PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR BICICLOPROLINATOS QUIRALES COMO INTERMEDIOS PARA LA PREPARACIÓN DE INHIBIDORES DE PROTEASA PEPTIDOMIMÉTICOS.

Un procedimiento para preparar un compuesto de bicicloprolinato quiral de fórmula 28 **(Ver fórmula)**que comprende las etapas de:

(a) escindir y ciclar un compuesto de fórmula 24 en la que: **(Ver fórmula)**es cicloalquilo opcionalmente sustituido o arilcicloalquilo condensado opcionalmente sustituido; R11 es -CO2R13; R12 es un aducto de derivado de glicinimida imínica; R13 es un grupo protector de ácido o grupo alifático opcionalmente sustituido; en condiciones de escisión y ciclación para formar un compuesto de fórmula 25 **(Ver fórmula)**en la que: R14 es -CONR15R15, -CN; 323 **(Ver fórmula)**o -CO2R16; R15 es un grupo alifático opcionalmente sustituido; R16 es un grupo protector de ácido, arilo opcionalmente sustituido o grupo alifático opcionalmente sustituido; y (b) proteger el nitrógeno del resto lactama en el compuesto de fórmula 25 con un grupo protector de amida para formar un compuesto de fórmula 26 **(Ver fórmula)**en la que: pO es un grupo protector de amida; R14 es como se ha descrito aquí; y (c) reducir el compuesto de fórmula 26 en condiciones reductoras para formar un compuesto de fórmula 27 **(Ver fórmula)**en la que: 324 pO y R14 son como se han descrito aquí; y (d) desproteger el compuesto de fórmula 27 en condiciones de desprotección para formar un compuesto de fórmula 28 **(Ver fórmula)**en la que: R14 es como se ha descrito en el presente documento

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La presente invención se refiere a un procedimiento para preparar bicicloprolinatos quirales como intermedios para la preparación de inhibidores peptidomiméticos de proteasa. Los compuestos peptidomiméticos pueden prepararse por procedimientos sintéticos estereoselectivos descritos en el presente documento. Además, se describen los compuestos peptidomiméticos o composiciones de los mismos como inhibidores de proteasa, particularmente como inhibidores de serina proteasa y más particularmente como inhibidores de la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C (“VHC”). Los compuestos peptidomiméticos, tales como inhibidores de proteasa NS3 de VHC, son particularmente útiles para interrumpir el ciclo celular del virus de la hepatitis C y en el tratamiento o prevención de una infección por VHC o afecciones fisiológicas asociadas con la misma. Además, se describen procedimientos de terapia de combinación para inhibir la replicación de VHC en células o para el tratamiento o prevención de una infección de VHC en pacientes usando los compuestos peptidomiméticos o composiciones farmacéuticas o kits y envases farmacéuticos para los mismos. De acuerdo con la presente invención se incluyen como composiciones farmacéuticas las que comprenden un inhibidor de serina proteasa de VHC en combinación con un interferón que tiene actividad anti-VHC; un inhibidor de serina proteasa de VHC en combinación con un compuesto, distinto de interferón, que tiene actividad anti-VHC; o un inhibidor de serina proteasa de VHC en combinación con un interferón que tiene actividad anti-VHC y un compuesto, distinto de interferón, que tiene actividad anti-VHC. Antecedentes de la Invención

La infección por el VHC es un problema médico humano importante y se reconoce ahora el agente causante de la mayoría de los casos de hepatitis no A, no B.

