Compuesto peptídico que comprende al menos la siguiente secuencia de aminoácidos:

X2-G-W-S-S-X1-S-X3 (SEQ ID Nº 10) en la que: X1 es C o Abu; X2 es W -S o W -Abu; o L -NaI2 -S;X3 es R -S, R -Abu o K-(iPr)-S; caracterizándose dicho compuesto porque la secuencia (SEQ ID Nº 10) se selecciona entre el grupo formado por las siguientes secuencias: W-S-G-W-S-S-Abu-S-R-S (SEQ ID Nº 4)W-S-G-W-S-S-C-S-R-Abu (SEQ ID Nº 5) W-S-G-W-S-S-C-S-K-(Ipr)-S (SEQ ID Nº 6)W-Abu-G-W-S-S-C-S-R-S (SEQ ID Nº 7)L-Nal2-S-G-W-S-S-C-S-R-S (SEQ ID Nº 8)

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a nuevos compuestos peptídicos de estabilidad mejorada cuya secuencia deriva de uno de los dominios de consenso conservados de la SCO-espondina, llamada “repetición de tromboespondina de tipo 1 o TSR”, así como a las composiciones farmacéuticas que comprenden a título de principio activo al menos uno de estos compuestos peptídicos novedosos.

Estado de la técnica

Las modulaciones de adhesión de las células entre sí o entre las células y el sustrato, así como los fenómenos de atracción / repulsión, son unos mecanismos importantes para la migración de las células, y especialmente, durante las etapas de crecimiento y de guiado de los axones durante el desarrollo del SNC (Tessier-Lavigne y Goodman, 1996: Varela-Echavarria y Guthrie, 1997). La fasciculación de las neuritas es una etapa importante del desarrollo, ya que interviene en el guiado correcto de los axones hasta su diana, y en su modulación hace intervenir varias moléculas implicadas en los fenómenos de interacción célula-célula o de adhesión celular como las moléculas de adhesión celular de los nervios (N-CAMs), las N-caderinas, las semaforinas o las moléculas de matrices extracelulares como la larninina, la tenascina, los colágenos, la familia de las tromboespondinas, la fibronectina, la vitronectina o los proteoglicanos. Estas diferentes moléculas pueden actuar como inductores o como inhibidores, lo más habitual mediante una unión ligando / receptor.

La glicoproteína SCO-espondina es una proteína específica del sistema nervioso central (SNC) de todos los vertebrados. Se sintetiza de forma natural en el órgano subconsural y forma parte de la fibra de Reissner presente en el canal central de la médula espinal. La SCO-espondina forma parte de la superfamilia de las tromboespondinas (véase

S. Gobron y col., Journal of Cell Science, vol. 109, p. 1053 - 1061 (1996) y J.C Adams y col., Developmental Dynamics, vol. 218, p. 280 - 29 (2000)). Las tromboespondinas se producen en numerosas células sanas. Comprenden tres cadenas de polipéptidos unidos mediante dos puentes disulfuro.

La SCO-espondina posee unas homologías con los miembros de esta superfamilia de las tromboespondinas cuyos miembros también se expresan en el SNC: las tromboespondinas 1 y 2, algunas semaforinas, las mindinas o la Fespondina, como ejemplos (S. Gobron y col., Glia, vol 32, p. 177-191 (2000)). La secuencia de todas estas moléculas comprende unos motivos proteicos de consenso denominados repeticiones de la tromboespondina de tipo 1 (TSR).

La SCO-espondina comprende aproximadamente 4500 aminoácidos (4560 según S. Gobron y col., Glia, vol 32, p. 177-191 (2000)), y su estructura muestra una disposición única de varios dominios conservados que incluyen veintiséis motivos TSR, nueve dominios de receptores de tipo A de lipoproteínas de baja densidad (LDL-R), dos dominios de factores de crecimiento de la epidermis (EGF), y unos dominios N-terminal y C-terminal del factor de von Willebrand (vWF) ricos en cisteína, siendo todos unos sitios potenciales para interacciones proteína-proteína (S. Gobron y col., Glia, vol 32, p. 177-191 (2000)). La estructura de la glicoproteína SCO-espondina ha sido descrita, por ejemplo, por A. Meiniel (Microscopie Research and Technique. vol 52, p. 484-495 (2001)).

Las tromboespondinas son unos compuestos de las matrices extracelulares que están implicados en un gran número de procesos fisiológicos y que presentan, de forma general, unas propiedades adhesivas o antiadhesivas in vitro, sugiriendo su papel en el comportamiento de las células in vivo. En efecto, se sospecha que diferentes partes de la molécula interaccionan con otras moléculas de las matrices extracelulares así como con diferentes receptores celulares modulando de este modo los contactos célula-célula (J. C. Adams y col., Molecular Biology Intelligence Unit- ed. R.G. Landes, Company - Springer Verlag, p. 1-188 (1995)). La unión directa de la trombospondina -1- a células diferentes de varios tejidos tales como las células hematopoyéticas, las células neuronales, las células epiteliales, igualmente ha sido demostrada, así como las modificaciones de su expresión en diferentes patologías, en particular en cánceres, y en los procesos de cicatrización (Adams y col., 1995, citado anteriormente, para revisión). Además, diferentes tipos de neuronas cultivadas in vitro en presencia de tromboespondina 1 mostraron unas extensiones neuríticas mayores, este fenómeno puede estar relacionado con la presencia de una parte de la molécula que comprende unos motivos proteicos especialmente denominados “repeticiones de la tromboespondina de tipo 1" o TSR (K. O'Shea y col. Neuron, vol. 7 p. 231-237 (1991)):

De hecho, la tromboespondina contiene, entre otros, tres de estos motivos TSR. La función de cada uno de estos motivos ha sido bien estudiada (para una revisión, consultar: H. Chen y col. Matrix Biology, vol. 19 p. 597-614 (2000)) y la cristalización de estos motivos TSR ha proporcionado unos conocimientos suplementarios (K. Tan, The Journal of Cell Biology, vol. 159 (2), 373-3.82 (2002)). Por ejemplo, se ha demostrado que los péptidos que proceden de los tres motivos TSR se unen a los compuestos glicoconjugados sulfatados incluyendo heparina o el sulfátido (patente US 5.357.041) y han resultado ser útiles en las composiciones farmacéuticas para unir los compuestos glicoconjugados.

