algunos de ellos han sido clonados y analizados. Recientemente, se han hecho considerables esfuerzos para identificar las sustancias que se unen al receptor AT1, con compuestos activos de esta naturaleza siendo denominados frecuentemente antagonistas de la angiotensina II. Como consecuencia de la inhibición del receptor AT1, estos antagonistas pueden, por ejemplo, ser empleados como antihipertensivos o para tratar la insuficiencia cardíaca congestiva.

Los receptores AT1 y AT2, también se han estudiado por su distribución y propiedades biológicas y se han mostrado, a pesar de una homología del 30%, que tiene una distribución y actividad muy diferente.

El receptor AT1, que juega una parte importante en la regulación de la presión sanguínea, se ha encontrado en la corteza suprarrenal, riñón, útero etc. A un nivel celular se ha encontrado en fibroblastos, macrófagos y células del músculo liso (SMC) .

En contraste, el receptor AT2 se ha encontrado principalmente en tejidos fetales pero también en adultos especialmente en tejido patológico tal como en cardiopatía isquémica. En este documento, se ha localizado en células endoteliales y fibroblastos.

El objetivo de los estudios descritos a continuación es evaluar la distribución de los receptores AT1 y AT2 en el pulmón humano utilizando esencialmente la inmunocitoquímica y las metodologías de hibridación in situ.

Anteriormente, se han fabricado anticuerpos específicos contra los epitopes del receptor AT1 pero ninguna de tales herramientas específicas existe para el receptor AT2. Por lo tanto, los estudios histológicos dependerán de los antagonistas del receptor radio-marcado junto con autoradiografía que dio solamente una localización del tejido relativamente crudo. En los últimos dos años, sin embargo, los anticuerpos específicos bien caracterizados para el receptor humano se han hecho disponibles y por lo tanto han sido utilizados en los estudios confiados en lo sucesivo.

Métodos y Materiales 1. Anticuerpo y especificidad de la sonda de hibridación in situ (ISH) y titulación Con el fin de confirmar la especificidad de los estudios de inmunocitoquímica (ICC) e ISH, los bloques incrustados de parafina de (corteza y médula) suprarrenal humana normal, se obtienen de los archivos del Pathology Dept., University Hospital, Ghent, Belgium, y se utilizan como material de prueba. Los receptores AT1 se conocen por estar predominantemente localizados en la corteza suprarrenal y AT2 en la médula.

Para los estudios de pulmón humano, el material control se obtiene de las autopsias donde los pacientes han muerto de causas diferentes de enfermedad pulmonar por ejemplo accidentes fatales. Parte de este material proviene de Ghent como anteriormente, algunos de los archivos del Pathology Dept. of The Pennsylvania Hospital, Philadelphia, USA. El tejido que contiene vías aéreas pequeñas se selecciona ya que parecen ser más sensibles a la lesión.

Todas las muestras se han fijado en formalina estandarizada al 10%, tan rápido como sea posible después de la muerte, se deshidratan y se incrustan en cera de parafina. Secciones de 3-5 μm se cortan y montan en láminas de vidrio recubiertas de silano.

Con el fin de minimizar cualquiera de las variaciones en el tratamiento, pares de secciones secuenciales se montan sobre cada lámina, una para la exposición del anticuerpo AT1 y la otra para AT2. Hasta 20 láminas se tratan al mismo tiempo, de modo que, con la excepción del anticuerpo primario, todos los reactivos incluyendo el cromógeno son idénticos. El espesor de la sección por lo tanto, es la única variable que no podría ser totalmente controlada.

2. Anticuerpos Dos anticuerpos del receptor AT1, de Santa Cruz Inc., San Diego, CA, USA, (clones N 10 y 306) se probaron y encontraron para dar la distribución del receptor de la corteza suprarrenal idéntica.

La principal parte del estudio se hace con un anticuerpo del receptor AT2 disponible de Santa Cruz (clon C18) el cual 5 se prueba y se encuentra que proporciona el patrón de tinción idéntico en el pulmón y la médula suprarrenal como el primero.

Todos los anticuerpos se han probado rigurosamente por los proveedores comerciales e individuales para especificidad y reactividad cruzada.

