Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 3

Campo de la Invención

La presente invención se refiere a nuevas variantes de la IL-21, siendo dichas variantes útiles para terapia.

Antecedentes de la Invención

Los péptidos de IL-21 se describieron por primera vez en el documento WO 00/53761 como SEQ ID No: 2. El propéptido es un péptido de 161 restos de aminoácidos. Por conveniencia, la secuencia se repite en la presente solicitud como SEQ ID No: 1. Se creyó inicialmente que el péptido maduro era el péptido que consistía en los aminoácidos nº 33 a 162 del SEQ ID No: 1, sin embargo, más recientemente (documento WO 2004/112703) se ha sugerido que el péptido maduro de hecho son los aminoácidos nº 30 a 162, que se describen como SEQ ID No: 11 con una metionina N-terminal adicional, en la presente solicitud.

La IL-21 es una citoquina. Las citoquinas en general estimulan la proliferación, diferenciación y/o activación de células del linaje hematopoyético o participan en los mecanismos de respuesta inmunitaria o inflamatoria del cuerpo. Las interleuquinas son una familia de citoquinas que median respuestas inmunológicas produciendo diferentes citoquinas, y producen un efecto de inmunidad adquirida contra antígenos. Los linfocitos T maduros pueden ser activados, es decir, por un antígeno u otro estímulo, para producir, por ejemplo, citoquinas, moléculas de señalización bioquímicas, o receptores que después influyen en el destino de la población de los linfocitos T.

Las citoquinas producidas por los linfocitos T se han clasificado como de tipo 1 y tipo 2 (Kelso, A. Immun. Cell Biol. 76: 300-317, 1998). Las citoquinas de tipo 1 incluyen IL-2, IFN-, LT-α, y están implicadas en respuestas inflamatorias, inmunidad vírica, inmunidad parasitaria intracelular y rechazo de aloinjerto. Las citoquinas de tipo 2 incluyen IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e IL-13, y están implicadas en respuestas humorales, respuesta inmunitaria helmíntica y alérgica. Las citoquinas compartidas entre el tipo 1 y 2 incluyen IL-3, GM-CSF y TNF-α. Hay algunas pruebas que sugieren que las poblaciones de linfocitos T que producen tipo 1 y tipo 2 migran preferentemente a diferentes tipos de tejidos inflamados.

Los linfocitos T maduros pueden ser activados, es decir por un antígeno u otro estímulo, para producir, por ejemplo, citoquinas, moléculas de señalización bioquímica, o receptores que influyen además en el destino de la población de linfocitos T.

Los linfocitos B pueden ser activados por receptores en su superficie celular incluyendo el receptor de linfocitos B y otras moléculas accesorias para realizar funciones celulares accesorias, tales como la producción de citoquinas y anticuerpos.

Los linfocitos citolíticos naturales (NK) tienen una célula progenitora común con los linfocitos T y linfocitos B, y tienen una función en la vigilancia inmunitaria. Las células NK, que comprenden hasta 15% de los linfocitos de la sangre, no expresan receptores de antígenos, y por lo tanto no usan el reconocimiento del MHC como requisito para la unión a una célula diana. Las células NK están implicadas en el reconocimiento y la muerte de determinadas células tumorales y células infectadas por virus. Se cree que in vivo las células NK requieren activación, sin embargo, in vitro, las células NK han mostrado que matan algunos tipos de células tumorales por activación dependiente del ligando KIR.

A pesar de la eficacia mostrada por la IL-21 en el tratamiento de diferentes enfermedades, sigue existiendo la necesidad de variantes de la IL-21 con mejores propiedades o propiedades alternativas, tales como actividad, selectividad, estabilidad y tiempo en la circulación o semivida biológica, para satisfacer las necesidades médicas.

Resumen de la Invención

Los autores de la presente invención han encontrado sorprendentemente que la actividad de la IL-21 se mantiene en gran medida o incluso mejora cuando se suprimen y/o sustituyen los aminoácidos en la región del 66 al 98. En el presente contexto, la numeración de los aminoácidos es con respecto al péptido maduro de 133 aminoácidos (aminoácidos nº 33 a 162 del propéptido, SEQ ID No: 1). Esta secuencia se da como SEQ ID No: 11, que incluye una metionina N-terminal adicional dando un péptido de 134 aminoácidos. El SEQ ID No: 2 son los aminoácidos nº 30 a 162 del propéptido, el SEQ ID No: 1 sin una metionina N-terminal adicional dando un péptido de 133 aminoácidos. Por consiguiente, en una realización, la invención se refiere a un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 7 o SEQ ID NO: 8 o SEQ ID NO: 9 o SEQ ID NO: 10.

En una realización, la invención se refiere a un péptido que comprende los SEQ ID No. anteriores con una Met N-terminal adicional.

