SECUENCIAS DE PROTEÍNA DEL NÚCLEO DE VHC.

Un kit para la detección de VHC que comprende A) una fase sólida revestida con proteína del núcleo de VHC modificada,

proteína que no es del núcleo de VHC y al menos un anticuerpo monoclonal anti-núcleo de VHC, y B) un anticuerpo monoclonal anti-núcleo de VHC marcado, en el que la proteína del núcleo modificada de la parte A) se ha modificado por sustitución de uno o más aminoácidos o deleción de uno o más aminoácidos en al menos dos de las siguientes regiones de la proteína del núcleo de VHC: i) restos 1-10; ii) restos 30-37; iii) restos 43-50; y iv) restos 77-130, retirándose de esta manera los sitios de unión de los anticuerpos monoclonales anti-núcleo de la parte A) y parte B), y en el que no están alterados los restos de aminoácidos 11-29, 38-42 y 51-76 de la proteína del núcleo de VHC.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E02257656.

Solicitante: ORTHO-CLINICAL DIAGNOSTICS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 100 INDIGO CREEK DRIVE ROCHESTER, NY 14626-5101 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: BAHL,CHANDER.

Fecha de Publicación: 11 de Octubre de 2011.

Fecha Solicitud PCT: 5 de Noviembre de 2002.

Clasificación PCT:

C07K14/18 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Togaviridae, p. ej. Flavivirus, virus de la peste, virus de la fiebre amarilla, virus de la hepatitis C, virus de la encefalitis japonesa.
G01N33/569 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

Clasificación antigua:

C07K14/18 C07K 14/00 […] › Togaviridae, p. ej. Flavivirus, virus de la peste, virus de la fiebre amarilla, virus de la hepatitis C, virus de la encefalitis japonesa.
G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

PDF original: ES-2365800_T3.pdf

Fragmento de la descripción:

