PODOFILOTOXINAS EN CALIDAD DE AGENTES ANTIPROLIFERATIVOS.

Una podofilotoxina caracterizada porque se selecciona del grupo que comprende

Los lignanos, tales como podofilotoxina y sus metabolitos/precursores, son parte de la ruta de los fenilpropanoides y están ampliamente distribuidos a través del reino vegetal. Se sabe que algunos de ellos, en particular la propia podofilotoxina, tienen propiedades anticancerosas, antifúngicas y/o antimicro-bianas. La podofilotoxina se extrajo en primer lugar de podofilo (Podophyllum peltatum) y de especies de 5 Linum, tales como Linum album, Linum flavum y Linum nodiflorum, como una resina y fue usada por los médicos en las zonas del sur de los EE. UU. de A. a finales del siglo 19 para el tratamiento de verrugas genitales, estando asociadas las últimas con algunas partes de cáncer a través de su etiología por el papilomavirus humano (HPV). La podofilotoxina ha alcanzado un particular interés como la molécula pa-rental de fármacos quimioterapéuticos tales como etopósido, tenipósido y etopofos, que son inhibidores 10 de topoisomerasa II. En la actualidad, la demanda de podofilotoxina supera de lejos el suministro global, que se ha hecho insuficiente debido al crecimiento lento y la sobreexplotación de las plantas silvestres. Para compensar el suministro limitado de podofilotoxina se han llevado a cabo intentos de cultivar células de Podophyllum peltatum y Linus album que, en alguna extensión, han sido satisfactorios. Los derivados semisintéticos, etopósido y tenipósido, son importantes fármacos anticancerosos ampliamente usados, 15 pero tienen varias limitaciones, tales como escasa solubilidad en agua, desactivación metabólica y el desarrollo de resistencia al fármaco. Para vencer estas limitaciones, se han sintetizado en muchos labora-torios derivados de podofilotoxina (Yin et ál., acts pharm. Sinica 1993, 28,758-761, Wang et ál., acta chem. Sinica 1992, 50, 698-701, Chang et ál., J. med. chem. 1994, 37446-442, Pelter et ál., J. nat. prod. 1994, 57, 1598-1602). Sin embargo, ninguno de estos ha dado como resultado una mejora sustancial ni 20 en términos de eficacia ni de prevención de efectos secundarios.

El etopósido es un fármaco anticanceroso muy eficaz ampliamente usado contra un gran espec-tro de tumores incluyendo cánceres pediátricos tales como linfomas linfáticos agudos, rabdomiosarcomas y neuroblastomas, así como en la mayoría de los cánceres comunes del adulto. También se usa en regí-menes de acondicionamiento para el trasplante de médula ósea. Sin embargo, el uso terapéutico de 25 etopósido está limitado por su toxicidad que implica principalmente mielosupresión.

Uno de los principales retos para una quimioterapia satisfactoria en el cáncer en general y la leucemia de alto riesgo en particular es vencer la resistencia a múltiples fármacos. La mayoría de los pacientes responde inicialmente al tratamiento con combinaciones de diversos agentes quimioterapéuti-cos. Sin embargo, la poliquimioterapia puede inducir clones celulares resistentes a múltiples fármacos 30 (MDR) que continúan proliferando en presencia de agentes citotóxicos (Dalton WS. Mechanism of drug resistance in hematologic malignancies Semin Hematol. 1997; 34:3-8). La reducción de la quimiosensibili-dad en tales clones celulares requeriría la administración de agentes citostáticos en cantidades que su-peran la dosis máxima tolerada in vivo. Uno de los mecanismos de resistencia mejor caracterizado en leucemias y carcinomas es la extrusión del fármaco mediada por p-glicoproteína, el producto del gen de 35 resistencia a múltiples fármacos 1 (MDR-1), que se ha observado que está asociado con resultados po-bres (Hunault M, Zhou D, Delmer A et ál. Multidrug resistance gene expression in acute myeloid leukemia: major prognosis significance for in vivo drug resistance to induction treatment. Ann Hematol. 1997; 74:65-71; Marie JP, Zhou DC, Gurbuxani S, Legrand 0, Zittoun R. MDR1/P-glycoprotein in haematological neo-plasms. Fur J Cancer. 1996; 32A:1034-1038.). 40

Se ha desarrollado una variedad de estrategias para evitar o sortear la resistencia a fármacos desde la introducción de la poliquimioterapia. Los esfuerzos para vencer la resistencia a fármacos esta-blecida en pacientes se dirigen a (i) planificación, es decir, terapia prolongada a dosis bajas tal como antifolatos en leucemia reincidente o administración de dosis altas a corto plazo, p. ej. antifolatos con rescate con folato subsiguiente en el osteosarcoma, (ii) terapia de combinación con sensibilizadores quí-45 micos tales como inhibidores de MDR-1 en el caso de resistencia mediada por MDR y (iii) combinación de quimioterapia con sensibilizadores no químicos tales como radioterapia, hipertermia u oxígeno hiperbárico (Dalton WS. Mechanisms of drug resistance in hematologic malignancies. Semin Hematol. 1997; 34:3-8; Joel SP, Slevin ML. Schedule-dependent topoisomerase II-inhibiting drugs. Cancer Chemother Pharma-col. 1994; 34 Supl: S84-S88; Ishikawa T, Kuo MT, Furuta K, Suzuki M. The human multidrug resistance-50 associated protein (MRP) gene family: from biological function to drug molecular design. Clin Chem Lab Med. 2000; 38:893-897).

