ANTICUERPOS ANTI-NGF PARA EL TRATAMIENTO DE DIVERSOS TRASTORNOS.

Anticuerpos Anti-NGF para el Tratamiento de Diversos Trastornos Antecedente de la Invención Campo de la Invención La presente invención se relaciona de manera general con métodos para utilizar los anticuerpos anti-NGF como se define en las reivindicaciones en el tratamiento de dolor crónico. Los métodos son efectivos en el tratamiento de este trastorno en un paciente sin tener un efecto adverso significativo en el sistema inmune del paciente. Descripción de la Técnica Relacionada Factor de Crecimiento Nervioso (NGF) El Factor de Crecimiento Nervioso (NGF) es la primera neurotrofina que se va a identificar, y se ha caracterizado bien su función en el desarrollo y la supervivencia de las neuronas periféricas y centrales. Se ha mostrado que el NGF tiene un factor de mantenimiento y supervivencia crítica en el desarrollo de las neuronas sensoriales embriónicas y simpáticas periféricas y de neuronas colinérgicas prosencefálicas basales (Smeyne et al., Nature 368:246-249 (1994); Crowley et al., Cell 76:1001-1011 (1994)). El NGF regula por aumento la expresión de neuropéptidos en las neuronas sensoriales (Lindsay and Harmer, Nature 337:362-364 (1989)) y su actividad está mediada a través de dos receptores de unión de membrana diferentes. El receptor de tirosina quinasa TrkA media la unión de alta afinidad y el receptor p75, que se relaciona estructuralmente con otros miembros de la familia del receptor de factor de necrosis de tumor, media la unión de baja afinidad (Chao et al., Science 232:518-521 (1986)). Además de sus efectos en el sistema nervioso, el NGF ha estado implicado gradualmente en los procesos por fuera del sistema nervioso. Por ejemplo, se ha mostrado que el NGF mejora la permeabilidad vascular (Otten et al., Eur. J. Pharmacol. 106:199-201 (1984)), mejora las respuestas inmunes de célula T- y B (Otten et al., Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A. 86:10059-10063 (1989)), inducen la diferenciación de linfocito y la proliferación de mastocitos y provocan la liberación de las señales biológicas solubles de los mastocitos (Matsuda at al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:6508- 6512 (1988); Pearce et al., J. Physiol. 372:379-393 (1986); Bischoff et al., Blood 79:2662-2669 (1992); Horigome et al., J. Biol. Chem. 268:14881-14887 (1993)). Se produce NGF mediante un número de tipos celulares que incluyen mastocitos (Leon et al., Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A. 91:3739-3743 (1994)), linfocitos B (Torcia at al., Cell 85:345-356 (1996), queratinocitos (Di Marco et al., J. Biol. Chem. 268:22838-22846)) y células de músculo liso (Ueyama et al., J. Hypertens. 11:1061-1065 (1993)). Se han encontrado los receptores NGF en una variedad de tipos celulares por fuera del sistema nervioso. Por ejemplo, se ha encontrado el TrkA en monocitos humanos, linfocitos T- y B y mastocitos. Consistente con una función no neuronal para el NGF, se ha observado una asociación aumentada entre los niveles NGF y una variedad de afecciones inflamatorias en pacientes humanos así como también en diversos modelos de animal. Estos incluyen lupus eritematoso sistémico (Bracci- Laudiero et al., Neuroreport 4:563-565 (1993)), esclerosis múltiple (Bracci-Laudiero et al., Neurosci. Lett. 147:9-12 (1992)), soriasis (Raychaudhuri et al., Acta Derm.Venereol. 78:84-86 (1998)), artritis (Falcini at al., Ann. Rheum. Dis. 55:745-748 (1996)) y asma (Braun et al., Eur. J. Immunol. 28:3240-3251 (1998)). Las afecciones inflamatorias crónicas tales como estas son un problema de salud pública significativo. Por ejemplo, se estima que la artritis afecta 37.9 millones de personas solo en los Estados Unidos. Las terapias actuales para tratar estas afecciones se limitan severamente. La comprensión de la función del NGF en estas enfermedades puede proporcionar nuevos métodos para tratarlas. Se ha observado una correlación entre tensión y soriasis. Con base en esta correlación y la simetría de las lesiones cutáneas que acompañan la enfermedad, se ha propuesto una relación con el sistema nervioso (Raychaudhuri et al., Acta Derm. Venercol. 