ANTICUERPO ANTAGONISTA CONTRA LA PROTEÍNA TIROSINA QUINASA SAL-S1.

Anticuerpo antagonista contra la proteína tirosina quinasa sal-s1 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN [0001] La presente invención se refiere a anticuerpos agonistas que son capaces de activar el dominio tirosina quinasa del receptor pTK SAL-S1. DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA ANTERIOR [0002] La transducción de señales que regulan el crecimiento y diferenciación celular está regulada en parte por la fosforilación de varias proteínas celulares. Las proteínas tirosina quinasa son enzimas que catalizan este proceso. Además, muchas actúan como receptores de factores de crecimiento. El subgrupo c-kit de receptores de tirosina quinasa catalizan la fosforilación de sustratos exógenos, así como residuos de tirosina en sus propias cadenas de polipéptidos (Ullrich et al., Cell 61:203 [1990]). Los miembros del subgrupo c-kit incluyen FLT/FLK (Kinasa de hígado fetal), FGF (Receptor del Factor de Crecimiento de Fibroblastos) y NGF (Receptor del Factor de Crecimiento Nervioso). [0003] La subfamilia EPH de tirosina quinasa, Eph, Elk, Eck, Eek, Hek, Hek2, Sek, Ehk-1, Ehk-2, Cek-4 to -10, Tyro 1, 4, 5 y 6, parece ser la subfamilia más grande de tirosinas quinasas transmembrana (Hirai et al., Science 238:1717-1720 [1987]; Letwin et al., Oncogene 3:621-678 [1988]; Lhotak et al., Mol. Cell. Biol. 13:7071-7079 [1993]; Lindberg et al., Mol. cell. Biol. 10:6316-6324 [1990]; Bohme et al., Oncogene 8:2857-2862 [1993]; y Wicks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:1611-1615 [1992]; Pasquale et al. Cell Regulation 2:523-534 [1991]; Sajjadi et al., New Biol. 3:769-778 [1991] ; Wicks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:1611-1615 [1992]; Lhotak et al., Mol. Cell. Bio. 11:2496-2502 [1991]; Gilardi-Hebenstreit et al., Oncogene 7:2499-2506 [1992]; Lai et al., Neuron 6:691-704 [1991]; Sajjadi et al., Oncogene 8:1807-1813 [1993]; and Maisonpierre et al., Oncogene 8:3277-3288 [1993]). [0004] WO 93/15201 se refiere a genes de proteína tirosina quinasa presentes en células megacariocíticas y linfocíticas humanas, las proteínas codificadas por estos genes, los anticuerpos específicos para las proteínas codificadas, las secuencias de ácido nucleico ARN que se hibridan a los genes y los métodos de uso para los mismos. [0005] Ashman et al. J. Cell Physiol. 158: 545-554 (1994) describe la localización de epítopos y estudios funcionales con tres anticuerpos monoclonales para el receptor tirosina quinasa c-kit. [0006] Sarup et al., Growth Regul. 1:72-82 describe la caracterización de un anticuerpo monoclonal anti-p185HER2 que estimula la función del receptor e inhibe el crecimiento de células tumorales. [0007] Las pTK adicionales y anticuerpos agonistas a las mismas son necesarias para estudiar adicionalmente el crecimiento y diferenciación de las células, para su uso como agentes terapéuticos y para fines de diagnóstico. DESCRIPCIÓN RESUMIDA DE LA INVENCIÓN [0008] Los genes aislados tal como se describen en la presente invención son referidos, colectivamente, como genes de proteína tirosina quinasa o genes de pTK. Las secuencias de ácidos nucleicos de algunos de estos genes, aislados tal como se describe aquí, muestran una homología significativa con proteínas tirosina quinasas identificadas previamente que contienen dominios extracelulares, que actúan como receptores de factores de crecimiento (por ejemplo, pTKs del subgrupo c-kit). Se ha observado que algunos de los genes de pTK están presentes tanto en células megacariocíticas como células linfocíticas. [0009] En particular, se han identificado catorce genes de pTK. Se identificaron dos genes de pTK, referidos como SAL-S1 y SAL-D4, en células megacariocíticas. SAL-D4 está relacionado con la familia CSK de pTK intracelulares y SAL-S1 está relacionado con la familia de receptores FGF de pTK. Se identificaron cinco genes de pTK, referidos como LpTK, en células linfocíticas y se ha observado que están presentes también en megacariocitos. Se identificó un gen de pTK, referido como HpTK5, en células de hematoma humano. Se hallaron seis genes de pTK, referidos como genes de bpTK, en tejido de cerebro humano. [0010] Los genes de pTK se identificaron en general utilizando dos grupos de cebadores de oligonucleótidos degenerados: un primer grupo que amplifica todos los segmentos de ADN de pTK (SEC ID NOS: 1-2), y un segundo grupo que amplifica secuencias altamente conservadas presentes en el dominio catalítico del subgrupo c-kit de pTKs (SEC ID NOS: 3-4). Los genes de pTK identificados de esta manera se describen a continuación. [0011] SAL-S1 se expresa en varias líneas de células megacariocíticas, pero no en líneas de células eritroides. Se 2   obtuvo la secuencia de nucleótidos de parte de SAL-S1, revelando una secuencia que contenía 160 pares de bases (SEC ID NO: 5). Este fragmento de ADN aislado codificaba una secuencia de aminoácidos (SEC ID NO: 6) que mostraba una homología de secuencia