Una composición antigénica que comprende una proteína recombinante que consiste de SEQ. ID. NO. 5 o SEQID NO:6.

Composición antigénica de P. gingivalis

Campo de la invención

Esta invención provee una composición oral y una composición antigénica para utilizar en la supresión de los efectos

patogénicos de la bacteria intra-oral Porphyromonas gingivalis, asociada con una enfermedad periodontal basada en anticuerpos y proteína recombinantes. También provee pruebas de diagnóstico para la presencia de P. gingivalis en muestras de placa subgingival y anticuerpos específicos anti-P.gingivalis en suero. Relacionado con esto y se revela un método para preparar r-Kgp39 y los derivados de esta, utilizando técnicas de ADN recombinante. También se revelan las células huésped transformadas con vectores recombinantes capaces de expresar las proteínas recombinantes. Las proteínas recombinantes son útiles como inmunógenos en una formulación de vacuna para inmunización activa y se pueden utilizar para generar antisuero específico de la proteína útil para inmunización pasiva y como reactivos para ensayos de diagnóstico.

Antecedentes de la invención

Esta invención se relaciona en general con la proteína recombinante de Porphyromonas gingivalis, r-Kgp39. La

invención también se relaciona con las composiciones farmacéuticas y los agentes asociados, basados en estas proteínas recombinantes y derivados para la detección, prevención y tratamiento de una enfermedad periodontal asociada con P. gingivalis.

Las enfermedades periodontales son enfermedades inflamatorias asociadas con bacterias de los tejidos de soporte de los dientes y van desde la forma relativamente suave de la gingivitis, la inflamación reversible, no-específica del tejido gingival a las formas más agresivas de periodontitis que se caracterizan por la destrucción de las estructuras de soporte de los dientes. La periodontitis se asocia con una infección subgingival de un consorcio de bacterias específicas Gram-negativas que conduce a la destrucción del periodoncio y es un importante problema de salud pública. Una bacteria que ha suscitado considerable interés es la P. gingivalis, ya que la recuperación de este microorganismo a partir de lesiones de periodontitis en adultos puede ser hasta 50% de la flora subgingival que se

cultiva anaeróbicamente, mientras que P. gingivalis rara vez se recupera, y luego en pequeñas cantidades, a partir de sitios saludables. Un incremento proporcional en el nivel de P. gingivalis en placa subgingival se ha asociado con un incremento en la severidad de la periodontitis y la erradicación del microorganismo a partir de la población microbiana subgingival cultivable, se logra por la resolución de la enfermedad. La progresión de las lesiones de periodontitis en primates no-humanos se ha demostrado con la implantación subgingival de P. gingivalis. Estos hallazgos en animales como en humanos sugieren un papel importante de P. gingivalis en el desarrollo de periodontitis en adultos.

Más recientemente ha habido una creciente vinculación de enfermedad periodontal y enfermedad cardiovascular y por lo tanto un vínculo entre la infección por P. gingivalis y enfermedad cardiovascular. Más información respecto a este enlace se puede encontrar en Beck JD et al Ann Periodontol 3 : 127-141, 1998 and Beck J, et al. J. Periodontol.

67; 1123-37, 1996.

P. gingivalis expresa un rango de proteínas sobre su superficie celular, las cuales son candidatas potenciales para el desarrollo de una vacuna o diagnóstico. Un grupo importante de las proteínas de la superficie celular expresadas por

P. gingivalis es un grupo de proteinasas y adhesinas asociadas. Una proteinasa designada Arg-gingipain ha sido revelada previamente por Travis et al. (PCT Patent No. WO 95/07286) . Estos investigadores también reportaron una forma de alta masa molecular de Arg-gingipain que se codifica por el gen rgp también se revela en WO 95/07286. La forma de alta masa molecular de Arg-gingipain consiste de la proteinasa y varias otras proteínas propuestas para ser adhesinas. Los complejos de superficie celular de P. gingivalis que consiste de proteinasas específicas Arg-y Lys y las adhesinas también se han revelado por Reynolds et al. (PCT/AU96/00673) . Ninguna de estas divulgaciones proporciona la enseñanza respecto a la utilidad de una adhesina particular como un recombinante en la protección

45 de la infección por P. gingivalis.

WO98/49192 revela los fragmentos encontrados en Kgp39 o ambos Rgp44 y Kgp39, que generan una respuesta inmune protectora cuando se conjuga con toxoide diftérico.

Resumen de la invención

La invención es como se establece en las reivindicaciones.

En un primer aspecto, la presente invención consiste de una composición antigénica, la composición que comprende una proteína recombinante que consiste de SEQ. ID. NO. 5 o SEQ. ID. NO. 6.

En otra modalidad preferida la composición antigénica además comprende un adyuvante.

