Composiciones sólidas estabilizadas de factor VII modificado.

Composicion comprendiendo;

i) factor VII modificado;

ii) un agente adecuado para mantener el pH de dicha composicion en el intervalo de 4 a 7 cuando dicha composicion se disuelve en agua;

iii) un alcohol de azucar, y donde el alcohol de azucar es manitol;

iv) un sacarido, y donde el sacarido es sacarosa;

v) un antioxidante, y donde el antioxidante se seleccionadel grupo consistente en acido ascorbico, cisteina, homocisteina, cistina, cistationina, metionina, glutation y peptidos con cualquier cisteina, homocisteina, cistina, cistationina, metionina y glutation; y

vi) un contenido de humedad de como mucho 3%.

Composiciones solidas estabilizadas de factor VII modificado Campo de la invencion [0001] La presente invencion se refiere a composiciones quimicamente al igual que fisicamente estables comprendiendo factor VII modificado que puede almacenarse, usarse y manejarse a temperatura ambiente. Antecedentes de la invencion [0002] Moleculas del factor VII modificado son derivados del factor VII de coagulacion humano donde el sitio catalitico se modifica de manera que la actividad catalitica de la forma activa, factor VIIa, disminuye, mientras la capacidad de union del factor tisular se mantiene. Factor VII (humano de tipo salvaje) se ha descrito en la patente US nº 4, 784, 950. Ejemplos de moleculas del factor VII modificado se han descrito en WO 92/15686, WO 94/27631, WO 96/12800 y WO 97/47651. Asi, en similitud a la molecula del factor VIIa nativo, el factor VIIa modificado se unira con factor tisular, pero al contrario que el factor VIIa nativo, el factor VII modificado no activara los pasos posteriores en la ruta de coagulacion extrinseca. Asi, el factor VII modificado actua como un inhibidor de la formacion de un coagulo de fibrina. Por lo tanto, moleculas del factor VIIa modificado se han sugerido en el tratamiento de lesion vascular por bloqueo de la produccion de trombina y la deposicion posterior de fibrina (WO 97/47651) . [0003] Como proteina, las moleculas del factor VII modificado son susceptibles a degradacion fisica, incluyendo desnaturalizacion y agregacion, como la formacion de agregados insolubles o solubles en forma de dimeros, oligomeros y polimeros, o a degradacion quimica, incluyendo, por ejemplo, hidrolisis, desamidacion y oxidacion. La consecuencia total es perdida de actividad de la molecula del factor VII modificado, formacion de productos de degradacion inmunogenicos y toxicos, riesgo serio de introduccion de trombosis en la inyeccion de la molecula del factor VII modificado degradado, obstruccion de agujas usadas para inyecciones y riesgo de no-homogeneidad. Asi la seguridad y la eficacia de medicamentos comprendiendo factor VII modificado estan directamente relacionadas con la estabilidad del factor VII. [0004] El factor VII modificado puede proporcionarse hoy en dia en una formulacion liquida, que necesita almacenarse congelada a - 80 º C. [0005] Asi, composiciones comprendiendo factor VII modificado necesitan estabilizarse. En particular, hay una necesidad para almacenamiento y manipulacion de medicamentos comprendiendo factor VII modificado bajo condiciones ambientales sin el requisito de un congelador y donde las composiciones se pueden almacenar durante un tiempo prolongado como durante al menos 6 meses antes de uso. [0006] Un metodo de estabilizacion de una proteina se refiere a eliminacion de agua de la proteina, por ejemplo, como proporcionando la proteina en forma de un pastel liofilizado, la materia final obtenida en un proceso de liofilizacion. No obstante, el proceso de liofilizacion en si mismo es tambien nocivo para las proteinas; durante la liofilizacion, la solucion de proteina se enfria antes primero hasta que se congela adecuadamente y el volumen de agua en la solucion de proteina formara hielo en esta fase. La proteina es propensa por la presente a tension inducida por congelacion provocando deformacion y precipitacion. En el siguiente paso, la fase primaria denominada de secado, el hielo sublima y en la fase de secado secundaria, el agua unida o adsorbida se quita bajo temperaturas elevadas. Durante esta eliminacion de agua, las proteinas pueden perder su conformacion apropiada que se provee principalmente a traves de union de hidrogeno. [0007] Por lo tanto, para preservar la conformacion de proteina, actividad y estabilidad durante liofilizacion, la solucion de proteina necesita complementarse con cantidades suficientes de excipientes apropiados con propiedades crioprotectoras y/o lioprotectoras para proteger la proteina de tension inducida por congelacion y/o tension durante eliminacion de agua, respectivamente. [0008] Cuando se proporciona a un producto liofilizado una caracteristica esencial se refiere a las propiedades del pastel liofilizado. Necesita tener buenas propiedades en cuanto a su forma y estructura, es decir, este no deberia colapsarse, ya que estos pasteles colapsados pueden ser duros o incluso imposibles de disolver (reconstituir) antes de uso. Por el contrario, la estructura fisica del pastel liofilizado no puede estar suelta y blanda. Por lo tanto, uno o mas agentes denominados de carga se agregan a la solucion de proteina antes de liofilizacion. Agentes de carga son agentes que proporcionan buenas propiedades de pastel liofilizado y que ayudan a la proteina a superar varias tensiones asociadas al proceso de liofilizacion, por ejemplo, corte/congelacion. Ademas, los agentes de estabilizacion pueden ayudar en la formacion de productos farmaceuticamente elegantes y de aspecto agradable, que protegen la proteina durante liofilizacion al igual que durante almacenamiento posterior.

