ARNsi específico de la isoforma WT1 17AA(-) y uso del mismo.
Un polinucleOtido de 15 a 49 bases de longitud que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencianucleotidica de la SEQ ID NO:
26 y que incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27, donde elpolinucleOtido puede proporcionar un ARNsi que puede inhibir especificamente una expresi6n de la isoforma VVT117AA( -) sin inhibir una expresi6n de la isoforma VVT1 17AA( + ).
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2007/056667.
Solicitante: INTERNATIONAL INSTITUTE OF CANCER IMMUNOLOGY, INC..
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 13-9, ENOKI-CHO SUITA-SHI, OSAKA 564-0053 JAPON.
Inventor/es: SUGIYAMA, HARUO, OJI,Yusuke.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K31/7088 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › Compuestos que tienen al menos tres nucleósidos o nucleótidos.
- C12N15/113 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Acidos nucleicos no codificantes que modulan la expresión de genes, p.ej. oligonucleótidos antisentido.
PDF original: ES-2387999_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
ARNsi ESPECIFICO DE LA ISOFORMA VVT1 17AA ( —) Y USO DEL MISMO
Campo tecnico
La presente invenciOn se refiere a un ARNsi que act0a sabre un gen VVT1, y uso del ARNsi. Especificamente, la presente invenciOn se refiere a una supresión del crecimiento de un tumor sOlido, y a una inducción de muerte celular en el tumor sOlido, por medio de un ARNsi que suprime una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( — ) .
Tecnica anterior
El gen del tumor de VVilms (gen VVT1) es un gen que codifica un factor de transcripción con dedos de cinc. En el gen VVT1, se sabe que tiene lugar un splicing alternativo en el sitio de 17 aminoacidos (17AA) compuesto par un ex6n 5
en el gen VVT1 y en el sitio de 3 aminoacidos (KTS) que existe entre un dedo de cinc 3 y un dedo de cinc 4 a fin de que se generen cuatro isoformas (17AA ( + ) KTS ( +) , 17AA ( + ) KTS ( — ) , 17AA ( — ) KTS ( + ) y 17AA ( — ) KTS ( — ) ) . Las cuatro isoformas se expresan en un tumor sOlido humano y una celula leucernica (veanse los Documentos 1 y 2, que no corresponden a una patente, par ejemplo) .
El gen VVT1 se ha considerado coma un gen supresor de tumor. Sin embargo, recientemente se ha descubierto que el gen VVT1 funciona coma un oncogen. Par ejemplo, los inventores de la presente invenciOn han informado que un gen VVT1 de tipo silvestre que no incluye una mutación en el mismo se expresa altamente en casi todas las celulas leucernicas, y un nivel de la expresión tiene una correlaciOn inversa con el pronóstico de un paciente con leucemia (veanse los Documentos 3 y 4 que no corresponden a una patente, par ejemplo) . Tambien se ha informado par los
inventores de la presente invenciOn que un crecimiento de la celula leucernica se suprime especificamente transduciendo un ADN no codificante de VVT1 en la celula leucernica (vease el Documento que no corresponde a una patente 5, par ejemplo) , y la diferenciación de una celula precursora mieloide normal de ratón y una linea celular precursora mieloide 32D cI3 en un neutrOfilo se suprimen mediante una expresión forzada del gen VVT1 para crecer de forma proliferativa (vease el Documento que no corresponde a una patente 6, par ejemplo) . En base a lo anterior,
los inventores de la presente invenciOn han indicado que el gen VVT1 es el responsable de que una celula de linaje hematopoyetico sea leucernica. Adernas, los inventores de la presente invenciOn han informado que el gen VVT1 de tipo natural se expresa altamente en diversos tumores sOlidos (veanse los Documentos 7 a 14 que no corresponden a una patente, par ejemplo) .
Se considera que las cuatro isoformas que se han mencionado anteriormente tienen diferentes funciones, respectivamente. Par ejemplo, se considera que la isoforma VVT1 17AA ( + ) KTS ( + ) contribuye al crecimiento de celulas cancerosas (vease el Documento que no corresponde a una patente 15) . Se considera que la isoforma VVT1 17AA ( + ) KTS ( —) es responsable de la formación de un tumor de linfoma maligno (vease el Documento 16 que no corresponde a una patente) .
