COMPOSICIÓN INMUNOMODULADORA QUE CONTIENE UNA FRACCIÓN DE PARTÍCULAS DE LISADOS BACTERIANOS MECÁNICOS.

Composición inmunomoduladora que contiene una fracción de partículas de lisados bacterianos mecánicos Ámbito de la invención La presente invención se refiere a preparaciones bacterianas antigénicas y composiciones farmacéuticas inmunes que contienen fracciones de partículas de lisados bacterianos mecánicos y métodos para su obtención preparación. Estado de la técnica En el estado de la técnica se conocen composiciones inmunomoduladoras de de diferentes tipos, p.ej. composiciones que contienen endotoxinas LPS, o el bacilo de Calmette-Guérin (BCG), que es una cepa atenuada del Mycobacterium tuberculosis, o los RNA de doble hebra (DS-RNA) o, finalmente, composiciones inmunomoduladoras que contienen lisados bacterianos. Los inconvenientes de los tres primeros tipos de composiciones guardan una relación directa con la seguridad, de hecho las LPS pueden utilizarse solamente in vitro; el BCG, aunque se emplea en la terapia humana, ha provocado varios casos de enfermedades infecciosas llamadas BGCitis y el DS-RNA no puede utilizarse en personas humanas debido a su alto potencial toxicológico y oncogénico. Los lisados bacterianos solubles obtenidos por tratamiento alcalino, por ejemplo el producto comercial Broncovaxon (R) , son también conocidos en el estado de la técnica. Las composiciones bacterianas de este tipo carecen de moléculas intactas capaces de interaccionar con los receptores de tipo TOLL expresados en células de macrófagos y, por consiguiente, en las células precursoras de dendritas. De hecho, la maduración de las células dendríticas depende también de la interacción de dichos receptores con estructuras superficiales de bacterias patógenas. Las composiciones inmunomoduladoras divididas en partículas se conocen también en el estado de la técnica. Son composiciones bacterianas polivalentes que contienen fracciones de lisados mecánicos divididas en partículas de diferentes cepas bacterianas. Se dispone de productos comerciales, por ejemplo el Ismigen ® , Immubron ® , que contienen una mezcla de escombros obtenidos por fragmentación mecánicas de bacterias específicas: Staphylococ- cus aureus, Klebsiella pneumoniae - ozaenae, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes - viridans, Neisseria catarrhalis. En el documento FR 2307542A se describe una composición inmunoestimulante que contiene lisados mecánicos de 6 bacterias. En la terminología más reciente, el Diplococcus pneumoniae y la Neisseria catarrhalis se denominan también Streptococcus pneumoniae y Moraxella catarrhalis, respectivamente. Sin embargo, las composiciones que contiene material de tantas cepas bacterianas son difíciles de producir y no están exentas de problemas en relación a la estandarización de la producción, la estandarización del régimen de administración y la consistencia de los efectos obtenidos. Además, aunque los compuestos conocidos ya despliegan una considerable actividad inmunoestimulante, tienen una actividad predeterminada definida, que no permite flexibi- lidad alguna en la adaptación del efecto a las necesidades clínicas específicas. El estado de la técnica, por tanto, mantiene varias necesidades sin resolver en lo que respecta a las inmunocomposiciones del tipo antes mencionado; entre ellas, la necesidad de proporcionar composiciones que puedan producirse y estandarizarse con mayor facilidad; y la necesidad de proporcionar productos inmunomoduladores incluso más eficaces, capaces de estimular o de inhibir la respuesta inmune, pero sobre todo capaces de adaptarse a cualquier necesidad clínica específica, siendo por tanto idóneos para un tratamiento personalizado. Resumen de la invención La presente invención resuelve todos los aspectos de los problemas recién mencionados proporcionando composiciones polivalentes que contengan fracciones de partículas de lisados obtenidos por lisis mecánica de diferentes especies bacterianas, un método para seleccionar dichas especies bacterianas y un método para preparar dichas composiciones. Estas composiciones poseen inmunoestimulación o actividad inmunomoduladora, en el sentido de que inducen la maduración de células dendríticas inmaduras. Por consiguiente es objeto de la presente invención un método para seleccionar las bacterias o una combinación de bacterias adecuadas para preparar inmunocomposiciones que contengan fracciones de lisados obtenidos por lisis mecánica divididas en partículas de tales bacterias para el tratamiento personalizado de los pacientes, que consta de los pasos siguientes: seleccionar las bacterias o combinaciones de bacterias de los géneros siguientes: Staphylococcus, Klebsiella, Diplococcus, Haemophilus, Streptococcus, Neisseria, determinar