significativa con proteínas tirosina quinasas conocidas de la familia FLT/FLK. La secuencia de aminoácidos deducida de SAL-S1 (SEC ID NO: 32) contiene 1298 residuos. [0012] SAL-D4, también expresado en células megacariocíticas, es un fragmento de ADN que contiene la secuencia de nucleótidos de 147 pares de bases. (SEC ID NO: 7). Este fragmento de ADN aislado codificaba una secuencia de aminoácidos (SEC ID NO: 8) que mostraba una homología de secuencia significativa con proteínas tirosina quinasas conocidas de la familia de pTK intracelulares CSK. [0013] Las LpTKs, incluyendo LpTK 2, LpTK 3, LpTK 4, LpTK 13 y LpTK 25, se expresan en células linfocíticas, así como células megacariocíticas. Se obtuvo la secuencia de nucleótidos (151 pares de bases) del gen de LpTK 3 (SEC ID NO: 11). Las secuencia de nucleótidos de los genes de LpTK 2, LpTK 4, y LpTK 13 contenían 149 pares de bases (SEC ID NO: 9), 137 pares de bases (SEC ID NO: 13), y 211 pares de bases (SEC ID NO: 15) respectivamente. La LpTK 25 tiene una secuencia de nucleótidos de 3120 b.p. (SEC ID NO: 22). Se ha obtenido una secuencia de genes de longitud completa para LpTK 2 (SEC ID NO: 19) que contiene 7607 b.p. La secuenciación adicional de LpTK 4 reveló una secuencia de 404 b.p. (SEC ID NO: 21). [0014] El gen de HpTK5, expresado en células de hematoma humano, presenta una secuencia de nucleótidos de 3969 b.p. (SEC ID NO: 23). [0015] Las secuencias de nucleótidos de las bpTKs, incluyendo bpTK 1, bpTK 2, bpTK 3, bpTK 4, bpTK 5 y bpTK 7, se expresan en tejido de cerebro humano y codifican proteínas que tienen las secuencias de aminoácidos de SEC ID NOS: 25-29 y 34, respectivamente. [0016] De este modo, se puede aislar el ADN de una línea de células megacariocíticas humanas, que se hibrida al ADN que codifica una secuencia de aminoácidos que es altamente conservada en el dominio catalítico de proteínas tirosina quinasas del subgrupo c-kit. [0017] Se describen aquí las proteínas codificadas por los genes de pTK identificadas tal como se describen aquí que muestran una homología de secuencia significativa con los miembros del subgrupo c-kit de pTKs, así como las proteínas codificadas por HpTK5 y las bpTKs. Se describen aquí homólogos o equivalentes de SAL-S1, SAL-D4, LpTK, HpTK5 y bpTK (es decir, proteínas que tienen secuencias de aminoácidos sustancialmente similares, pero no idénticas, a las de SAL-S1, SAL-D4, las LpTKs, HpTK5 y las bpTKs, que muestran actividad tirosina quinasa). Se describen aquí péptidos (fragmentos de SAL-S1, SAL-D4, LpTK, HpTK5 y bpTK) que mantienen la actividad tirosina quinasa, aunque son menos que las secuencias completas de SAL-S1, SAL-D4, LpTK, HpTK5 y bpTK también son posibles; y usos para las secuencias de ácidos nucleicos de SAL-S1, SAL-D4, las LpTK, HpTK y las bpTK y equivalentes de SAL-S1, SAL-D4, LpTK, HpTK y bpTK. [0018] Se describen aquí las secuencias de ácidos nucleicos que se hibridan con ADN o ARN que codifican las proteínas descritas aquí que muestran una homología de secuencia significativa con FLT/FLK, el receptor de FGF o la familia de receptores NGF de proteínas tirosina quinasas contenidas en el subgrupo c-kit. Dichas secuencias de ácido nucleico son útiles como sondas para identificar genes de pTK en otros vertebrados, particularmente mamíferos, y en otros tipos de células. También se pueden utilizar como oligonucleótidos anti-sentido para inhibir la actividad de proteína tirosina quinasa, tanto in vitro como in vivo. [0019] Las tirosina quinasas SAL-S1, SAL-D4, LpTK, HpTK y bpTK se pueden utilizar como proteínas diana conjuntamente con el desarrollo de fármacos y agentes terapéuticos para modular el crecimiento y diferenciación celular y otras funciones metabólicas. Las proteínas SAL-S1, SAL-D4, LpTK, HpTK o bpTK se pueden utilizar como agonistas o antagonistas a otras tirosina quinasas. Las pTKs también pueden jugar un papel decisivo en la modulación de interacciones de adhesión a megacariocitos... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo agonista que se une al dominio extracelular del dominio quinasa de un receptor proteína tirosina quinasa (pTK) SAL-S1 y lo activa. 2. Anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo monoclonal. 3. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo según la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable. 4. Método in vitro para activar el dominio quinasa de un receptor proteína tirosina quinasa (pTK) SAL-S1, comprendiendo el método poner en contacto pTK con un anticuerpo agonista que se une al dominio extracelular del receptor pTK. 5. Anticuerpo agonista según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 o la composición farmacéutica según la reivindicación 3, para utilizar como medicamento. 109     111   112   113   114     116   117   118   119     121   122   123   124     126   127   128   129     131   132   133   134     136   137   138   139     141   142   143   144     146   147   148   149     151   152   153   154     156   157   158   159     161   162   163