78: 84-86 (1998)). En particular, se ha sugerido que los neuropéptidos cumplen una función en la patogenia de la soriasis. Los investigadores han reportado un número creciente de nervios cutáneos terminales junto con la regulación por aumento de uno o más de los neuropéptidos, tales como la sustancia P (SP), el polipéptido intestinal vasoactivo (VIP) y CGRP. El NGF cumple una función en la regulación de la inervación en la piel y también se sabe que regula por aumento los neuropéptidos, lo que sugiere que los niveles de NGF aumentados pueden ser responsables de la regulación por aumento de los neuropéptidos y la inervación cutánea aumentada vista con la soriasis. De hecho, se ha observado una expresión aumentada de NGF en queratinocitos soriáticos (Raychaudhuri et al., Acta Derm. Venercol. 78:84-86 (1998)). Se ha sugerido que aunque el NGF sirve normalmente como un factor de supervivencia para los queratinocitos, la sobreexpresión del NGF evita la muerte celular normal, que conduce a soriasis (Pincelli et al., J. Derm. Sci. 22:71-79 (2000)). 2 E02774103 15-11-2011   Un número de estudios han indicado que los neuropéptidos tales como la sustancia P (SP) y los compuestos biológicamente activos liberados de los mastocitos, tales como histamina, también cumplen una función en la artritis que ocurre de forma natural en los humanos y la artritis inducida experimentalmente en modelos de animal (ver por ejemplo Levine, J., Science 226:547-549 (1984)). Se ha mostrado que el NGF afecta la degranulación de los mastocitos (Bruni et al., FEBS Lett. 138:190-193 (1982)) y sustancia P liberada (Donnerer et al., Neurosci. 49: 693- 698 (1992)), que se implica en la patogenia de la artritis. De manera consistente, un nivel elevado del NGF en los tejidos periféricos se asocia con hiperalgesia e inflamación y se ha observado en un número de formas de artritis. El sinovio de los pacientes afectados por artritis reumatoide expresa altos niveles de NGF aunque se ha reportado que el NGF del sinovio no inflamado es indetectable (Aloe et al., Arch. Rheum. 35:351-355 (1992)). Se ven resultados similares en ratas con artritis reumatoide reducida experimentalmente (Aloe al., Clin. Exp. Rheumatol. 10:203-204 (1992)). Se han reportado niveles elevados de NGF en ratones artríticos transgénicos junto con un aumento en el número de los mastocitos. (Aloe et al., Int. J. Tissue Reactions-Exp. Clin. Aspects 15:139-143 (1993)). Sin embargo, el NGF purificado inyectado en el sinovio de la articulación de ratas normales no induce la inflamación de la articulación rodilla, lo que sugiere que el NGF no cumple una función causativa en la artritis (Aloe et al., Growth Factors 9:149-155 (1993)). Los altos niveles de NGF se han asociado con inflamación alérgica y se ha sugerido que esta esto se relaciona con degranulación de mastocitos (Bonini et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:10955-10960 (1996)). También se observan niveles de NGF elevados en el asma alérgica o no alérgica (Bonini et al., supra). Se han propuesto que los mastocitos, eosinófilos y linfocitos T cumplen una función en esta enfermedad inflamatoria y la correlación entre los niveles de suero NGF y los títulos de anticuerpo IgE sugieren que el NGF contribuye a la respuesta inmune inflamatoria. La inflamación de las vías respiratorias inducida por alérgenos se ha asociado con producción aumentada local de NGF en ratones y humanos (Braun et al., Int. Arch. Allergy Immunol. 118:163-165 (1999)). Se ha mostrado que el NGF regula el desarrollo aumentado de la respuesta hiperactiva de las vías respiratorias, una característica del asma bronquial (Braun et al., Eur. J. Immunol. 28:3240-3251 (1998)). De hecho, en un estudio, el tratamiento de los ratones sensibilizados con el alérgeno con el anticuerpo anti-NGF evita el desarrollo de hipersensibilidad de las vías respiratorias luego de exposición local a alérgenos (Braun et al., Int. Arch. Allergy Immunol. 