Un numero estimado de 170 millones de personas en todo el mundo se han infectado con el virus de LA hepatitis C (VHC). En los próximos años, el número de muertes en los Estados Unidos por cáncer y enfermedad hepática producida por VHC puede superar a las muertes producidas por el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). La transmisión del VHC parece requerir un contacto sangre - sangre. Al llevar una sola cadena de acido ribonucleico (ARN), el VHC contiene un solo gen, que codifica una poliproteína que posteriormente se escinde en al menos 10 proteínas funcionales. Claramente, la capacidad de ensayar en el torrente sanguíneo el VHC tiene una gran importancia. Seria útil un ensayo sensible que pudiera detectar la infección en una fase temprana. Los ensayos de detección del VHC típicamente detectan anticuerpos contra el virus VHC. Estos anticuerpos se detectan en inmunoensayos usando proteínas y péptidos recombinantes que contienen secuencias de las proteínas de VHC. La mayoría de los ensayos anti-VHC comerciales usan proteínas de las siguientes regiones: proteína del núcleo, y secuencias de proteínas NS3, NS4 y NS5. Los anticuerpos anti-núcleo de VHC son uno de los anticuerpos anti-VHC mas extendidos detectados en los individuos infectados con VHC de forma crónica. La proteína del núcleo de VHC contiene múltiples epítopos. Usando péptidos sintéticos de la región del núcleo de VHC, se ha demostrado que la mayoría de estos epítopos están en el extremo amino terminal de esta proteína. Por ejemplo, usando péptidos solapantes, cada uno de aproximadamente 15 aminoácidos de longitud, se creó un ELISA para explorar anticuerpos anti-VHC en individuos infectados con VHC de forma crónica. La Tabla 1 presentada a continuación muestra las secuencias peptídicas. Como se muestra en la Tabla 2 presentada más adelante, los individuos infectados con VHC tienen anticuerpos contra dos o más de esos péptidos del núcleo. De esta manera, se ha mostrado que no se necesita el péptido del núcleo completo para detectar anticuerpos anti-núcleo. Tabla 1 Péptido ID número Secuencia de aminoácidos Localización de AA en poliproteína de VHC MSTNPKPQKKNKRNT 1-15 SEC ID Nº: 1 1 KNKRNTNRRPQDVKF 10-24 SEC ID Nº: 2 2 QDVKFPGGGQIVGGV 20-34 SEC ID Nº: 3 3 QIVGGVYLLPRRGPR 29-43 SEC ID Nº: 4 4 RRGPRLGVRATRKTS 39-53 SEC ID Nº: 5 ATRKTSERSQPRGRR 48-62 SEC ID Nº: 6 6 PRGRRQPIPKARRPE 58-72 SEC ID Nº: 7 7 KARRPEGRTWAQPGY 67-81 SEC ID Nº: 8 8 AQPGYPWPLYGNEGC 77-91 SEC ID Nº: 9 9 YGNEGCGWAGWLLSP 86-100 SEC ID Nº: 10 WLLSPRGSRPSWGPT 96-110 SEC ID Nº: 11 11 SWGPTDPRRRSRLNG 106-120 SEC ID Nº: 12 12 SRLNGKVIDTLTCGF 116-130 SEC ID Nº: 3 13 LTCGFADLMGYIPLV 126-140 SEC ID Nº: 14 14 YIPLVGAPLGGAARA 136-150 SEC ID Nº: 15 GAARALAHGVRVLED 146-160 SEC ID Nº: 16 16 RVLEDGVNYATGNLP 156-170 SEC ID Nº: 17 17 TGNLPGCSFSIFLLA 166-180 SEC ID Nº: 8 2 Tabla 2 Péptido 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 0,042 0,041 0,034 0,023 0,028 0,051 0,088 0,002 0,034 0,020 0,103 0,076 0,069 0,059 0,075 0,02 0,00 0,04 Neg 1 4 4 0,052 0,038 0,030 0,023 0,030 0,038 0,085 0,002 0,035 0,033 0,111 0,103 0,081 0,051 0,081 0,01 0,06 0,04 Neg 7 0,047 0,039 0,031 0,021 0,033 0,038 0,071 0,002 0,034 0,025 0,102 0,094 0,079 0,087 0,075 0,01 0,00 0,05 Neg 4 3 0,020 0,010 0,013 0,008 0,009 0,009 0,025 - 0,018 0,012 0,039 0,034 0,039 0,034 0,023 0,13 0,04 0,01 Neg 0,001 4 3 4 ES 2 365 800 T3 0,016 0,010 0,012 0,005 0,010 0,011 0,026 0,000 0,019 0,013 0,034 0,030 0,030 0,033 0,021 0,11 0,03 0,01 Neg 9 9 0,017 0,009 0,012 0,009 0,009 0,013 0,037 0,001 0,016 0,013 0,042 0,037 0,032 0,053 0,027 0,12 0,03 0,01 Neg 6 6 3 0,021 0,008 0,010 0,006 0,017 0,011 0,041 0,000 0,019 0,019 0,041 0,003 0,034 0,039 0,020 0,10 0,00 0,01 Neg 4 4 6 0,028 0,012 0,021 0,012 0,013 0,030 0,049 0,025 0,015 0,062 0,248 0,218 0,106 1,443 0,425 2,50 2,50 0,25 9 6 0,088 0,247 0,042 0,021 0,027 0,022 0,055 0,002 0,159 0,166 0,262 0,114 0,647 0,229 0,917 2,50 2,50 0,41 11 3 0,080 0,035 0,039 0,020 0,031 0,018 0,045 - 0,032 0,061 0,072 0,110 0,057 0,577 0,067 2,50 0,66 0,04 0,003 1 4 (continuación) Péptido 18 21 27 1,64 3 0,02 1 2,50 0,03 2 2,50 0,02 2 1 0,88 7 0,11 1 2,50 2,50 2,50 0,27 8 2 2,50 2,50 2,50 2,50 2,50 0,91 2 3 0,641 2,500 2,262 0,089 2,500 0,031 4 0,100 0,482 2,500 2,500 0,183 0,036 0,052 0,032 0,516 1,652 0,044 0,116 6 0,032 0,029 2,259 1,349 0,075 0,079 7 0,576 0,045 0,080 0,043 0,993 0,049 8 0,037 0,028 0,378 0,039 0,078 0,062 9 0,022 0,015 0,018 0,034 0,035 0,010 - 0,001 0,011 0,022 0,033 0,028 0,005 