Durante el des arrollo de u n m edicamento est able c omprendiendo un f actor V II m odificado a propiado se administra parentalmente y se almacena en condiciones ambientales, excipientes adecuados deberian anadirse y sus niveles ajustarse cu idadosamente p ara proporcionar u n pr oducto q ue t ambien es aproximadamente i sotonico c on plasma ytieneun pH en unintervalo fisiologicamente adecuado para inyeccion o infusion. La eleccion de agentes capaces de modificar la tonicidad es crucial, ya que mas modificadores de tonicidad en forma de sales hacen el proceso de liofilizacion dificil.

Asi, es un objetivo de la presente invencion proporcionar composiciones estables de factor VII modificado, sustancialmente sin la presencia de productos de degradacion y sin actividad del factor VII modificado reducida, incluso despues de a lmacenamiento pr olongado e n co ndiciones am bientales. A demas, es un o bjetivo esencial que l as composiciones estables se adecuen para administracion parental y asi tengan una tonicidad fisiologicamente apropiada y un margen de pH para no causar cualquier inconveniente al paciente.

Resumen de la invencion [0011] Se ha descubierto por los presentes investigadores que factor VII modificado se puede proporcionar en una composicion que es suficientemente estable para permitir almacenamiento a 25 º C durante aproximadamente al menos de 12 a 18 meses.

P or co nsiguiente, l a pr esente i nvencion se r efiere en un pr imer asp ecto a co mposiciones estabilizadas comprendiendo: i) factor VII modificado; ii) un agente adecuado para mantener el pH de dicha composicion en el intervalo de 4 a 7 cuando dicha composicion se disuelve en agua; y, ademas, ingredientes como en las reivindicaciones y iii) un contenido de humedad de como mucho 3%.

En otro aspecto, la invencion se refiere a un m etodo de preparacion de un factor VII modificado estable que incluye las etapas de: i) provision de dicho factor VII modificado en una solucion con pH en el intervalo de 4 a 7. ii) tratamiento de dicha solucion para obtener una composicion solida con un contenido de humedad de como mucho 3 % p/p.

Tal y como se menciona, factor VII modificado estabilizado se solicita para minimizar el riesgo de eventos adversos y para mejorar seguridad y eficacia cuando se administra el factor VII modificado para uso terapeutico. Por lo tanto, todavia otro aspecto de la invencion se refiere al uso de un factor VII modificado para la preparacion de un medicamento para evitar coagulacion de la sangre y/o reacciones mediadas por factor tisular, dicho medicamento comprende una composicion comprendiendo; i) factor VII modificado; ii) un agente adecuado para mantener del pH de dicha composicion en el intervalo de 4 a 7 cuando dicha composicion se disuelve en agua, y ademas ingredientes como en las reivindicaciones y iii) un contenido de humedad de como mucho 3%.

Finalmente, la invencion se refiere a administracion de dicho factor VII modificado estabilizado a un paciente para evitar coagulacion de la sangre y/o reacciones mediadas por factor tisular, comprendiendo administracion a un sujeto con necesidad de este, una cantidad eficaz de una composicion comprendiendo; i) factor VII modificado; ii) un agente adecuado para mantener el pH de dicha composicion en el intervalo de 4 a 7 cuando dicha composicion se disuelve en agua; y ademas ingredientes como en las reivindicaciones y iii) un contenido de humedad de como mucho 3%.

Descripcion detallada de la invencion [0016] La presente invencion se refiere a composiciones estables en almacenamiento comprendiendo factor VII modificado. L as composiciones se p ueden al macenar a va rias temperaturas ambiente i ncluyendo t emperaturas ambiente durante un periodo de tiempo extendido sin causar degradacion sustancial... [Seguir leyendo]

1. Composicion comprendiendo; i) factor VII modificado; ii) un agente adecuado para mantener el pH de dicha composicion en el intervalo de 4 a 7 cuando dicha composicion se disuelve en agua; iii) un alcohol de azucar, y donde el alcohol de azucar es manitol; iv) un sacarido, y donde el sacarido es sacarosa; v) un antioxidante, y donde el antioxidante se seleccionadel grupo consistente en acido ascorbico, cisteina, homocisteina, cistina, cistationina, metionina, glutation y peptidos con cualquier cisteina, homocisteina, cistina, cistationina, metionina y glutation; y vi) un contenido de humedad de como mucho 3%.

2. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el agente adecuado para mantener el pH de dicha composicion en el intervalode 4 a 7 es glicilglicina, luego estapresente en una cantidad decomo mucho7 mg/ml.

3. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el pH de dicha composicion esta en el intervalo de aproximadamente 5, 5 a 7, 0 cuando dicha composicion se disuelve en agua.

4. Composicion segun cualquiera de l as reivindicaciones precedentes, donde dicho alcohol de azucar esta en una proporcion en peso en relacion a dicho sacarido que varia de aproximadamente 100:1 1 a 1:50, preferiblemente de aproximadamente 50:1 a 1:10, mas preferiblemente de aproximadamente 20: 1 a 1:5, incluso mas preferiblemente de aproximadamente 10:1 a 1:2, todavia mas preferiblemente de aproximadamente 4:1 a 1:2, como todavia mas preferiblemente de aproximadamente 3:1 a 1:1, de forma mas preferida de aproximadamente 3:1 a 3:2.

5. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicho factor VII modificado esta en una proporcion en peso en relacion a la suma de dicho alcohol de azucar y dicho sacarido que varia de aproximadamente 1:200 a 1:5, preferiblemente de aproximadamente 1:100 a 1:8, mas preferiblemente de aproximadamente 1:75 a 1:10, incluso mas preferiblemente de aproximadamente 1:60 a 1:15, de forma mas preferida de aproximadamente 1:50 a 1:20.

6. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el alcohol de azucar esta en una cantidad que varia de aproximadamente 30% p/p a 95% p/p, preferiblemente de aproximadamente 35% p/p a 95% p/p, mas preferiblemente de aproximadamente 40% p/p a 90% p/p, de forma mas preferida de aproximadamente 45% p/p a 90% p/p.

7. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el sacarido esta en una cantidad que varia de aproximadamente 1% p/p a 45% p/p, preferiblemente de aproximadamente 5% p/p a 40% p/p, mas preferiblemente de aproximadamente 5% p/p a 35% p/p, de forma mas preferida de aproximadamente 10% p/p a 30% p/p.

8. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho manitol esta en una proporcion en peso en relacion a dicha sacarosa que varia de aproximadamente 10:1 a 1:10, preferiblemente de aproximadamente

10:1 a 1:5, mas preferiblemente de aproximadamente 5:1 a 1:2, incluso mas preferiblemente de aproximadamente 5:1 a 1:1, de forma mas preferida de aproximadamente 4:1 a 5:4, como de aproximadamente 3:1 a 3:2.

9. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho factor VII modificado esta en una proporcion en peso en relacion a la suma de dicho manitol y dicha sacarosa que varia de aproximadamente 1:100 a 1:5, preferiblemente de aproximadamente 1:75 a 1:10, mas preferiblemente de aproximadamente 1:60 a 1:15 de forma mas preferida de aproximadamente 1:50 a 1:20.

10. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo ademas un modificador de tonicidad.

11. Composicion segun la reivindicacion 10, donde el modificador de tonicidad se selecciona del grupo consistente en acetato sodico, lactato sodico, cloruro sodico, cloruro de potasio y cloruro de calcio.

12. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo ademas un tensioactivo.

13. Composicion segun la reivindicacion 12, donde el tensioactivo se selecciona del grupo consistente en polisorbatos, como polisorbato 20 u 80, polioxietilen alquil eteres o poloxameros, como poloxamero 188 o 407.

14. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el factor VII modificado se selecciona de la lista de: factor VII humano y bovino, donde el residuo del sitio activo Ser344 se modifica, se sustituye con Gly, Met, Thr, o mas preferiblemente, Ala; factor VII humano, donde el residuo Lys341 se sustituye; factor VII humano, donde el residuo Asp242 se sustituye; factor VII humano, donde el residuo His193 se sustituye; FVII- (K341A) ; FVII- (S344A) ; FVII- (D242A) ; FVII- (H193A) ; un polipeptido del factor VII modificado en el sitio activo por reaccion con un reactivo

seleccionado de la lista de: clorometilcetonas peptidicas o peptidil clorometanos; azapeptidos; agentes acilantes como varios derivados de guanidinobenzoato y3-alcoxi-4-cloroisocumarinas; sulfonil fluoruros como fenilmetilsulfonilfluoruro (PMSF) ; d iisopropilfluorofosfato (D FP) ; t osilpropilclorometil ce tona ( TPCK) ; tosilisilclorometil ce tona ( TLCK) ; nitrofenilsulfonatos; inhibidores de proteasa heterociclicos como isocumarinas y cumarinas.

15. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el agente adecuado para mantener el pH en el intervalo de 4 a 7 se selecciona del grupo consistente en citrato, histidina, malato, fosfato, acido tartarico, acido succinico, MES, HEPES, imidazol, TRIS, lactato, glutamato y glicilglicina, con la condicion de que cuando dicho agente es glicilglicina, esta presente en una cantidad de como mucho 7 mg/ml.

16. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho contenido de humedad es como mucho 2% p/p, de forma mas preferida como mucho aproximadamente 1% p/p de humedad.

17. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la composicion es un pastel liofilizado. 15

18. Uso de una composicion tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la preparacion de un medicamento.