En incluso otra modalidad preferida, la proteína recombinante es una proteína quimérica o una de fusión. Cuando la proteína recombinante es una proteína quimérica o una de fusión, esta consiste de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6 unidas a una o más secuencias del polipéptido.

En un segundo aspecto, la presente invención consiste de una composición, la composición que comprende al menos un anticuerpo policlonal, siendo el anticuerpo construido contra la composición antigénica del primer aspecto de la presente invención.

En un tercer aspecto, la presente invención consiste de una célula recombinante procariota o eucariota, la célula recombinante que comprende una secuencia de ADN que consiste de SEQ.ID.NO. 7 o SEQ.ID. NO. 8 ligada operativamente a al menos un elemento regulador.

En otro aspecto de la presente invención, se provee una composición antigénica de la invención para utilizar en la prevención o la reducción de la incidencia o severidad de la infección por P. gingivalis en un sujeto.

En otro aspecto, la presente invención provee una composición de anticuerpo que comprende al menos un anticuerpo construido contra la composición antigénica de la invención, en donde el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido, que consiste de SEQ.ID. NO. 5 o SEQ.ID. NO. 6, para utilizar en la prevención o la reducción de la incidencia o severidad de la infección por P. gingivalis en un sujeto.

En incluso otro aspecto, la invención incluye el uso de la composición de anticuerpo de la invención en un método in vitro de diagnóstico de P. gingivalis.

Dada la vinculación creciente de la enfermedad periodontal con una enfermedad cardiovascular (CVD) y por lo tanto el posible vínculo de la infección por P. gingivalis y CVD, la composición antigénica del primer aspecto de la presente invención también se puede utilizar en una terapia profiláctica para reducir la incidencia o severidad de CVD o como un complemento en el tratamiento de CVD.

Una forma importante de la invención es una vacuna basada en las reivindicadas proteínas r-Kgp39 o los péptidos y el adyuvante apropiado administrado por aerosol nasal, vía oral o por inyección, para producir una respuesta inmune específica contra la proteína r-Kgp39. Una vacuna también se puede basar en un componente recombinante del segmento del gen de Kgp39 incorporado en un vector apropiado y expresado en un huésped transformado apropiado (por ejemplo, E. coli, Bacillus subtilis, Saccharomyces cerevisiae, células COS, células CHO y células HeLa) , que contiene el vector. La proteína componente, péptidos, y oligopéptidos con epitopes inmunogénicos a partir de la proteína Kgp39, se pueden utilizar como inmunógenos en diversas formulaciones de vacunas en la prevención de enfermedades periodontales. Adicionalmente, de acuerdo con la presente invención, las proteínas Kgp39 y péptidos relacionados o quimeras producidos, se pueden utilizar para generar un antisuero de P. gingivalis útil para la inmunización pasiva contra la enfermedad periodontal y las infecciones causadas por P. gingivalis.

Utilizando técnicas de ADN recombinante el segmento del gen codificante de Kgp39, o fragmentos del gen que codifican uno o más péptidos o quimeras que tienen epitopes inmunogénicos, se incorpora en un vector de expresión, y el vector recombinante se introduce en una célula huésped apropiada, dirigiendo así la expresión... [Seguir leyendo]

1. Una composición antigénica que comprende una proteína recombinante que consiste de SEQ. ID. NO. 5 o SEQ ID NO:6.

2. Una composición antigénica que comprende una proteína recombinante de fusión o quimérica, en donde la

proteína recombinante de fusión o quimérica consiste de SEQ. ID. NO. 5 o SEQ. ID. NO. 6 unidas a una o más secuencias del polipéptido.

3. Una composición antigénica como se reivindica en la reivindicación 1 o reivindicación 2, que además comprende un adyuvante.

4. Una composición de anticuerpo, la composición que comprende al menos un anticuerpo policlonal construido 10 contra la composición antigénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Una célula eucariota o procariota recombinante que comprende una secuencia de ADN, en donde la secuencia de ADN consiste de SEQ. ID NO. 7 o SEQ. ID. NO. 8 ligadas operativamente a al menos un elemento regulador.

6. Una composición antigénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para utilizar en la prevención o reducción de la incidencia o severidad de infección por P. gingivalis en un sujeto.

7. Una composición de anticuerpo que comprende al menos un anticuerpo construido contra la composición antigénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido que consiste de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6 para utilizar en la prevención o reducción de la incidencia o severidad de infección por P. gingivalis en un sujeto.

8. Uso de una composición de anticuerpo en un método in vitro de diagnóstico de P. gingivalis, en donde la

composición de anticuerpo comprende al menos un anticuerpo construido contra la composición antigénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones1a3, en donde el anticuerpose une específicamentea un polipéptido que consiste de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6.

FIGURA 1

FIGURA 2

FIGURA 3

FIGURA 4

FIGURA 5

FIGURA 6