118:163-165 (1999)). A pesar de los resultados promisorios obtenidos en los ratones, se reportan efectos adversos para neutralizar anticuerpos anti-NGF en el sistema inmune han surgido de cuestiones serias acerca de la factibilidad para utilizar anticuerpos anti-NGF como un terapéutico en la prevención o el tratamiento de asma u otras enfermedades o trastornos en pacientes humanos. En particular, Torcia et al., Cell 85:345-356 (1996) identifica el NGF como un factor de supervivencia autocrino para la memoria de linfocitos B, y demuestra que la administración in vivo de la neutralización de anticuerpos anti-NGF provoca un agotamiento de las células B de memoria y elimina las respuestas inmunes específicas a antígeno secundarias en los ratones. Garaci et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:14013-14018 (1999) reporta que el NGF es un factor de supervivencia autocrino que rescata los monocitos/macrófagos... [Seguir leyendo]

1. Una cantidad efectiva de un anticuerpo monoclonal NGF anti-humano (antihNGF) capaz de unir el hNGF, e inhibir la unión de hNGF al TrkA humano (hTrkA) in vivo para uso en un método para controlar una afección relacionada con NGF en un paciente humano, en donde el anticuerpo monoclonal anti-hNGF reconoce un epítopo NGF seleccionado del grupo que consiste de: a) un epítopo que comprende la sobreposición de la región de unión p75 y NGF-TrkA, giro ß A-A" (V - 1) y la región de unión TrkA dominante en la lámina C ß; y b) un epítopo que comprende i) residuos K32, K34 y E35 de hNGF; ii) residuos Y79 y T81 de hNGF; iii) residuos H84 y K88 de hNGF; iv) residuo R103 de hNGF; v) residuo E11 de hNGF; vi) residuo Y52 de hNGF; y vii) residuos L112 y S113 de hNGF; y en donde la afección relacionada con NGF es dolor crónico. 2. Uso de una cantidad efectiva de un anticuerpo monoclonal NGF anti-humano (anti-hNGF) para la preparación de un medicamento que se va a administrar a un paciente humano para controlar una afección relacionada con NGF en dicho paciente y, en donde el anticuerpo monoclonal anti-hNGF reconoce un epítopo hNGF que se selecciona del grupo que consiste de: a) un epítopo que comprende el NGF-TrkA sobrepuesto y la región de unión p75 giro ß A-A" (V-1) y la región de unión TrkA dominante en la lámina C ß; y b) un epítopo que comprende i) residuos K32, K34 y E35 de hNGF; ii) residuos Y79 y T81 de hNGF; iii) residuos T-184 y K88 de hNGF; iv) residuo R103 de hNGF; v) residuo E11 de hNGF; vi) residuo Y52 de hNGF; y vii) residuos L112 y S113 de hNGF.; y en donde la afección relacionada con NGF es dolor crónico. 3. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en donde el anticuerpo une al hNGF con una afinidad en el rango nanomolar, en particular en donde la afinidad de unión de dicho anticuerpo a hNGF es aproximadamente 0.10 a aproximadamente 0.80 nM.; en particular en donde la afinidad de unión de dicho anticuerpo a hNGF es aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.75 nM; más particularmente en donde la afinidad de unión de dicho anticuerpo a hNGF es aproximadamente 0.18 a aproximadamente 0.72 nM. 4. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en donde dicho anticuerpo también es capaz de unir al NGF de murino (muNGF). 5. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en donde dicho anticuerpo es un fragmento de anticuerpo de unión a antígeno; en particular en donde dicho fragmento de anticuerpo de unión a antígeno se selecciona del grupo que consiste de los fragmentos Fab, Fab, F(ab)2, Fv, diacuerpos, moléculas de anticuerpo de cadena sencilla, y anticuerpos multiespecíficos formados de fragmentos de anticuerpo; más particularmente en donde dicha molécula de anticuerpo de cadena sencilla es una molécula Fv de cadena sencilla (scFv). 23 E02774103 15-11-2011   6. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en donde dicho anticuerpo es quimérico; en donde dicho anticuerpo es humanizado; en donde dicho anticuerpo es humano; o en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo biespecífico, en particular en donde dicho anticuerpo biespecífico tiene una especificidad anti-IgE. 7. