Un pilus aislado codificado por la isla de pilus II de Streptococcus pneumoniae (INV104B) .

Antígenos de pilus de Streptococcus pneumoniae Campo La presente invención se refiere a polipéptidos, incluyendo proteínas de pili, de Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) , incluyendo fragmentos y variantes de las mismas, y procedimientos para su uso en el tratamiento de, e inmunización contra, infecciones por S. pneumoniae.

Antecedentes

La bacteria Gram-positiva Streptococcus pneumoniae (también conocida como Spn o neumococo) es una causa importante de morbilidad y mortalidad en todo el mundo y representa una de las cuatro enfermedades infecciosas letales principales, junto con VIH, malaria y tuberculosis (Bruyn, G. A. W. & van Furth, R. (1991) Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 10, 897-910; Ryan, M. W. & Antonelli, P. J. (2000) Lar y ngoscope 110, 961-964; Cutts, F. T., Zaman, S. M., Enwere, G., Jaffar, S., Levine, O. S., Okoko, C. Oluwalana, A., Vaughan, S., Obaro, A., Leach, A., y col. (2005) Lancet 365, 1139-1146; Swiatlo, E., Champlin, F. R., Holman, S. C., Wilson, W. W.& Watt, J. M. (2002) Infect. Immun. 70, 412-415; Sandgren, A., Albiger, B., Orihuela, C., Tuomanen, E., Noumark, S. & Henriques-Nonnark, B. (2005) J. Infect. Dis. 192, 791-800) . Es una causa principal de infecciones del tracto respiratorio tales como otitis media, sinusitis y neumonía adquirida en la comunidad, pero también es un patógeno importante en enfermedades invasivas tales como septicemia y meningitis. Incluso aunque el neumococo es un patógeno devastador, también coloniza de forma inocua a niños sanos que acuden a guarderías en un alto grado (Henriques Normark, B., Christensson, B., Sandgren, A., Noreen, B., Sylvan, S., Burman, L. G. & Olsson-Liljequist, B. (2003) Microb. Drug Resist. 9, 337-344; Nunes, S., Sá-Leão, R., Carriço, J., Alves, C. R., Mato, R., Avô, A. B., Saldanha, J., Almeida, J. S., Sanches, I. S. & de Lencastre, H. (2005) J. Clin. Microbiol. 43, 1285-1293) . Un factor de virulencia importante en la enfermedad neumocócica es la cápsula de polisacáridos, por la que los neumococos se agrupan en al menos noventa serotipos diferentes (Henrichsen, J. (1995) J. Clin. Microbiol. 33, 2759-2762) . Se ha descrito que otros factores genéticos, tales como CbpA (proteína de unión a colina A) y neumolisina, son importantes para la virulencia (Lau, G. W., Haataja, S., Lonetto, M., Kensit, S. E., Marra, A., Br y ant, A. P., McDevitt, D., Morrison, D. A. & Holden, D. W. (2001) Mol. Microbiol. 40, 555-571; Rosenow, C., Ryan, P., Weiser, J. N., Johnson, S., Fontan, P., Ortqvist, A. & Masure, H. R. (1997) Mol. Microbiol. 25, 819-829; Tuomanen, E. (1999) Currant Opin. Biol. 2, 35-39) .

La infección por S. pneumoniae conduce a enfermedad invasiva desencadenada por la colonización inicial de la nasofaringe, pero los mecanismos de adhesión no se entienden bien. La adhesión in vitro de neumococos encapsulados es mucho menor que para derivados no virulentos no encapsulados (Swiatlo, E., Champlin, F. R., Holman, S. C., Wilson, W. W. & Watt, J. M. (2002) Infect. Immun. 70, 412-415) , incluso aunque la expresión de la cápsula es esencial para la colonización exitosa de las vías respiratorias superiores. Estas observaciones sugieren que in vivo, los neumococos son adhesivos a pesar de la producción de una cápsula gruesa (Sandgren, A., Albiger, B., Orihuela, C., Tuomanen, E., Normark, S. & Henriques-Normark, B. (2005) J. Infect. Dis. 192, 791-800) .

En otras bacterias Gram-positivas, tales como Cor y nebacterium diphtheriae (Ton-That, H., Marraffini, L. A. & Schneewind, O. (2004) Mol. Microbiol. 53, 251-261; Ton-That, H. & Schneewind, O. (2003) Mol. Microbiol. 50, 14291438) , Actinomyces spp. (Kelstrup, J., Theilade, J. & Fejerskov, O. (1979) Scand. J. Dent. Res. 87, 415-423) , y recientemente estreptococos del grupo A (GAS) y estreptococos del grupo B (GBS) (Mora, M., Bensi, G., Capo, S., Falugi, F., Zingaretti, C., Manetti, A. G. O., Maggi, T., Taddei, A. R., Grandi, G. & Telford, J. L. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci.USA102, 15641-15646; Lauer, P., Rinaudo, C. D., Soriani, M., Margarit, I., Mainone, D., Rosini, R., Taddei, A. R., Mora, M., Rappuoli, R., Grandi, G. & Telford, J. L. (2005) Science 309, 105) , se han identificado estructuras superficiales de tipo pili por microscopía electrónica y se han caracterizado genéticamente así como bioquímicamente (Ton-That, H., Marraffini, L. A. & Schneewind, O. (2004) Mol. Microbiol. 53, 251-261; Ton-That, H. & Schneewind, O. (2003) Mol. Microbiol. 50, 1429-1438; Mora, M., Bensi, G., Capo, S., Falugi, F., Zingaretti, C., Manetti, A. G. O., Maggi, T., Taddei, A. R., Grandi, G. & Telford, J. L. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 1564115646; Lauer, P., Rinaudo, C. D., Soriani, M., Margarit, I., Mainone, D., Rosini, R., Taddei, A. R., Mora, M., Rappuoli, R., Grandi, G. & Telford, J. L. (2005) Science 309, 105) . En Actinomyces spp. los genes fimbriales de tipo 1 median en la adhesión a superficies dentales y mucosas (Li, T., Khah, M. K., Slavnic, S., Johansson, I. & Stromberg, N. (2001) Infect Immun. 69, 7224-7233) . Sin embargo, existe la necesidad de datos funcionales sobre el papel fisiológico y la función en enfermedad infecciosa de pili y otros antígenos en Streptococcus spp patógeno.