11 0,040 0,035 0,064 0,026 0,190 0,026 12 0,006 0,009 0,013 0,012 0,023 0,005 13 0,010 0,014 0,024 0,018 0,025 0,006 14 0,009 0,009 0,017 0,013 0,022 0,009 0,025 0,017 0,024 0,028 0,028 0,020 16 0,036 0,019 0,135 0,287 0,042 0,007 17 0,039 0,059 0,035 0,008 0,043 0,020 36 37 39 0,05 9 2,50 0,16 0,12 9 2,50 2,50 2,50 2,50 2,50 0,090 0,219 2,500 0,131 0,130 0,124 0,060 0,090 1,217 0,093 0,169 2,351 0,148 0,223 2,500 0,090 0,147 0,397 0,037 0,040 0,056 0,003 0,018 0,015 0,050 0,065 1,319 0,018 0,016 0,017 0,060 0,051 0,050 0,077 0,051 0,056 0,062 0,025 0,041 0,129 0,080 0,200 0,079 0,110 0,190 ES 2 365 800 T3 (continuación) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Péptido 2,500 0,098 0,066 0,060 0,755 0,093 0,024 0,000 0,059 0,013 0,028 0,017 0,032 0,068 0,101 2,50 2,50 0,05 8 0,032 0,005 0,014 0,006 0,010 0,012 0,031 0,031 0,023 0,150 0,018 0,036 0,023 0,011 - 2,50 0,04 0,02 42 0,001 3 2 0,033 0,065 0,103 0,069 0,075 0,053 0,051 0,001 0,055 0,025 0,022 0,015 0,023 0,029 0,035 0,36 0,15 8 0,61 43 8 2 ES 2 365 800 T3 0,143 0,028 0,041 0,028 0,047 0,061 0,076 0,511 0,070 0,060 0,086 0,301 0,108 0,066 - 2,50 2,24 0,04 44 0,002 2 0,069 0,038 0,038 0,055 0,022 0,136 0,039 0,174 0,713 0,055 0,129 1,722 1,896 0,029 - 2,50 2,50 1,00 0,003 2 0,027 0,016 0,015 0,013 0,026 0,019 0,037 0,022 0,021 0,021 0,038 0,035 0,031 0,027 - 2,50 0,03 0,01 46 0,002 1 6 0,034 0,012 0,014 0,007 0,026 0,014 0,032 0,449 0,750 0,593 0,102 2,006 0,331 0,017 - 2,50 2,50 2,48 47 0,004 4 0,040 0,018 0,011 0,013 0,025 0,014 0,095 0,364 0,356 0,038 0,049 0,070 0,027 0,029 - 2,50 0,20 0,42 48 0,001 1 7 0,033 0,019 0,014 0,013 0,030 0,016 0,085 0,044 0,045 0,047 0,050 0,246 0,039 0,025 - 2,50 0,48 0,01 49 0,005 3 9 (continuación) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Péptido 0,035 0,014 0,012 0,007 0,017 0,044 0,055 0,568 1,233 0,277 0,154 2,500 0,882 0,024 - 2,50 2,50 0,66 0,001 8 0,948 1,116 1,619 0,026 0,267 0,112 0,019 0,026 0,042 0,012 0,007 0,009 0,019 0,008 0,044 2,50 2,50 2,50 52 0,428 2,500 0,780 0,086 2,500 1,566 0,025 0,001 0,050 0,014 0,020 0,011 0,022 0,019 0,028 2,50 2,50 0,82 53 3 ES 2 365 800 T3 2,500 2,500 2,500 2,500 2,500 2,500 0,020 0,032 0,053 0,021 0,012 0,012 0,020 0,017 0,038 2,50 2,50 1,57 54 7 0,026 0,015 0,015 0,012 0,026 0,014 0,030 0,047 0,018 0,023 0,071 0,042 0,019 0,017 - 2,50 0,08 0,01 0,002 3 7 2,283 2,500 2,500 2,500 2,500 0,810 0,037 0,073 0,067 0,018 0,019 0,021 0,025 0,159 0,059 2,50 2,50 2,50 58 0,023 2,500 0,019 0,180 0,038 0,070 0,039 0,027 0,017 0,012 0,015 0,018 0,015 0,023 0,049 2,50 1,80 0,01 59 0,153 0,026 0,019 0,022 0,039 0,097 0,063 0,255 2,500 0,102 1,266 0,666 2,500 0,034 - 2,50 2,50 0,05 0,003 3 0,039 0,013 0,012 0,010 0,017 0,010 0,048 1,178 0,025 0,031 0,041 0,060 0,028 0,017 - 2,50 0,05 0,01 62 0,002 3 8 (continuación) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Péptido 0,026 0,007 0,007 0,006 0,010 0,057 0,020 0,012 0,017 0,013 1,225 0,028 0,012 0,017 - 0,02 0,01 0,00 63 0,004 7 6 9 0,040 0,032 0,056 0,052 0,062 0,020 0,040 0,023 0,051 0,018 0,023 0,023 0,019 0,020 0,035 0,02 0,04 1,44 6 1 1,030 2,500 0,508 0,144 2,500 2,500 0,013 0,009 0,060 0,007 0,009 0,009 0,014 0,025 0,018 2,50 2,50 2,06 66 ES 2 365 800 T3 2,500 2,500 1,338 0,406 2,500 0,135 0,031 0,003 0,091 0,021 0,027 0,028 0,032 0,042 0,077 2,50 2,50 2,50 67 1,105 0,415 0,358 1,025 2,500 0,263 0,028 0,006 0,039 0,023 0,025 0,022 0,024 0,034 0,037 2,50 2,50 0 2,50 68 0,342 2,500 0,200 0,049 0,075 1,730 0,030 0,009 0,119 0,015 0,025 0,022 0,027 0,056 0,050 2,50 0,74 5 2,50 0,049 0,629 0,935 0,596 1,119 0,081 0,040 0,009 0,052 0,028 0,036 0,031 0,038 0,043 0,059 2,50 0,03 1 2,39 73 2 1,435 1,342 0,107 0,287 0,094 0,080 0,049 0,012 0,031 0,013 0,030 0,017 0,021 0,058 0,050 2,50 2,50 0,03 7 0,269 2,500 0,298 0,051 2,500 0,040 0,057 0,006 0,084 0,013 0,022 0,014 0,021 0,022 0,030 2,50 2,50 2,50 78 (continuación) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Péptido 0,674 0,318 0,972 0,048 2,118 0,040 0,021 0,022 0,024 0,015 0,010 0,008 0,014 0,066 0,031 2,50 2,50 0,28 0,025 0,190 0,145 0,106 0,099 0,019 0,028 0,050 0,018 0,009 0,010 0,009 0,013 0,009 0,026 2,50 0,07 0,01 84 2 0,039 2,500 0,689 0,033 0,301 0,195 0,021 0,005 0,033 0,011 0,017 0,010 0,013 0,014 0,018 2,50 0,30 0,01 6 9 ES 2 365 800 T3 Un informe reciente indica que la proteína del núcleo de VHC puede detectarse en individuos infectados con VHC antes de la aparición de anticuerpos anti-VHC. (S. Lee... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

