Composiciones y métodos para el tratamiento de tumores que presentan antígenos survivina.

Una vacuna que provoca una respuesta inmune a la survivina humana en un humano,

que comprende un péptidoderivado de survivina humana modificada o un ácido nucleico que codifica dicho péptido, en donde la survivinahumana modificada comprende una mutación dentro del dominio BIR que anula sustancialmente la actividadbiológica asignada al dominio BIR, caracterizada porque dicho péptido comprende un dominio helicoidal modificadoy contiene las siguientes mutaciones de la survivina humana: R18E, P47L, Q56L, H77A, C84A, A128P y 1135P,formando por tanto la secuencia de aminoácidos según se especifica en SEQ ID NO 56.

Composiciones y métodos para el tratamiento de tumores que presentan antígenos survivina.

Área de la invención.

La presente invención hace referencia a estrategias de vacunación para el tratamiento de tumores. De manera específica, la presente invención hace referencia a composiciones de vacuna que estimulan en un humano una respuesta inmune a la survivina humana, atacando, por tanto, células tumorales que sobreexpresan la survivina. En particular, la presente invención hace referencia a composiciones de vacuna que comprenden péptidos derivados de survivina no mamífera, además de survivina de mamíferos modificada, en especial humana.

Esta solicitud es una solicitud divisional de la EP 06 805 883.3, registrada el 27/09/2006.

Antecedentes.

El sistema inmununológico realiza su función de vigilancia en parte monitorizando las composiciones proteicas de las células. En un proceso denominado presentación antigénica a linfocitos T, las proteínas en el interior de una célula se procesan en péptidos. Un subgrupo de los péptidos procesados, los antígenos, se exportan a la superficie celular, en una asociación específica con un miembro de un tipo de receptores conocidos como receptores del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC, por sus siglas en inglés) . Estos complejos MHC-péptido son muestreados por inmunocitos especializados, los linfocitos T, mediante una interacción con las proteínas de la superficie de los linfocitos T, conocidas como Receptores de Linfocitos T (TCR, del inglés T Cell Receptor) . Cada linfocito T dado lleva un único TCR en su superficie. Ante una interacción productiva del TCR del linfocito T con el complejo MHC-péptido se activa una respuesta inmune, la cual conduce a la eliminación de la célula que presenta ese complejo MHC-péptido en particular. Por lo general, la interacción es no productiva si los antígenos presentados se derivan del huésped, los llamados autoantígenos. Comúnmente, las respuestas inmunes se activan por la interacción con un antígeno derivado de una proteína foránea, por ejemplo, con un antígeno derivado de una proteína constituyente de un virus infectante.

El objetivo del tratamiento de tumores mediante inmunización activa es inducir el sistema inmunológico para que reconozca y elimine las células tumorales. Al igual que ocurre en cualquier otra célula, los antígenos peptídicos en las células tumorales se derivan del repertorio de proteínas expresadas. Los antígenos tumorales enriquecidos, derivados de proteínas expresadas diferencialmente en tumores, son en principio una diana de la vigilancia inmunológica, igual que los antígenos víricos lo son de las células infectadas. Por consiguiente, resultaría de utilidad aprovechar ramas del sistema inmunológico que han evolucionado para hacer frente a una infección intracelular con el propósito de eliminar un tumor.

Una proteína tumoral enriquecida de ese tipo es la survivina. Las células tumorales a menudo sobreexpresan la proteína survivina, la cual se cree que bloquea la apoptosis y, por tanto, interfiere con los mecanismos que evitan el crecimiento anormal de las células tumorales. Las células normales, por otro lado, expresan muy poca survivina (ver, por ejemplo, Ambrosini et al., (1997) Nat. Med., 3:917-921) . Por lo tanto, la survivina es un antígeno tumoral específico o un antígeno tumoral enriquecido ideal. Resultaría de utilidad administrar una forma antigénica de la proteína survivina a células presentadoras de antígenos, de manera que pueda estimularse una respuesta inmune a la survivina. Sin embargo, en contraste con células infectadas con virus, la survivina, al igual que otras proteínas expresadas diferencialmente en tumores, son proteínas del anfitrión y no activan el sistema inmunológico. Por lo tanto, persiste una necesidad en el arte de desarrollar composiciones y métodos efectivos que provoquen una respuesta inmune efectiva a las células tumorales, en particular a aquellas caracterizadas con la sobreexpresión de survivina.

Resumen de la invención.

La presente invención proporciona composiciones y métodos efectivos que provocan una respuesta inmune efectiva a células tumorales. De manera específica, la presente invención proporciona estrategias de vacunación, utilizando formas antigénicas de proteínas tumorales enriquecidas como antígenos de linfocitos T. En particular, la presente invención proporciona una forma antigénica de una proteína tumoral enriquecida, survivina, preferentemente survivina humana.