En los Oltimos arms los inventores de la presente invenciOn han demostrado que el ARNsi especifico de la isoforma VVT1 17AA ( + ) induce la apoptosis de una celula leucernica que expresa el gen VVT1 (vease el Documento 17 que no corresponde a una patente) .
45 [Documento 1 que no corresponde a una patente] Oji Y. y col., Int. J. Cancer 100: 297 (2002) [Documento 2 que no corresponde a una patente] Siehl J. M. y col., Ann. Hematol. 83: 745 (2000) [Documento 3 que no corresponde a una patente]
50 Inoue K. y col., Blood 84: 3071 (1994) [Documento 4 que no corresponde a una patente] Inoue K. y col., Blood 89: 1405 (1997) [Documento 5 que no corresponde a una patente] Yamaguchi T. y col., Blood 87: 2828 (1996)
55 [Documento 6 que no corresponde a una patente] Inoue K. y col., Blood 91: 2969 (1998) [Documento 7 que no corresponde a una patente] Oji Y. y col., Japanese Journal of Cancer Research 90: 194 (1999) [Documento 8 que no corresponde a una patente]
Oji Y. y col., Int J Cancer; 100: 297-303 (2002) [Documento 9 que no corresponde a una patente] Ueda T. y col., Cancer Science 94: 271 (2003) [Documento 10 que no corresponde a una patente]
Oji Y. y col., Cancer Science 94: 523 (2003) [Documento 11 que no corresponde a una patente] Oji Y. y col., Cancer Science 94: 606 (2003) [Documento 12 que no corresponde a una patente] Oji Y. y col., Cancer Science 94: 712 (2003)
[Documento 13 que no corresponde a una patente] Oji Y. y col., Neoplasma 51: 17 (2004) [Documento 14 que no corresponde a una patente] Oji Y. y col., Jpn. J. Clin. Oncol. 34: 74 (2004) [Documento 15 que no corresponde a una patente]
Hubinger G. y col., Exp Hematol 10: 1226-1235 (2001) [Documento 16 que no corresponde a una patente] Li H. y col., Int J Hematol 77: 463-470 (2003) [Documento 17 que no corresponde a una patente] Ito K. y col., Oncogene; Mar 6: 1 (2006)
[Documento 18 que no corresponde a una patente] Englert C. y col., Cancer Res 8: 1429— 1434 (1997) [Documento 19 que no corresponde a una patente] Loeb D. M. y col., Leukemia 17: 965— 971 (2003)
Descripción de la invenciOn
Como se ha descrito anteriormente, se considera que es posible aplicar una terapia de alcance molecular especificamente a una celula cancerosa suprimiendo una función de VVT1 que tiene una función coma oncogen. Sin embargo, una tecnica que usa oligo-ADN no codificante o una ribozima, que se usa coma un procedimiento
convencional para la supresión de una expresión del gen VVT1, podria no alcanzar una alta eficacia en la supresión de la expresión del gen VVT1, o una alta especificidad, en una medida suficiente.
La presente invenciOn se realiza en vista de los problemas anteriores, y un objeto de la presente invenciOn es conseguir una terapia de alcance molecular especifica de las celulas cancerosas que controle con exito la función 35 del VVT1.
Como se ha mencionado anteriormente, se ha indicado que la isoforma VVT1 17AA ( + ) tiene una función de oncogen. Sin embargo, no se ha determinado una función de la isoforma VVT1 17AA ( — ) KTS ( +) . Mientras tanto, se ha informado que la isoforma 17AA ( — ) KTS ( — ) induce un arresto en G1 en una celula de osteosarcoma (/ease el
Documento 18 que no corresponde a una patente) , y promueve una diferenciación mediante la inhibición de la transición G1/S en una celula de linea celula precursora mieloide 320 cI3 (/ease el Documento 19 que no corresponde a una patente) . Adernas, un ARNsi especifico de la isoforma VVT1 17AA ( —) no induce la apoptosis de una linea celular leucernica que expresa VVT1 o una linea celular de linfoma que no expresa VVT1 (/ease el Documento 17 que no corresponde a una patente) .
