ÁCIDO NUCLEICO QUE CODIFICA NS3/4A DE HCV.

La presente invención se refiere a composiciones para aumentar el efecto de vacunas en animales, tales como especies domésticas, deportivas o mascotas, y en seres humanos. Se realiza la divulgación del uso de ribavirina como adyuvante y de composiciones que tienen ribavirina y un antígeno. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El uso de vacunas para prevenir enfermedades en seres humanos, animales de granja, animales deportivos y mascotas domésticas es una práctica común. Sin embargo, con frecuencia el antígeno usado en una vacuna no es suficientemente inmunogénico para elevar el título de anticuerpos a niveles que sean suficientes para proporcionar protección contra una exposición posterior o para mantener el potencial de disponer de esos niveles durante periodos de tiempo prolongados. Además, muchas vacunas son completamente incapaces de inducir inmunidad mediada por células, que es una defensa inmune primaria contra infecciones bacterianas y víricas. Actualmente se está centrando una cantidad considerable de investigación en el desarrollo de vacunas más potentes y de formas de mejorar la inmunogenicidad de preparaciones que contienen antígenos. (Véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 6.056.961, 6.060.068, 6.063.380, y Li y col., Science 288:2219-2222(2000)). Entre estas vacunas débiles son muy conocidas las vacunas de la hepatitis B. Por ejemplo, vacunas recombinantes contra el virus de la hepatitis B tales como Genhevacb (Pasteur Merieux Serums et Vaccines, 58, Avenue Leclerc 69007 Lyon, Francia), Engerixb (Smith, Kline and Symbol French) y Recombivaxhb (Merck, Sharp, and Dhome) son eficaces sólo después de al menos tres inyecciones en los días 0, 30 y 60 ó 180, seguidas de una dosis de refuerzo obligatoria después de un año. (Chedid y col., Patente de Estados Unidos Nº 6.063.380). Además, muchos sujetos que reciben estas vacunas responden de manera deficiente, en caso de hacerlo. Como muchas regiones del mundo son endémicas para la infección por HBV, el poco carácter inmunogénico de las vacunas de HBV existentes se ha convertido en un problema extremadamente grave. Para obtener una respuesta celular y/o humoral más fuerte, es común administrar la vacuna en un material que aumente la respuesta inmune del paciente al antígeno presente en la vacuna. Los adyuvantes usados más comúnmente para protocolos de vacunas son preparaciones de aceite y alumbre. (Chedid y col., Patente de Estados Unidos Nº 6.063.380). Se necesita un mayor repertorio de adyuvantes seguros y eficaces. En terapias antivirales se han usado mucho análogos de nucleósidos debido a su capacidad de reducir la replicación viral (Hosoya y col., J. Inf. Dis. 168:641-646 (1993)). La ribavirina (1-ß-D-ribofuranosil-1,2,4-triazol-3-carboxamida) es un análogo de guanosina sintético que se ha usado para inhibir la replicación de virus de ARN y ADN. (Huffman y col., Antimicrob Agents. Chemother., 3:235(1973; Sidwell y col., Science, 177:705 (1972)). Se ha demostrado que la ribavirina es un inhibidor competitivo de la inositol mono-fosfato (IMP) deshidrogenasa (IMPDH), que convierte el IMP en IMX (que después se convierte en GMP). De Clerqc, Anti viral Agents: characteristic activity spectrum depending on the molecular target with which they interact, Academia press, Inc., New York N.Y., páginas 1-55 (1993). Como resultado del tratamiento a largo plazo con ribavirina se han agotado reservas intracelulares de GTP. Además de la actividad antiviral, los investigadores han observado que algunos análogos de guanosina tienen un efecto sobre el sistema inmune (Patentes de Estados Unidos Nº 6.063.772 y 4.950.647). Se ha demostrado que la ribavirina inhibe las respuestas inmunes humorales funcionales (Peavy y col., J. Immunol., 126:861-864, (1981); Powers y col., Antimicrob. Agents. Chemother. 22: 108-114 (1982)) y la modulación mediada por IgE de la secreción de mastocitos. (Marquardt y col., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 240:145-149 (1987)). Algunos investigadores han indicado que una terapia oral diaria de ribavirina tiene un efecto modulador inmune en seres humanos y ratones (Hultgren y col., J. Gen. Virol., 79:2381-2391 (1998) y Cramp y col., Gastron. Enterol., 118:346-355 (2000)). La comprensión actual de los efectos de la ribavirina sobre el sistema inmune está en sus primeras fases. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La invención es como sigue: 1. Un ácido nucleico purificado o aislado constituido por la SEQ ID NO 16 o el complemento del mismo; 2. Un ácido nucleico purificado o aislado que codifica la secuencia peptídica de SEQ ID NO 17; 2   3. Un ácido nucleico purificado o aislado que comprende la SEQ ID NO 16; 4. Un ácido nucleico purificado o aislado que comprende un ácido nucleico que codifica la secuencia peptídica de SEQ ID NO 17; 5. Un ácido nucleico purificado o aislado que comprende al menos 100, 200, 500 o 1000 nucleótidos consecutivos del ácido nucleico purificado o aislado de uno cualquiera de 1-4; 6. Un vector que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de uno cualquiera de 1-5; 7. Una célula aislada que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de uno cualquiera de 1-5; 8. Una composición inmunogénica que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de uno cualquiera de 1-5; 9. Una composición que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de uno cualquiera de 1-5; 10. Una célula aislada que comprende el vector de 6; 11. Una composición inmunogénica que comprende el vector de 6; 12. Una composición que comprende el vector de 6; 13. La composición inmunogénica de 8 u 11 que comprende además un adyuvante. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIGURA 1 es un gráfico que muestra la respuesta humoral a 10 y 100 µg de proteína 3 no estructural (NS3) del virus de la hepatitis C (HCV) recombinante, determinada por medio de títulos como criterio de valoración, cuando se coadministró una sola dosis de 1 mg de ribavirina. La FIGURA 2 es un gráfico que muestra la respuesta humoral a 20 µg de proteína 3 no estructural (NS3) del virus de la hepatitis C (HCV) recombinante, determinada por medio de títulos como criterio de valoración, cuando se coadministró una sola dosis de 0,1, 1,0 ó 10 mg de ribavirina La FIGURA 3 es un gráfico que muestra los efectos de una sola dosis de 1 mg de ribavirina sobre respuestas proliferativas de ganglios linfáticos específicas de NS3, determinados por respuestas de rellamada in vitro. La FIGURA 4 es un gráfico que muestra el título de anticuerpos en ratones H-2 d contra NS3 en función del tiempo después de la primera inmunización. Los rombos indican el título de anticuerpos en ratones inmunizados con NS3/4ApVAX y los cuadrados indican el título de anticuerpos en ratones inmunizados con NS3-pVaX. La FIGURA 5A es un gráfico que muestra el porcentaje de lisis mediada por CTL específicos de células diana SP2/0 en función de la relación entre efector y diana. Como inmunógeno de control se usó solución salina tamponada con fosfato (PBS). La FIGURA 5B es un gráfico que muestra el porcentaje de lisis mediada por CTL específicos de células diana SP2/0 en función de la relación entre el efector y la diana. Como inmunógeno se usó el plásmido NS3/4A-pVAX. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y OTROS ASPECTOS DE LA DIVULGACIÓN Se ha descubierto que las composiciones que comprenden ribavirina y un antígeno (por ejemplo, una molécula que contiene un epitopo de un patógeno tal como un virus, bacteria, moho, levadura o parásito) aumentan y facilitan la respuesta inmune de un animal al antígeno. Es decir, se descubrió que la ribavirina es un adyuvante eficaz que, para los fines de esta descripción, se refiere a un material que tiene la capacidad de aumentar o facilitar una respuesta inmune a un antígeno particular. La actividad adyuvante de la ribavirina se manifestó por un aumento significativo de la protección mediada por el sistema inmune contra el antígeno, un aumento en el título de anticuerpo inducido contra el antígeno y un aumento en las respuestas de células T proliferativas. En este documento se describen varias composiciones (por ejemplo, vacunas) que comprenden ribavirina y un antígeno o epitopo. Las formulaciones de vacuna que contienen ribavirina, por ejemplo, pueden variar de acuerdo con la cantidad de ribavirina, la forma de ribavirina y el tipo de antígeno. El antígeno puede ser un péptido o un ácido nucleico (por ejemplo, un ARN que codifica un antígeno peptídico o una construcción que expresa un antígeno peptídico cuando se 3   introduce en un sujeto). Las composiciones pueden comprender ribavirina y un antígeno viral de hepatitis (por ejemplo, antígeno de HAV, antígeno de HBV, antígeno de HCV, un ácido nucleico que codifica estas moléculas o cualquier combinación de los mismos). Se desea al menos un antígeno de HCV o un epitopo presente en la SEQ ID NO:... [Seguir leyendo]

1. Un ácido nucleico purificado o aislado constituido por la SEQ ID NO 16 o el complemento del mismo. 2. Un ácido nucleico purificado o aislado que codifica la secuencia peptídica de SEQ ID NO 17. 3. Un ácido nucleico purificado o aislado que comprende la SEQ ID NO 16. 4. Un ácido nucleico purificado o aislado que comprende un ácido nucleico que codifica la secuencia peptídica de SEQ ID NO 17. 5. Un ácido nucleico purificado o aislado que comprende al menos 100, 200, 500 o 1000 nucleótidos consecutivos del ácido nucleico purificado o aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2. 6. Un vector que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5. 7. Una célula aislada que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5. 8. Una composición inmunogénica que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5. 9. Una composición que comprende el ácido nucleico purificado o aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5. 10. Una célula aislada que comprende el vector de la reivindicación 6. 11. Una composición inmunogénica que comprende el vector de la reivindicación 6. 12. Una composición que comprende el vector de la reivindicación 6. 13. La composición inmunogénica de la reivindicación 8 u 11 que comprende además un adyuvante.   96   97   98   99