Se cree que el VHC infecta de forma crónica al 3% de la población mundial [A. Alberti y col., “Natural History of Hepatitis C”, J. Hepatology, 31, (Suppl. 1), 17-24 (1999)]. En los Estados Unidos solamente la tasa de infección es del 1,8% o 3,9 millones de personas [MJ. Alter, “Hepatitis C Virus Infection in the United States”, J. Hepatology, 31, (Suppl. 1), 88-91 (1999)]. De todos los pacientes infectados más del 70% desarrollan una infección crónica que se cree que es una causa principal de cirrosis y carcinoma hepatocelular. [D. Lavanchy, “Global Surveillance and Control of Hepatitis C”, J. Viral Hepatitis, 6, 35-47 (1999)]

La replicación del VHC abarca la codificación genómica de una poliproteína de 30103033 aminoácidos [Q. L. Choo, y col., “Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus”, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 88, 2451-2455 (1991); N. Kato y col., “Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis", Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 87, 9524-9528 (1990); A. Takamizawa y col.,

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“Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers”, J. Virol., 65, 1105-1113 (1991)]. Se supone que las proteínas del VHC no estructurales (NS) proporcionan la maquinaria catalítica esencial para la replicación viral. Las proteínas NS derivan por escisión proteolítica de la poliproteína [R. Bartenschlager y col., “Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions”, J. Virol., 67, 3835-3844 (1993); A. Grakoui y col. “Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites”, J. Virol., 67, 2832-2843 (1993); A. Grakoui y col., Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products", J. Virol., 67, 1385-1395 (1993); L. Tomei y col., “NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein”, J. Virol., 67, 4017-4026 (1993)]. De hecho, se ha demostrado que los primeros 181 aminoácidos de NS3 (restos 1027-1207 de la poliproteína viral) contienen el dominio serina proteasa de NS3 que procesa los cuatro sitios cadena abajo de la poliproteína de VHC [C. Lin y col., “Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics”, J. Virol., 68, 8147-8157 (1994)].

La proteína NS 3 del VHC (NS3) contiene una actividad de serina proteasa que ayuda en el procesamiento de la mayoría de las enzimas virales y se considera por lo tanto esencial para la replicación e infectividad viral. La esencialidad de la proteasa NS3 se infirió a partir del hecho de que las mutaciones en la proteasa NS3 del virus de la fiebre amarilla disminuyen la infectividad viral [T.J. Chambers y col., “Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein”, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 87, 8898-8902 (1990)]. Más recientemente, se demostró que las mutaciones en el sitio activo de la proteasa NS3 del VHC podían suprimir completamente la infección del VHC en un modelo de chimpancé

[C.M. Rice y col. “Hepatitis C virus-encoded enzymatic activities and conserved RNA elements in the 3'-nontranslated region are essential for virus replication in vivo”. J. Virol., 74(4) 2046-51 (2000)]. La serina proteasa NS3 de VHC también se considera esencial para la replicación viral puesto que ella y su cofactor asociado, NS4A, ayudan en el procesamiento de todas las enzimas virales. Este procesamiento parece ser análogo al que lleva a cabo la aspartil proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana (“VIH”). Además, el uso demostrado de los inhibidores de la proteasa de VIH como potentes agentes antivirales en el hombre demuestra que la interrupción de la etapa de procesamiento de una proteína proteasa en el ciclo vital viral da como resultado agentes terapéuticamente activos. En consecuencia, la enzima proteasa es un diana atractiva para el descubrimiento de fármacos.

Se han descrito varios inhibidores de proteasa de VHC potenciales. Las Publicaciones

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de PCT Número WO 00/09558, WO 00/09543, WO 99/64442, WO 99107733, WO 99107734, WO 99/50230, WO98/46630, WO 98/17679 y WO 97/43310, la Patente de Estados Unidos Nº: 5.990.276, M. Llinás-Brunet y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 8, 1713-1718 (1998), W. Han y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 711-713 (2000), R. Dunsdon y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 1571-1579 (2000), M. Llinás-Brunet y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 2267-2270 (2000), y S. LaPlante y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 2271-2274 (2000) describen cada una inhibidores potenciales de la proteasa NS3 del VHC. Desafortunadamente, no existen inhibidores de serina proteasa disponibles actualmente como agentes anti-VHC.

