USO DE CITOCINAS DE TIPO IL-6 PARA LA MADURACIÓN DE OVOCITOS.

Uso de citocinas de tipo IL-6 para la maduración de ovocitos ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 1. Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a procedimientos de maduración in vitro de ovocitos de mamíferos. 2. Descripción de la técnica relacionada a. Ovario 15 [0002] El ovario de los mamíferos es responsable de la producción de ovocitos maduros a partir de células germinativas y de la producción de hormonas que permiten el desarrollo de los caracteres sexuales secundarios y una satisfactoria conclusión del embarazo. El ovario se divide aproximadamente en una corteza exterior y una médula vascular interior. El estroma del ovario abarca tanto la corteza, que contiene los folículos ováricos en diversas etapas de desarrollo, como las regiones medulares. [0003] Un folículo maduro es una unidad altamente compleja con determinados tipos celulares definidos, y está formado por varias capas de células somáticas que rodean una cavidad llena de fluido, el "antro", en el que reside un único ovocito bañado por fluido folicular. El folículo proporciona los nutrientes y las señales reguladoras requeridas para el crecimiento y la maduración del ovocito. [0004] Los ovocitos presentes en el ovario adulto se desarrollan a partir de un número definido de células germinativas primigenias (primordial germ cells, PGC) que migran desde zonas extragonadales a la cresta gonadal para formar el ovario primitivo durante el desarrollo fetal. Una vez establecidas en el ovario en desarrollo, las PGC en proliferación comienzan a diferenciarse en ovogonios, que son las células precursoras que dan lugar a todos los 30 ovocitos del ovario. La población de ovogonios experimenta un número predeterminado y específico de cada especie de ciclos mitóticos hasta que las células entran en la profase de la meiosis y se transforman en ovocitos. La meiosis se detiene en la etapa diplotena de la profase y permanecen en esa etapa hasta que comienza la foliculogénesis en la pubertad. Los ovocitos primarios detenidos en la meiosis están contenidos en un folículo primigenio. b. Folículos primigenios   [0005] Los folículos primigenios son las unidades fundamentales de desarrollo del ovario de los mamíferos. El número de folículos primigenios se determina durante las etapas tempranas de la vida y la mayoría de ellos permanece en un estado de reposo. La reserva de folículos primigenios no se renueva y se utiliza durante todo el periodo de vida reproductora del adulto. Antes y a lo largo de la vida reproductora de la hembra, varios de estos folículos primigenios abandonan el estado de reposo y comienzan a crecer (incorporación inicial). Los folículos se desarrollan hasta la etapa antral, en la que la mayoría experimentan una atresia; sin embargo, algunos de estos folículos son rescatados (incorporación cíclica) para alcanzar la etapa preovulatoria. El final de la vida reproductora normal se produce típicamente cuando se agota el conjunto de folículos primigenios en reposo. c. Foliculogénesis [0006] La foliculogénesis es el proceso responsable del desarrollo de los folículos reguladores y de la 50 liberación de uno o más ovocitos maduros en un intervalo fijo a lo largo de la vida reproductora de una hembra. La foliculogénesis se reanuda después de una larga fase quiescente e implica transformaciones secuenciales subcelulares y moleculares por parte de diversos componentes del folículo. Durante la vida postnatal, los folículos ováricos continúan creciendo, madurando y bien ovulando o remitiendo. Los folículos son incorporados continuamente hasta que se agota la reserva original. [0007] Los folículos primigenios se activan para transformarse en folículos primarios. Aunque los ovocitos procedentes de los folículos primigenios y primarios no tienen un tamaño significativamente diferente, se producen cambios importantes durante la etapa de folículo primario. La corona radiata desarrolla conexiones comunicantes con el ovocito, y comienza a formarse la zona pelúcida entre los dos tipos celulares. La zona pelúcida no rodeará 60 completamente al ovocito hasta que el folículo alcance la etapa preantral tardía. Los folículos secundarios comienzan a aparecer cuando las células foliculares de los folículos primarios experimentan una división mitótica intensa. Un folículo secundario contiene al menos dos capas de células de la granulosa, con las células de teca 2 identificables fuera de la membrana basal, y el folículo contiene una fina red capilar. Los folículos terciarios o antrales están caracterizados por la presencia de una cavidad conocida como antro, que está llena de fluido folicular. Los primeros folículos antrales tienen una amplia red de conexiones comunicantes que permite la transferencia de nutrientes y señales reguladoras entre el ovocito y las células de la granulosa. Los folículos antrales se desarrollan hasta que alcanzan el tamaño preovulatorio. Dentro del folículo antral, las células del cumulus rodean al ovocito. In vivo, la expansión del complejo