Los inventores de la presente invenciOn han demostrado en primer lugar que, en una celula de un tumor sOlido, la isoforma VVT1 171AA ( — ) KTS ( —) cumple una función coma oncogen para cambiar un citoesqueleto controlando un nivel de expresión de una proteina de unión a actina (cofilina, actinina y gelsolina) para inducir un cambia en la forma de la celula, una mejora en el desplazamiento celular in vitro, y una mejora en la capacidad de la invasiOn
50 celular. Adernas, los inventores de la presente invenciOn han descubierto que puede inducirse una muerte celular especificamente en una celula tumoral inhibiendo especificamente una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( — ) . Basandose en lo anterior se realiza la presente invenciOn.
Es decir, el polinucleOtido de acuerdo con la presente invenciOn es un polinucleOtido de acuerdo con las
55 reivindicaciones y que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia de bases de la SEQ ID NO: 26 y que incluye la secuencia de bases de la SEQ ID NO: 27. Es preferible una disposición para que el polinucleOtido tenga la secuencia de bases de la SEQ ID NO: 26.
Con la disposición, el polinucleOtido de acuerdo con la presente invenciOn puede proporcionar un ARNsi que puede
inhibir especificamente una expresión de la isoforma VVT1 171AA ( —) sin inhibir una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( +)
... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. UnpolinucleOtido de 15 a 49 bases de longitud que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26 y que incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27, donde el
polinucleOtido puede proporcionar un ARNsi que puede inhibir especificamente una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( —) sin inhibir una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( + ) .
2. UnpolinucleOtido que consiste en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26.
3. Unacomposición medica para tratar un tumor sOlido, que comprende uno cualquiera de ARN de doble helice, ADN que codifica el ARN de doble helice; y un vector en el que se inserta el ADN, donde:
el ARN de doble helice puede inhibir especificamente una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( —) sin inhibir una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( + ) , y este compuesto por (i) un primer ARN y (ii) un segundo ARN capaz de
emparejarse con el primer ARN; donde el primer ARN es codificado por un ADN complementario a un polinucleOtido que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26 e incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27.
4. Lacomposición medica de acuerdo con la reivindicaciOn 3, donde el ADN que codifica el segundo
20 ARN hibrida en una condición astringente con un polinucleOtido que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26 y que incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27.
5. Lacomposición medica de acuerdo con la reivindicaciOn 3, donde el segundo ARN incluye al menos
bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 29. 25
6. Lacomposición medica de acuerdo con la reivindicaciOn 3, donde el primer ARN incluye al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 30.
7. Lacomposición medica de acuerdo con la reivindicaciOn 3, donde el ADN que codifica el ARN de 30 doble helice incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27.
8. Lacomposición medica de acuerdo con la reivindicaciOn 3, donde el ARN de doble helice este compuesto por un emparejamiento de ARN que incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 29 con ARN incluyendo la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 30.
9. Unkit medico para tratar un tumor sOlido, que comprende uno cualquiera de un ARN de doble helice, ADN que codifica el ARN de doble helice; y un vector en el que se inserta el ADN, donde:
el ARN de doble helice puede inhibir especificamente una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( —) sin inhibir una
expresión de la isoforma VVT1 17AA ( + ) , y este compuesto por (i) un primer ARN y (ii) un segundo ARN capaz de emparejarse con el primer ARN; donde el primer ARN este codificado por un ADN complementario a un polinucleOtido que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26 e incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27.
45 10. Usode un ARN de doble helice, ADN que codifica el ARN de doble helice, o un vector en el que se inserta el ADN, para fabricar un medicamento para el tratamiento de un tumor sOlido, donde:
el ARN de doble helice puede inhibir especificamente una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( —) sin inhibir una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( + ) , y este compuesto por (i) un primer ARN y (ii) un segundo ARN capaz de
50 emparejarse con el primer ARN, donde el primer ARN este codificado por un ADN complementario a un polinucleOtido que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26 e incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27.
11. UnARN de doble helice que este compuesto por (i) un primer ARN y (ii) un segundo ARN capaz de 55 emparejarse con el primer ARN, donde
el primer ARN este codificado por un ADN complementario a un polinucleOtido que tiene al menos 15 bases contiguas en la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 26; y donde el polinucleOtido incluye la secuencia nucleotidica de la SEQ ID NO: 27,
donde el ARN de doble helice puede inhibir especificamente una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( —) sin inhibir una expresión de la isoforma VVT1 17AA ( +)
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