De hecho, no existen terapias anti-VHC excepto interferón-α, combinación de interferónα/ribavirina y más recientemente interferón-α pegilado. Las tasas de respuesta prolongada para las terapias de interferón α e interferón-α/ribavirina sin embargo tienden a ser bajas (<50%) y los efectos secundarios mostrados por las terapias tienden a ser significativos y graves [M.A. Walker, “Hepatitis C Virus: an Overview of Current Approaches and Progress”, “DDT, 4, 518529 (1999); D. Moradpour y col., “Current and Evolving Therapies for Hepatitis C”, Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 11, 1199-1202 (1999); H.L.A. Janssen y col., “Suicide Associated with Alfa-Interferón Therapy for Chronic Viral Hepatitis”, J. Hepatol., 21, 241-243 (1994); y P.F. Renault y col., “Side effects of alpha interferón”, Seminars in Liver Disease 9, 273-277, (1989)]. Además, las terapias con interferón sólo inducen remisión a largo plazo en solamente una fracción (∼25%) de los casos. [O. Weiland, “Interferón Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”, FEMS Microbiol. Rev., 14, 279-288 (1994)]. Los problemas anteriores con las terapias de interferón-α han conducido incluso al desarrollo y estudio clínico de compuestos de interferón-α derivatizados pegilados como agentes terapéuticos anti-VHC mejorados.

A la vista de la situación actual con respecto a los agentes terapéuticos anti-VHC, está claro que existe la necesidad de terapias más eficaces y mejor toleradas.

Además, la síntesis de compuestos peptidomiméticos complejos se ha visto...

1. Un procedimiento para preparar un compuesto de bicicloprolinato quiral de fórmula 28

**(Ver fórmula)**

que comprende las etapas de:

(a) escindir y ciclar un compuesto de fórmula 24

en la que:

**(Ver fórmula)**

10 es cicloalquilo opcionalmente sustituido o arilcicloalquilo condensado opcionalmente sustituido; R11 es -CO2R13; R12 es un aducto de derivado de glicinimida imínica;

R13

es un grupo protector de ácido o grupo alifático opcionalmente sustituido; en 15 condiciones de escisión y ciclación para formar un compuesto de fórmula 25

**(Ver fórmula)**

en la que: R14 es -CONR15R15, -CN;

323

**(Ver fórmula)**

o -CO2R16;

R15 es un grupo alifático opcionalmente sustituido; R16

es un grupo protector de ácido, arilo opcionalmente sustituido o grupo alifático opcionalmente sustituido; y

(b) proteger el nitrógeno del resto lactama en el compuesto de fórmula 25 con un grupo protector de amida para formar un compuesto de fórmula 26

**(Ver fórmula)**

en la que: pO es un grupo protector de amida; R14 es como se ha descrito aquí; y

(c) reducir el compuesto de fórmula 26 en condiciones reductoras para formar un compuesto de fórmula 27

**(Ver fórmula)**

15 en la que:

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pO y R14 son como se han descrito aquí; y

(d) desproteger el compuesto de fórmula 27 en condiciones de desprotección para formar un compuesto de fórmula 28

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

en el que: R16

es un grupo protector de ácido, arilo opcionalmente sustituido o grupo alifático opcionalmente sustituido;