Los motivos TSR son regiones proteicas de aproximadamente 55 residuos, basados en el alineación de aminoácidos conservados de cisteína, triptófano y arginina.

Estos motivos se aislaron en primer lugar en la tromboespondina 1 que es una molécula que interviene en la coagulación, posteriormente se han descrito en otras muchas moléculas con funciones biológicas diversas entre las que se incluyen la unión celular, la movilidad, la proliferación, la agregación celular, la modulación de proteasas o la inhibición de la angiogénesis (Adams y col., 1995, para revisión).

Así, estos motivos se han observado en:

 la F-espondina, molécula secretada durante el desarrollo embrionario por las células de la capa basal del tubo neural, o "floor plate" (A. Klar y col., Cell, vol. 69, p. 95-110 1992), y que se ha implicado en los fenómenos de adhesión celular y de crecimiento neurítico por medio de diferentes regiones de la proteína (Y. Feinstein y A. Klar, The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, vol. 36 p. 975-980 2004, D. Schubert, A. Klar y col., Journal of Neurochemistry, vol. 96, p. 444-453 2006, para revisión);

 las semaforinas F y G, miembros de una familia de proteínas secretadas en los medios extracelulares y de membrana, implicadas en los fenómenos de guiado de los axones, pero cuya función exacta aún es bien conocida (A. Varela-Echavarria y S. Guthrie, Gene & Development, vol. 11 p. 545-557 1997, para revisión).

Estos motivos proteicos se han identificado igualmente en otras moléculas expresadas fuera del SNC, tales como la properdina, que es una proteína de unión del sistema del complemento, y que contiene seis TSR (D. Goundis y

K. Reid, Nature, vol. 335 p. 82-85 1988).

Estos motivos TRS se han encontrado en diferentes organismos.

Por ejemplo, en la proteína CS, proteína expresada por el “plasmodium”, vector esporozoíto de la malaria (K. Robson y col., Nature, vol. 335 p. 79-82 1988), se ha demostrado que la presencia de este motivo TSR tiene un papel primordial en la etapa de unión del esporozoíto a la célula hospedadora (Tewari R. y col., The Journal of Biological Chemistry, vol. 277, p.47613-47618, 2002).

Igualmente, en una molécula que interviene en el crecimiento axonal, en el nematodo C. elegans, denominada Une-5 (E. Hedgecock y col., Neuron, vol. 2, p. 61-85 (1990)), y en la que la mutación de su gen origina unos defectos en el guiado de los axones en C. elegans (C. Leung-Hagesteijn y col., Cell, vol. 71, p. 289-299 1992).

Además, se ha demostrado que la tromboespondina es especialmente abundante en los haces de fibras en desarrollo y en las regiones de crecimiento de los axones, lo que sugiere por tanto un papel en el establecimiento de un entorno favorable que permita el crecimiento de los axones (K. S. O'Shea y V. M. Dixit, The Journal of Cell Biology, vol. 107 p. 2737-2748 (1988)).

En la tromboespondina, de forma general, se ha demostrado que los motivos... [Seguir leyendo]

R E I V I N D I C A C I O N E S

1. Compuesto peptídico que comprende al menos la siguiente secuencia de aminoácidos:

X2-G-W-S-S-X1-S-X3 (SEQ ID Nº 10)

en la que: X1 es C o Abu; X2 es W – S o W – Abu o L – NaI2 – S; X3 es R – S, R – Abu o K-(iPr)-S;

caracterizándose dicho compuesto porque la secuencia (SEQ ID Nº 10) se selecciona entre el grupo formado por las siguientes secuencias:

W-S-G-W-S-S-Abu-S-R-S (SEQ ID Nº 4) W-S-G-W-S-S-C-S-R-Abu (SEQ ID Nº 5) W-S-G-W-S-S-C-S-K-(Ipr)-S (SEQ ID Nº 6) W-Abu-G-W-S-S-C-S-R-S (SEQ ID Nº 7) L-Nal2-S-G-W-S-S-C-S-R-S (SEQ ID Nº 8)

2. Compuesto peptídico de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la secuencia (SEQ ID Nº 4) bajo la forma NH2-W-S-G-W-S-S-Abu-S-R-S-NH2

3. Composición farmacéutica que comprende como principio activo al menos un compuesto peptídico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2.

4. Uso extracorpóreo de compuestos peptídicos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la regeneración de las células del sistema nervioso.

5. Uso de compuestos peptídicos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.

6. Uso de compuestos peptídicos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la preparación de fármacos para la regeneración de la médula espinal o de los nervios periféricos tras lesión traumática.

7. Aditivo para cultivos celulares de células nerviosas, caracterizado porque éste comprende al menos un compuesto peptídico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2.

8. Sustrato para el cultivo de células nerviosas, caracterizado porque comprende el aditivo de acuerdo con la reivindicación 7.