Los pili Gram-positivos son polímeros extendidos formados por una reacción de transpeptidasa que implica reticulación covalente de proteínas subunitarias que contienen motivos de aminoácidos específicos, que se ensamblan por sortasas específicas. Las sortasas también son responsables de la unión covalente del pilus a la pared celular de peptidoglucanos.

Sumario

La presente divulgación describe polipéptidos de Streptococcus pneumoniae. En algunos aspectos los polipéptidos descritos en el presente documento incluyen péptidos de pili de S. pneumoniae. En otros aspectos, se describen otros polipéptidos de S. pneumoniae. Los polipéptidos de Streptococcus pneumoniae descritos en el presente documento son útiles en procedimientos de tratamiento para e inmunización contra infecciones por S. pneumoniae.

En algunos aspectos, la divulgación presenta polipéptidos de pili de una segunda isla de pili identificada en Streptococcus pneumoniae INV104B (isla de pilus II (FN-V104B) ) . En otros aspectos, la divulgación presenta polipéptidos de pili identificados en S. pneumoniae 23F, INV200 y OXC141. Se cree que los pili desempeñan un papel en la patogénesis de S. pneumoniae.

En algunos aspectos, la divulgación presenta pilus aislado codificado por la isla de pilus II de Streptococcus pneumoniae (INV104B) . En algunas realizaciones, el pilus incluye una sortasa. En algunas realizaciones, el pilus incluye una proteína anclada en la pared celular LPXTG, por ejemplo, un polipéptido que tenga la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 2, 4 y/o 6, o una forma procesada de la misma.

En algunas realizaciones, los pili se separan de las células por digestión enzimática (por ejemplo, con una o más enzimas tales como peptidoglucano hidrolasa (por ejemplo, mutanolisina, lisostafina y lisozima) ) . En algunas realizaciones, los pili se separan de las células por corte mecánico (por ejemplo, por ultrasonicación) . En algunas realizaciones, los pili están sustancialmente sin células bacterianas. En algunas realizaciones, la divulgación presenta procedimientos para producir el pilus (por ejemplo, pili de S. pneumoniae) , incluyendo los procedimientos someter a una célula bacteriana que produce el pilus a digestión enzimática o corte mecánico y aislar el pilus de la célula.

En otros aspectos, la divulgación presenta composiciones inmunogénicas que incluyen uno o más de los pili aislados (por ejemplo, pili de S. pneumoniae) .

En otros aspectos, la divulgación presenta una sortasa de Streptococcus pneumoniae aislada, siendo la sortasa una de SEC ID Nº 282, SEC ID Nº 1386, SEC ID Nº 676 o SEC ID Nº 1123.

En otros aspectos, la divulgación presenta una proteína anclada en la pared celular LPXTG de Streptococcus pneumoniae aislada, siendo la proteína anclada en la pared celular LPXTG una de SEC ID Nº 2, SEC ID Nº 4, SEC ID Nº 6, SEC ID Nº 7, SEC ID Nº 8 o SEC ID Nº 9.

En aspectos adicionales, la divulgación presenta procedimientos para aislar pili codificados por la isla de pilus II de Streptococcus pneumoniae (INV 104B) , incluyendo los procedimientos someter a células bacterianas que producen pili codificados por la isla de pilus II de Streptococcus pneumoniae (INV104B) a digestión enzimática (por ejemplo, mutanolisina) o corte mecánico (por ejemplo, ultrasonicación) y aislar los pili de las células. En algunas realizaciones,... [Seguir leyendo]

1. Un pilus aislado codificado por la isla de pilus II de Streptococcus pneumoniae (INV104B) .

2. El pilus de la reivindicación 1, en el que el pilus comprende una sortasa o una proteína anclada en la pared celular LPXTG.

3. El pilus de la reivindicación 1, en el que el pilus ha sido separado de las células por digestión enzimática o cizallamiento mecánico, opcionalmente en el que el corte mecánico comprende ultrasonicación.

4. El pilus de la reivindicación 1, en el que el pilus está sustancialmente libre de células bacterianas.

5. Una composición inmunogénica que comprende uno o más pili de la reivindicación 1.

6. Un procedimiento para producir el pilus de la reivindicación 1, comprendiendo el procedimiento someter una célula 10 bacteriana que produce el pilus a digestión enzimática o cizallamiento mecánico y aislar el pilus de la célula.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que:

el cizallamiento mecánico implica ultrasonicación; la digestión enzimática se realiza usando una enzima lítica, preferentemente mutanolisina; el aislamiento comprende una o más centrifugaciones de gradiente de densidad;

el aislamiento comprende reducir la polidispersidad, opcionalmente separando componentes por tamaño;

o cualquiera de los procedimientos anteriores que comprende adicionalmente degradar ácidos nucleicos con una nucleasa.

8. Pili codificados por la isla de pilus II de Streptococcus pneumoniae (INV104B) para su uso en un procedimiento para inducir una respuesta inmune contra Streptococcus pneumoniae en un sujeto.

9. Los pili de la reivindicación 8, estando los pili aislados.