A) una fase sólida revestida con proteína del núcleo de VHC modificada, proteína que no es del núcleo de VHC y al menos un anticuerpo monoclonal anti-núcleo de VHC, y B) un anticuerpo monoclonal anti-núcleo de VHC marcado, en el que la proteína del núcleo modificada de la parte A) se ha modificado por sustitución de uno o más aminoácidos o deleción de uno o más aminoácidos en al menos dos de las siguientes regiones de la proteína del núcleo de VHC: i) restos 1-10; ii) restos 30-37; iii) restos 43-50; y iv) restos 77-130, retirándose de esta manera los sitios de unión de los anticuerpos monoclonales anti-núcleo de la parte A) y parte B), y en el que no están alterados los restos de aminoácidos 11-29, 38-42 y 51-76 de la proteína del núcleo de VHC. 2. El kit de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la proteína que no es del núcleo de VHC se selecciona entre c200-3 y NS5. 3. El kit de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo monoclonal anti-VHC marcado está marcado con una enzima, un fluoróforo o un marcador radiactivo. 4. El kit de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la fase sólida es un pocillo de microtitulación, perla de poliestireno, perla magnética o membrana. 5. Una proteína del núcleo de VHC modificada, en la que la proteína del núcleo se ha modificado por sustitución de uno o más aminoácidos o deleción de uno o más aminoácidos en al menos dos de las siguientes regiones de la proteína del núcleo de VHC: i) restos 1-10; ii) restos 30-37; iii) restos 43-50; y iv) restos 77-130, ES 2 365 800 T3 y en el que los restos de aminoácidos 11-29, 38-42 y 51-76 de la proteína del núcleo de VHC no están alterados. 6. La proteína del núcleo de VHC modificada de la reivindicación 5, en la que se han delecionado los aminoácidos MSTNPKPQ (restos 1-8) y los aminoácidos VGG (restos 31-33) de la proteína del núcleo de VHC. 19

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