cumulus-ovocito (CCO) es inducida tras la aparición de la LH al final de la ovulación para preparar el ovocito para su fecundación. d. Maduración del ovocito [0008] La maduración del ovocito es un fenómeno complejo durante el cual el ovocito progresa desde la etapa diplotena hasta la metafase II (maduración nuclear) en respuesta a la aparición de la LH ovulatoria. Una vez alcanzada la etapa de metafase II, el ovocito permanece detenido hasta que tiene lugar la fecundación y el ovocito completa la meiosis y forma el pronúcleo. La maduración del ovocito también implica transformaciones a nivel citoplasmático para preparar la célula para sustentar la fecundación y el desarrollo embrionario temprano (maduración citoplasmática). Las etapas finales de maduración del ovocito son cruciales para la adquisición de las propiedades funcionales necesarias para el desarrollo adicional. e. Fecundación in vitro [0009] La fecundación in vitro (FIV) de ovocitos humanos es una técnica médica ampliamente practicada que se usa para superar diversas formas de infertilidad femenina y masculina, abriendo así una vasta nueva frontera de investigación y tratamiento para las parejas infértiles. A pesar del éxito de la FIV, todavía existe una significativa necesidad de procedimientos mejorados de tratamiento de la infertilidad, porque aproximadamente una de cada cinco parejas son incapaces de conseguir un embarazo a término usando los actuales tratamientos de FIV. [0010] Cuando se realizó por primera vez la FIV, se extrajo un ovocito maduro no fecundado del ovario justo antes de la ovulación. El ovocito maduro fue fecundado en una placa de laboratorio (in vitro) y el embrión resultante se transfirió de nuevo al útero de la mujer. Sin embargo, se descubrió que si había más ovocitos disponibles para la fecundación, habría más embriones disponibles para transferirlos al útero, y esto aumentó significativamente la tasa de embarazos. Por lo tanto, la actual práctica clínica implica inyectar a las pacientes hormonas con objeto de inducir la maduración de aproximadamente veinte ovocitos. [0011] Los tratamientos de FIV estándar incluyen una larga fase de estimulación hormonal de la paciente 35 femenina, por ejemplo, de 30 días, que comienza administrando un agonista o un antagonista de la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH) para suprimir las propias hormonas foliculoestimulante (FSH) y luteinizante (LH) de la paciente. Esto se continúa con inyecciones de gonadotrofinas exógenas, por ejemplo, FSH y/o LH, con objeto de asegurar el desarrollo de múltiples folículos preovulatorios. Justo antes de la ovulación, los múltiples ovocitos madurados in vivo se extraen de los ovarios. Los ovocitos maduros aislados son subsiguientemente 40 fecundados in vitro y cultivados, típicamente durante entre tres y seis días, antes de transferir los embriones desarrollados de nuevo al útero en la etapa de 4-8 células.   [0012] Se han realizado continuos esfuerzos para optimizar y simplificar los procedimientos de FIV con objeto de mejorar las actuales tasas de embarazo de aproximadamente el 25% al 35%. Debido a las bajas tasas de embarazo, es habitual transferir entre dos y cinco embriones en un intento de aumentar las tasas de embarazo. [0013] La administración de inyecciones hormonales para inducir la maduración simultánea de muchos ovocitos se conoce como hiperestimulación ovárica controlada (HOC). La ventaja de la HOC es la disponibilidad de muchos más ovocitos maduros para su fecundación, lo que aumenta la probabilidad de embarazo. Sin embargo, la mujer que experimenta la HOC debe ser estrechamente controlada mediante exámenes diarios con ultrasonidos de los ovarios y análisis de hormonas en sangre, porque la excesiva estimulación ovárica puede causar un síndrome de hiperestimulación ovárica (SHO),... [Seguir leyendo]

1. Uso de una citocina de tipo IL-6 para la maduración in vitro de ovocitos en un medio fisiológicamente aceptable que comprende la citocina de tipo IL-6. 2. Uso de la reivindicación 1 en el que el ovocito está en la etapa de un antral temprano o de folículo antral. 3. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 se une a un receptor seleccionado del grupo constituido por heterodímeros LIFR-gp130, heterodímeros OSMR-gp130 y homodímeros gp130. 4. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 no se une a un receptor seleccionado del grupo formado por IL-11R y CNTFR. 5. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 es LIF. 6. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 es CT-1. 7. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 es IL-6. 8. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 es sIL-6R. 9. Uso de la reivindicación 1 en el que la citocina de tipo IL-6 es IL-6/sIL-6R. 25 10. Uso de la reivindicación 1 en el que el medio comprende adicionalmente FSH, hCG, o una combinación de las mismas.   11. Uso de la reivindicación 1 en el que el medio no comprende FSH, hCG, o una combinación de las mismas.   16   17   18   19     21   22   23   24     26   27   28   29     31   32   33