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**(Ver fórmula)**

325 R17 es arilo opcionalmente sustituido, grupo alifático opcionalmente sustituido,

aromáticos o no aromáticos, incluyendo arilo, heteroarilo, hidroxi, alcoxi, cicliloxi, ariloxi, heteroariloxi, acilo o su análogo tioxo, ciclilcarbonilo o su análogo tioxo, aroílo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, aciloxi, ciclilcarboniloxi, aroiloxi, heteroaroiloxi, halo, nitro, ciano, carboxi (ácido), -C(O)-NHOH, -C(O)-CH2OH, -C(O)CH2SH, -C(O)-NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilsulfonilo, ciclilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, ciclilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, alquiltio, cicliltio, ariltio, heteroariltio, ciclilo, arildiazo, heteroarildiazo, tiol, Y1Y2N-, Y1Y2NC(O)-, Y1Y2NC(O)O, Y1Y2NC(O)NY3-o Y1Y2NSO2-, en los que Y1, Y2 e Y3 son independientemente hidrógeno, alquilo, arilo o heteroarilo, o cuando el sustituyente es Y1Y2N-, entonces uno de Y1 e Y2 puede ser acilo, ciclilcarbonilo, aroílo, heteroaroílo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo o heteroariloxicarbonilo, como se define en el presente documento, y el otro de Y1 e Y2 es como se ha definido previamente, o para cuando el sustituyente es Y1Y2NC(O)-, Y1Y2NC(O)O-, Y1Y2NC(O)NY3-o Y1Y2NSO2-, Y1 e Y2 también pueden tomarse junto con el átomo de N a través del cual están unidos Y1 e Y2 para formar un azaheterociclilo o azaheterociclenilo de 4 a 7 miembros, o cuando el sistema de anillos está saturado o parcialmente saturado, los sustituyentes de grupo de anillos incluyen adicionalmente metileno (H2C=), oxo (O=) y tioxo (S=); y sustituyentes de grupo alifático se refiere a arilo, heteroarilo, hidroxi, alcoxi, cicliloxi, ariloxi, heteroariloxi, acilo o su análogo tioxo, ciclilcarbonilo o su análogo tioxo, aroílo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, aciloxi, ciclilcarboniloxi, aroiloxi, heteroaroiloxi, halo, nitro, ciano, carboxi (ácido), -C(O)-NHOH, -C(O)-CH2OH, -C(O)

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CH2SH, -C(O)-NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, 5 ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilsulfonilo, ciclilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, ciclilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, alquiltio, cicliltio, ariltio, heteroariltio, ciclilo, arildiazo, heteroarildiazo, tiol, metileno (H2C=), oxo (O=), tioxo (S=),Y1Y2N-, Y1Y2NC(O)-, Y1Y2NC(O)O-, Y1Y2NC(O)NY3-, Y1Y2NSO2-o Y3SO2NY1-, Y1 e Y2 son independientemente hidrógeno, alquilo, arilo o heteroarilo, e Y3 10 es alquilo, cicloalquilo arilo o heteroarilo, o para cuando el sustituyente es Y1Y2N-, entonces uno de Y1 e Y2 puede ser acilo, ciclilcarbonilo, aroílo, heteroaroílo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo o heteroariloxicarbonilo, como se define en el presente documento y el otro de Y1 e Y2 es como se ha definido previamente, o para cuando el sustituyente es Y1Y2NC(O)-, Y1Y2NC(O)O-,

15 Y1Y2NC(O)NY3-o Y1Y2NSO2-, Y1 e Y2 también pueden tomarse junto con el átomo de N a través del cual están unidos Y1 e Y2 para formar un azaheterociclilo o azaheterociclenilo de 4 a 7 miembros.

3. El procedimiento de la reivindicación 2 que comprende adicionalmente la etapa en la 20 que el compuesto de fórmula 24 se prepara realizando una adición de Michael con un

**(Ver fórmula)**

en el que:

25 es cicloalquenilo opcionalmente sustituido o arilcicloalquenilo condensado opcionalmente sustituido; en la que:

el compuesto de fórmula 29 puede prepararse por esterificación de un compuesto de fórmula 29a

327

**(Ver fórmula)**

en la que: R11a es -CHO, -COR15, -C≡N o -CONR15R15 .

5 4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que el procedimiento se realiza a una temperatura comprendida entre 0ºC y -78ºC.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que el procedimiento se realiza a -60ºC.

10 6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el procedimiento se cataliza con un catalizador de transferencia de fase quiral.

7. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el procedimiento se cataliza con un catalizador de transferencia de fase no quiral.

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8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el grupo protector es BOC.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que la glicinimida imínica es éster terc20 butílico de (N-difenilmetileno)-glicina.

10. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que el compuesto de fórmula 29 es éster metílico de 1-carboxi-1-ciclopenteno.