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en donde dicho anticuerpo no tiene efecto adverso significativo en el sistema inmune de dicho paciente, en particular en donde dicho anticuerpo no tiene efecto adverso significativo en la respuesta inmune humoral. 8. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en donde dicho anticuerpo reconoce un epítopo hNGF que comprende los residuos K32, K34, E35, Y79, T81, H84, K88, y R103 de hNGF. 9. El uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicho anticuerpo reconoce un epítopo que comprende los residuos K32, K34, E35, Y79, T81, H84, K88, R103, E11, Y52, L112 y S113 de hNGF. 10. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal NGF anti-humano quimérico, humanizado o humano (antihNGF) como se define en la reivindicación 1 o 2, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. 11. La composición farmacéutica de la reivindicación 10 en donde dicho anticuerpo es un fragmento de anticuerpo de unión a antígeno; en particular en donde dicho fragmento de anticuerpo de unión a antígeno se selecciona del grupo que consiste de los fragmentos Fab, Fab, F(ab)2, Fv, diacuerpos, moléculas de anticuerpo de cadena sencilla, y anticuerpos multiespecíficos formados de los fragmentos de anticuerpo. 12. La composición farmacéutica de la reivindicación 10 en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo biespecífico, en particular en donde dicho anticuerpo biespecífico es capaz de unión específica al IgE humano natural; en particular en donde dicho anticuerpo biespecífico es capaz de unión específica al TNF humano natural o a un receptor TNF humano natural 13. La composición farmacéutica de la reivindicación 10 que comprende adicionalmente otro ingrediente farmacéuticamente activo; en particular en donde dicho otro ingrediente farmacéuticamente activo es adecuado para el tratamiento de una afección inflamatoria; más particularmente en donde dicha afección inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de dolor, asma, esclerosis múltiple, artritis, lupus eritematoso y soriasis; aún más particularmente en donde dicha artritis es artritis reumatoide. 14. Un artículo de fabricación que comprende: un contenedor; una composición farmacéutica de la reivindicación 10; e instrucciones para utilizar la composición de la materia objeto para controlar una afección relacionada con NGF en un paciente humano. 15. El artículo de fabricación de la reivindicación 14 que comprende adicionalmente un segundo ingrediente farmacéuticamente activo; en particular en donde dicho segundo ingrediente farmacéuticamente activo es adecuado para uso en el tratamiento de una afección inflamatoria; más particularmente en donde dicha afección inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de dolor, asma, esclerosis múltiple, artritis, lupus eritematoso y soriasis. 16. El artículo de fabricación de la reivindicación 14 que comprende adicionalmente un segundo contenedor con una composición contenida allí, en donde la composición comprende un segundo anticuerpo que se une a un receptor NGF y bloquea la activación del ligando. 24 E02774103 15-11-2011   E02774103 15-11-2011   26 E02774103 15-11-2011   27 E02774103 15-11-2011   28 E02774103 15-11-2011   29 E02774103 15-11-2011   E02774103 15-11-2011   31 E02774103 15-11-2011   32 E02774103 15-11-2011   33 E02774103 15-11-2011   34 E02774103 15-11-2011   E02774103 15-11-2011   36 E02774103 15-11-2011   37 E02774103 15-11-2011   38 E02774103 15-11-2011   39 E02774103 15-11-2011   E02774103 15-11-2011   41 E02774103 15-11-2011   42 E02774103 15-11-2011   43 E02774103 15-11-2011   44 E02774103 15-11-2011   E02774103 15-11-2011   46 E02774103 15-11-2011   47 E02774103 15-11-2011   48 E02774103 15-11-2011   49 E02774103 15-11-2011   E02774103 15-11-2011   51 E02774103 15-11-2011   52 E02774103 15-11-2011   53 E02774103 15-11-2011