En una realización, la invención se refiere al uso del péptido de la presente invención para fabricar un medicamento para el tratamiento del cáncer.

En una realización, la invención se refiere a la construcción de ácido nucleico que codifica un péptido de la presente invención; a vectores que comprenden dichas construcciones; y a células huésped que comprenden dichos vectores.

Figuras

Figura 1. Análisis de Baf3/hIL-21 R/Stat-Luc de variantes de IL-21. Los líquidos sobrenadantes de células HEK293-FS transfectadas con las construcciones de IL-21 indicadas se analizaron en el ensayo indicador de BAf3-hIL-21 R/Stat-Luc. El contenido de proteínas se calculó por ELISA.

■ IL-21 natural; ▲ ---- mutante de eliminación de IL-21 [A83 - R86] (SEQ ID No: 3); y Δ variante de IL-21 en la que se ha sustituido la secuencia [K77 - T92] (SEQ ID No: 7).

Figura 2. Curvas de dosis-respuesta para hIL-WT y ChimIL-21/4.

Se analizaron las proteínas purificadas en un ensayo indicador usando las células Baf3/hIL-21 Ra. Las curvas representan una suma de experimentos independientes (n = 4) realizados todos por triplicado. La actividad se expresa como porcentaje de la respuesta máxima. Se presentan los valores de CE50  D.T.M obtenidos. Chim-IL21 es la IL-21 sust. [K77 - T92].

Definiciones

En el presente contexto “un”, “una”, se pretende que indique uno o más.

En el presente contexto, el término “péptido” se pretende que indique dos o más aminoácidos que están unidos por un enlace peptídico. Dichos aminoácidos pueden ser codificantes o no codificantes, y el término también incluye derivados de péptidos, en los que uno o más aminoácidos en el péptido se ha sustituido químicamente, por ejemplo, con PEG o un grupo lipófilo. Los términos “péptido” y “polipéptido” se usan de forma intercambiable y se pretende que indiquen lo mismo.

En el presente contexto, la expresión “sal farmacéuticamente aceptable” se pretende que indique sales que no son dañinas para el paciente. Dichas sales incluyen sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, sales de metales farmacéuticamente aceptables, sales de amonio y de amonio alquilado. Las sales de adición de ácido incluyen sales de ácidos inorgánicos así como de ácidos orgánicos. Los ejemplos representativos de ácidos inorgánicos adecuados incluyen ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, fosfórico, sulfúrico, nítrico y similares. Los ejemplos representativos de ácidos orgánicos adecuados incluyen ácidos fórmico, acético, tricloroacético, trifluoroacético, propiónico, benzoico, cinámico, cítrico, fumárico, glicólico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, oxálico, pícrico, pirúvico, salicílico, succínico, metanosulfónico, etanosulfónico, tartárico, ascórbico, pamoico, bismetilen-salicílico, etanodisulfónico, glucónico, citracónico, aspártico, esteárico, palmítico, EDTA, glicólico, p-aminobenzoico, glutámico, bencenosulfónico, ptoluenosulfónico y similares. Otros ejemplos de sales de adición de ácido orgánico o inorgánico farmacéuticamente aceptable incluyen las sales farmacéuticamente aceptables listadas en J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, que se incorpora en el presente documento por referencia. Los ejemplos de sales de metales incluyen sales de litio, sodio, potasio, magnesio y similares. Los ejemplos de sales de amonio y amonio alquilado incluyen sales de amonio, metilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, hidroxietilamonio, dietilamonio, butilamonio, tetrametilamonio y similares.... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 3.

2. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 4.

3. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 5.

5 4. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 6.

5. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 7.

6. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 8.

7. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 9.

8. Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID No: 10.

10 9. El péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, con una Met N-terminal adicional.

10. El uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

11. Un uso según la reivindicación 10, en el que el cáncer se selecciona de trastornos neoplásicos metastásicos y no metastásicos, tales como melanoma maligno, cánceres de piel de no 15 melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer del sistema endocrino, cáncer de ovario, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de mama, cáncer esofágico, cáncer del tracto gastrointestinal superior, cáncer colorrectal, cáncer de hígado y conductos biliares, cáncer pancreático, cáncer prostático, cáncer de vejiga, cáncer testicular, cáncer cervicouterino, cáncer endometrial, sarcomas de huesos y tejido blando, cáncer del

20 sistema nervioso central, linfoma, leucemia y cáncer de origen primario desconocido.

12. Un uso según la reivindicación 11, en el que el cáncer es melanoma maligno.

13. Un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 para usar en el tratamiento del cáncer.

14. Una construcción de ácido nucleico que codifica un péptido según cualquiera de las 25 reivindicaciones 1-9.

15. Un vector que comprende la construcción de ácido nucleico según la reivindicación 14.

16. Un huésped que comprende la construcción de ácido nucleico de la reivindicación 14, o el vector de la reivindicación 15.