el nivel de expresión de los cuatro marcadores de membrana: DC80, DC83, DC86 y HLA-II inducidos por cada bacteria o combinación de bacterias en células dendríticas inmaduras; calcular para cada bacteria o combinación de bacterias la puntuación acumulada, que es la suma de las cantidades de los cuatro marcadores expresados, confeccionar el listado de todas bacterias o combinación de bacterias aumentando las puntuaciones acumuladas, 2   con lo cual: cuanto mayor sea la puntuación acumulada, tanto mayor será el efecto de inmunoestimulación. Un segundo objeto de la invención es la inmunocomposición para utilizar en el immunotratamiento médico, que contiene las fracciones de lisados obtenidas por lisis mecánica de las bacterias o combinaciones de bacteria selec- cionadas, divididas en partículas. La inmunocomposición estimuladora de la maduración de células dendríticas inmaduras que contiene las fracciones de lisados obtenidas por lisis mecánica de bacterias, divididas en partículas, de cinco géneros o menos, elegidos entre el grupo formado por el Staphylococcus, Klebsiella, Diplococcus, Haemophilus, Streptococcus, Neisseria y dichas bacterias se eligen entre el Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, y Neisseria catarrhalis. Se entiende por Klebsiella spp la K. pneumoniae y/o ozaenae, y por Streptococcus spp se entiende el S. pyogenes y/o viridans. La composición de la invención puede contener de modo ventajoso por lo menos una de las especies Klebsiella spp, Haemophilus influenzae y Neisseria catarrhalis e inducir la maduración completa de las células dendríticas inmaduras, con expresión completa de las moléculas coestimuladoras CD83, CD80, CD86 y/o HLA de la clase II. Las diferentes formas de realización de la invención comprenden las composiciones polivalentes que contienen combinaciones específicas de dos, tres, cuatro o cinco componentes del grupo formado por el Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis. Otro objeto de la presente invención es un método para preparar inmunocomposición dividida en partículas, que contiene las bacterias seleccionadas o la combinación de bacterias, dichas células de cultivo bacteriano elegidas entre el Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis se lisan mecánicamente, después se recogen las fracciones de partículas de los lisados y opcionalmente se liofilizan. El material antigénico liofilizado o suspendido puede formularse en composiciones farmacéuticas idóneas. En función de las bacterias elegidas se preparan composiciones que producen la inducción de una maduración completa de las células dendríticas inmaduras. Cuando la composición contiene material de dos, tres, cuatro o cinco cultivos bacterianos, los lisados en cuestión se preparan de modo individual y después se mezclan para obtener la actividad deseada. Otro objeto adicional de la invención es una composición adecuada para el uso en el inmunotratamiento médico, con ventaja, en un tratamiento personalizado del paciente. La composición antes descrita se administra en una dosis terapéuticamente eficaz, a ser posible una dosis adaptada al paciente, para obtener el efecto necesario. Las composiciones de la invención ofrecen ventajas indiscutibles. Pueden producirse, y su efecto médico estandarizarse, de modo más fácil y eficaz que las de la técnica anterior, debido que se emplea un número reducido de cepas. Además, en función del tipo de bacterias elegidas y de las combinaciones específicas, estas composiciones son capaces de modular la respuesta inmune del paciente. Esta propiedad ofrece amplias posibilidades de adaptación de las composiciones y del tratamiento a cualquier necesidad clínica específica, permitiendo de este modo la realización de tratamientos personalizados de los pacientes. Otra ventaja de las composiciones de la invención es que pueden desplegar la misma actividad inmunoestimulante de las composiciones ya conocidas o incluso una actividad... [Seguir leyendo]

1. Un método para seleccionar bacterias o combinaciones de bacterias apropiado para preparar inmunocomposiciones que contengan fracciones de lisados divididas en partículas obtenidas por lisis mecánica de dichas bacterias para el tratamiento personalizado de pacientes, que consta de los pasos siguientes: seleccionar las bacterias o combinaciones de bacterias de los géneros siguientes: Staphylococcus, Klebsiella, Diplococcus, Haemophilus, Streptococcus, Neisseria, determinar el nivel de expresión de los cuatro marcadores de membrana: DC80, DC83, DC86 y HLA-II inducidos por cada bacteria o combinación de bacterias en células dendríticas inmaduras; calcular para cada bacteria o combinación de bacterias la puntuación acumulada, que es la suma de las cantidades de los cuatro marcadores expresados, confeccionar el listado de todas bacterias o combinación de bacterias aumentando las puntuaciones acumuladas, con lo cual: cuanto mayor sea la puntuación acumulada, tanto mayor será el efecto de inmunoestimulación. 