3. Sondas para ISH

Los productos de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) se prepararon y utilizaron de la siguiente manera:

Los oligonucleótidos específicos para receptor de la angiotensina II humana del tipo I (número de acceso GenBank M93394) y receptor de la angiotensina II del tipo II (número de acceso GenBank U15592) fueron diseñados utilizando el programa software Oligo 5.0 para regiones homólogas de ambas secuencias (Tabla 1) . ADNc a partir de tejido de hueso humano se preparó siguiendo los métodos estándar (Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular 15 Cloning: a Laborator y Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laborator y Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) . Para PCR los siguientes pares de cebador ologonucleótido fueron utilizados: receptor de la angiotensina II del tipo I, 5'CTggCTgACTTATgCTTTTTACTgACT-3' y 5'-gATgCAggTgACTTTggCTACA-3'; (tamaño del producto de PCR 236 pares de base) y para el receptor de la angiotensina II del tipo II, 5'-ATTTACTCCTTTTggCTACTCTTCCTC-3' y 5'- ggTCACgggTTATCCTgTTCTTC-3' (tamaño del producto PCR 489 pares de base) . Las amplificaciones de PCR 20 fueron realizadas con 10 ng de ADNc plantilla utilizando un equipo MJ Research PCR Cycle y los siguientes ciclos de PCR: 1) 94 °C/2 min, 2) 94 °C/10 seg, 60 °C/30 seg, 72 °C/15 seg para 35 ciclos, utilizando High Fidelity Taq polimerasa (Boehringer Mannheim) con los componentes proporcionados en el kit del fabricante. Los productos de las amplificaciones de PCR se identificaron por electroforesis a través de un gel al 0.8% de agarosa/TBE (Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular Cloning: a Laborator y Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laborator y Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) . Para confirmar la identidad de los productos de las amplificaciones de PCR, el ADN fue eluido del gel y se clonó en el vector de clonación A/T pMOSBlue (Amersham) . Las colonias que contienen un inserto de ADN del tamaño correcto (Tabla 1) fueron secuenciadas completamente en ambas cadenas para confirmar su identidad.

Cada sonda, tanto sentido como anti-sentido para el AT1 y anti-sentido solo como se describen anteriormente, se marcan con fluoresceína (FITC) y la presencia de ARNm en las células detectadas después de la hibridación con la sonda y el uso de una sonda anti-FITC de ratón más el sistema de detección de fosfatasa alcalina fosfatasa antialcalina (APAAP) . Esta técnica de marcación mejora la detección de números muy bajos de copias.

4. Inmunocitoquímica Para todos los anticuerpos el procedimiento es de la siguiente manera. Secciones de 5 μm primero se tratan 35 mediante técnicas de recuperación de antígenos, junto con microondas, en solución reguladora de citrato (pH 6.0) .

La exposición es durante 20 minutos y las láminas se dejan enfriar en la solución reguladora. Cuando los anticuerpos son policlonales de cabra, el método peroxidasa anti-peroxidasa (PAP) con diaminobenzidina (DAB) como cromógeno se utiliza, de otro modo para policlonales de conejo el sistema APAAP con nueva Fucsina se utiliza. Las secciones en primer lugar se bloquean con 1% de albúmina de suero de bovino (BSA) durante 30

minutos para bloquear los receptores no-específicos, después mediante... [Seguir leyendo]

1. Un comprimido que comprende de 20 a 65% del valsartán en forma libre y más del 30% de celulosa microcristalina en peso basándose en el peso total de los componentes del núcleo de dicho comprimido, en donde los siguientes comprimidos se excluyen:

Formulación del Comprimido de Valsartán 80 mg + Amlodipino 5 mg (Compactación de rodillo)

Comprimidos Recubiertos con Película: (continuación)

Comprimidos Recubiertos con Película:

y Comprimidos Recubiertos con Película:

2. Un comprimido de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende hasta 65% de celulosa microcristalina.

3. Un comprimido de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende de 50 a 65 % de celulosa microcristalina.

4. Un comprimido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende menos del 13% de crospovidona.

5. Un comprimido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el ingrediente activo consiste de valsartán.

6. Un comprimido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende de 20 a 360 mg del 10 valsartán.

7. Un comprimido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5 y 6 que comprende de 20 a 65% de valsartán 31 a 65% de celulosa microcristalina y 2 a 13% de crospovidona.

8. Un comprimido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende más del 250 mg y hasta 360 mg del valsartán.

9. Un comprimido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el comprimido es un comprimido recubierto.