Solo se han realizado unos pocos intentos de modificar directamente el agente citostático a fin de encontrar análogos que evadan activamente mecanismos de resistencia a fármacos tales como análo-go de doxorrubicina desaminada (Solary E, Ling YH, Pérez-Soler R, Priebe W, Pommier Y. Hydroxyrubi-55 cin, a deaminated derivative of doxorubicin, inhibits mammalian DNA topoisomerase II and partially cir-cumvents multidrug resistance. Int J Cancer. 1994; 58:85-94.) y beta-aminoderivados de etopósido (Zhang YL, Guo X, Cheng YC, Lee KH. Antitumor agents. 148. Synthesis and biological evaluation of novel 4

betaamino derivatives of etoposide with better pharmacological profiles. J Med Chem. 1994; 37:446-452; Zhang YL, Shen YC, Wang ZQ et ál. Antitumor agents, 130, Novel 4 beta-arylamino derivatives of 3',4'-didemethoxy-3',4'-dioxo-4-deoxypodophyllotoxin as potent inhibitors of human DNA topoisomerase II. J Nat Prod. 1992; 55:1100-1111.). Así, posibles soluciones a fallos relacionados con la MDR incluyen el diseño racional de fármacos que no estén afectados por mecanismos de MDR y exhiban toxicidad sisté-5 mica reducida y potencia antitumoral incrementada.

La resistencia contra etopósido se produce a distintos niveles celulares, que implican la regula-ción a la baja de la enzima diana topoisomerasa II, la regulación a la baja de mecanismos proapoptóticos o la regulación al alza de mecanismos antiapoptóticos tales como bcl-2, y el metabolismo y/o la extrusión incrementados del fármaco procedente de la célula mediados por sistemas de transporte. La inducción de 10 tales sistemas de transporte conduce frecuentemente a resistencia cruzada contra otros agentes citostáti-cos, según se observa para resistencia a múltiples fármacos mediada por MDR-1, MRP o LRP (Gottes-man MM. How cancer cells evade chemotherapy: sixteenth Richard and Hinda Rosenthal Foundation Award Lecture. Cancer Res. 1993; 53:747-754; Borst P, Evers R, Kool M, Wijnholds J. A family of drug transporters: the multidrug resistance-associated proteins. J Natl Cancer Inst. 2000; 92:1295-1302; Borst 15 P, Evers R, Kool M, Wijnholds J. The multidrug resistance protein family. Biochim Biophys Acta. 1999; 1461:347-357). Un mecanismo principal de la resistencia a fármacos, que se documenta que se presenta en enfermedades malignas hematológicas, es la sobreexpresión del producto génico de MDR-1, P-glicoproteína. Por lo tanto, los intentos de vencer la resistencia a fármacos mediada por sistemas de transporte se enfocaron así muy principalmente a la modulación de la expresión de MDR-1 (Liu C, Qu-20 reshi IA, Ding X, et ál. Modulation of multidrug resistance gene (mdr-1) with antisense oligodeoxynucleo-tides. Clin Sci (Colch). 1996; 91:93-98.) o la coadministración de inhibidores de MDR-1 tales como ciclos-porina (Sonneveld P, Durie BG, Lokhorst HM et ál. Modulation of multidrug-resistant multiple myeloma by cyclosporin. The Leukaemia Group of the EORTC and the HOVON. Lancet. 1992; 340:255-259.), verapa-mil (Joly P, Lallemand A, Oum'Hamed Z, Trentesaux C, Idoine 0, Desplaces A. Effects of verapamil and 25 S9788 on MDR-1 mRNA expression studied by in situ hybridization. Anticancer Res. 1996; 16:3609-3614.) o valspodar (Tai HL. Technology evaluation: Valspodar, Novartis AG. Curr Opin Mol Ther. 2000; 2:459-467.), todos los cuales revelaban una eficacia limitada in vitro e in vivo. Estas proteínas de transporte de membrana extruyen una gama sorprendentemente amplia de sustratos con estructuras totalmente dife-rentes, posiblemente debido al hecho de que los metabolitos comunes, tales como glucurónido, glutationa 30 o sulfato, más que los fármacos diferentes, son reconocidos específicamente...

1. Una podofilotoxina caracterizada porque se selecciona del grupo que comprende

2. Un método para preparar una podofilotoxina de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque a) un compuesto que se representa mediante la fórmula V 5

siendo A

se hace reaccionar con un haloformiato W-(C=X)-(Y)-(CH2)n-Z, en el que X, Y son O, n=1 y Z es

10

y siendo W Cl, F, Br o I,

o b) caracterizado porque un compuesto que se representa mediante la fórmula V se hace reaccionar con fosgeno o cloroformiato de triclorometilo, para dar un producto intermedio de cloroformiato de 4'-fenol,

haciéndose reaccionar a continuación dicho producto intermedio de cloroformiato de 4'-fenol con un alco-hol de la fórmula ZYH, para dar el carbonato correspondiente, Y=O, y definiéndose Z como bajo a).

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto que se 5 representa mediante la fórmula V se hace reaccionar con un compuesto seleccionado del grupo que com-prende cloroformiato de solcetal y cloroformiato de PEG.

4. Un método para preparar una podofilotoxina de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el producto resultante de cualquiera de las reivindicaciones 2-3 se hidroliza.

5. Composición farmacéutica que comprende a) una podofilotoxina de acuerdo con la reivindicación 1 o una podofilotoxina preparada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-4, y b) un vehí-culo farmacéuticamente aceptable.

6. Una podofilotoxina de acuerdo con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5 para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares.

7. Una podofilotoxina o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, carac-15 terizada porque el trastorno proliferativo celular es en un niño, un adolescente o un adulto.