2. El método de la reivindicación 1, en el que las bacterias o combinaciones de bacterias se eligen entre las especies: Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis, Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae y Streptococcus spp. 3. El método de la reivindicación 2, en el que por lo menos una bacteria se elige entre las especies: Klebsiella spp, Haemophilus influenzae y Neisseria catarrhalis y la inmunocomposición es una composición inmunoestimulante. 4. Un método para preparar una inmunocomposición que contiene bacterias o combinación de bacterias elegidas con arreglo al método de una cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 3, dichas células o combinaciones bacterianas se lisan mecánicamente y después se recogen las fracciones de los lisados divididos en partículas. 5. El método según la reivindicación 4, en el que se recogen las fracciones de partículas de los lisados y se liofilizan. 6. El método según la reivindicación 4, en el que se liofilizan las fracciones de partículas recogidas de cada bacteria antes de mezclarlas. 7. El método según la reivindicación 4, en el que las células bacterianas se inactivan con formaldehído o con calor. 8. El método según la reivindicación 4, en el que las fracciones divididas en partículas se formulan en forma de composición farmacéutica que además contiene uno o más vehículos, excipientes y/o aditivos farmacéuticamente aceptables. 9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones de 4 a 8, en el que las bacterias o composición de bacterias son: - Staphylococcus aureus, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus; - Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp; - Diplococcus pneumoniae; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae; - Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae; - Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Klebsiella spp, Haemophilus influenzae; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp; - Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp; - Klebsiella spp, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Haemophilus influenzae; - Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae; - Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae;   - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrh- alis; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Haemophilus influenzae; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria ca- tarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp; - Diplococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Klebsiella spp; - Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis y - Staphylococcus aureus, Neisseria catarrhalis. 10. Una inmunocomposición de bacterias divididas en partículas para el uso en el inmunotratamiento médico, dichas bacterias divididas en partículas son una fracción de lisado obtenido por lisis mecánica de bacterias o combinaciones de bacterias elegidas entre el grupo formado por: - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Staphylococcus aureus, Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Streptococcus spp; - Diplococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Klebsiella spp, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Klebsiella spp; - Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Staphylococcus aureus, Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae; - Streptococcus spp, Neisseria catarrhalis; - Diplococcus pneumoniae, Neisseria catarrhalis y - Staphylococcus aureus, Neisseria catarrhalis. 16   11. La inmunocomposición de la reivindicación 10 para el uso de agente inmunomodulador específico o inespecífico. 12. Composición de la reivindicación 10 para el uso en la estimulación inespecífica del sistema inmune, la inmunopotenciación inespecífica por vacunación, la inmunoprofilaxis específica de infecciones causadas por las cepas bacterianas contenidas en la composición, la inmunopotenciación del efecto de la vacuna en pacientes que no responden, la inmunoterapia inespecífica de tumores; la inmunoterapia inespecífica de melanoma, de tumores superficiales de vejiga, NSCLC, la inmunoterapia específica de tumores con antígenos asociados a tumor de peso molecular diferente o efectores linfoides asociados a tumores o de células dendríticas cargadas; la activación del sistema de macrófago como limpiador de enfermedades crónicas, decúbito o ulceras fagedénicas y tumores de la zona craneoencefálica. 17   18   19     21   22   23   24