La presente invención hace referencia a una vacuna que incluye un ácido nucleico que codifica un péptido de survivina humana modificada. De manera alternativa, la presente invención hace referencia a una vacuna que incluye un péptido de survivina humana modificada. El péptido de survivina humana modificada es biológicamente inerte, pero inmunológicamente similar a la survivina humana. Tal como se utiliza en la presente patente, mediante “biológicamente inerte” se entiende un péptido de survivina que no es capaz, sustancialmente, de provocar un efecto sobre, o ejercer una actividad habitualmente asociada con, la survivina normal. Por ejemplo, un péptido de survivina

“biológicamente inerte” no presenta una actividad apoptótica considerable, ni es capaz de interferir de manera considerable con una actividad anti-apoptótica, asociada de manera habitual con una proteína survivina endógena. Una survivina biológicamente inerte no tendría, de forma habitual, un efecto dominante negativo considerable. Tal como se utiliza en la presente patente, por “inmunológicamente similar a la survivina humana” se entiende un péptido de survivina modificada capaz de provocar, al menos, una respuesta inmune a la misma secuencia diana que el correspondiente péptido de survivina humana no modificada. Una respuesta inmune puede medirse, por ejemplo, por la población de células CD8+ linfocitos T, o por la liberación de IFNy por parte de las células CD8+ linfocitos T, en respuesta a una secuencia diana.

En un modo de realización preferente, la vacuna de la invención incluye un ácido nucleico que codifica un péptido de survivina humana modificada. El ácido nucleico puede incluir un promotor de mamífero. En otro modo de realización, el ácido nucleico es un ADN desnudo. En otro modo de realización, el ácido nucleico está formulado con un reactivo que mejora la transfección de células de mamíferos. La vacuna de la presente invención puede también incluir un adyuvante.

En un modo de realización, el ácido nucleico que codifica un péptido de survivina humana modificada es parte de una partícula vírica, por ejemplo, una partícula adenoviral. Las partículas adenovirales adecuadas para la invención incluyen aquellas derivadas de adenovirus capaces de replicación, o aquellas derivadas de adenovirus de replicación condicional (“CRAD”, del inglés Conditionally Replicating Adenoviruses) , que replican solamente en ciertas células o únicamente bajo determinadas condiciones, o aquellas derivadas de adenovirus que son incompetentes para la replicación. Otras partículas víricas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, partículas víricas derivadas de lentivirus u otros virus ARN, virus adeno-asociados, rotavirus, o virus Vaccinia (o virus vacuna) , por nombrar algunos.

En un modo de realización, la vacuna incluye una bacteria que contiene el ácido nucleico que codifica un péptido de survivina humana modificada. De manera preferente, la bacteria es una bacteria entérica, tal como la Salmonella, Escherichia, o Klebsiella. Otras bacterias, tales como la especie Listeria, pueden también utilizarse para hospedar tales ácidos nucleicos. La bacteria puede ser una bacteria de tipo silvestre o puede contener mutaciones que, por ejemplo, atenúen su patogenicidad. En general, se prefiere utilizar una forma mutante de una bacteria, tal como por ejemplo un auxótrofo.

En otro modo de realización preferente, la vacuna de la invención incluye un péptido de survivina humana modificada. De manera preferente, el péptido de survivina humana modificada incluye un dominio BIR modificado. El dominio BIR puede incluir, al menos, una sustitución de aminoácidos en una posición correspondiente a Arg18, Cys57, Cys60, His77 y Cys84 de la survivina humana. De manera alternativa, o adicional el péptido de survivina humana modificada incluye un dominio helicoidal modificado. El dominio helicoidal modificado puede incluir... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna que provoca una respuesta inmune a la survivina humana en un humano, que comprende un péptido derivado de survivina humana modificada o un ácido nucleico que codifica dicho péptido, en donde la survivina humana modificada comprende una mutación dentro del dominio BIR que anula sustancialmente la actividad biológica asignada al dominio BIR, caracterizada porque dicho péptido comprende un dominio helicoidal modificado y contiene las siguientes mutaciones de la survivina humana: R18E, P47L, Q56L, H77A, C84A, A128P y 1135P, formando por tanto la secuencia de aminoácidos según se especifica en SEQ ID NO 56.

2. Una vacuna de la reivindicación, en donde el péptido se fusiona con una fracción Fc.

3. Una vacuna de la reivindicación 1 ó 2, en donde la vacuna además codifica o incluye un péptido derivado de una molécula efectora.

4. Una vacuna de la reivindicación 3, en donde la molécula efectora es una citocina seleccionada del grupo que consiste en IL-2, IL-7, IL-12, IL-18, IL-21, IL-23 y GM-CSF.

5. Una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el ácido nucleico que codifica al péptido comprende un promotor mamífero.

6. Una vacuna de la reivindicación 5, en donde el ácido nucleico es un ADN desnudo.

7. Una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el ácido nucleico se formula con un reactivo que mejora la transfección de las células mamíferas.

8. Una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1 – 7, en donde el ácido nucleico es parte de una partícula vírica.

9. Una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1 – 8, en donde la vacuna comprende una bacteria que comprende el ácido nucleico.

10. Una vacuna de cualquiera de las reivindicaciones 1 -9, que adicionalmente comprende un adyuvante.

11. Una composición farmacéutica que comprende una vacuna según se especifica en cualquiera de las reivindicaciones 1 – 10 de manera opcional, junto con un soporte, diluyente o excipiente aceptable.

12. Una vacuna o una composición farmacéutica según se especifica en cualquiera de las reivindicaciones 1 -11 para su uso para inmunizar a un paciente contra células tumorales que sobreexpresan survivina humana.