La presente invención se relaciona con el desarrollo de péptidosprovenientes de la secuencia HYRIKPTFRRLKWKKYKGKFW en la cual sehan introducido sustituciones de animo ácidos que garantizan la disociación de la capacidad de unión al lipopolisacárido y potencian el efecto antitumoral e inmunomodulador.

Estos péptidos o combinaciones de ellos son útiles para el tratamiento del cáncer, asícomo en sinergismo con las terapias convencionales

Campo de la técnica

La presente invención está incluida en el campo de la inmunoterapia contra el cáncer. Más precisamente, los péptidos derivados de la secuencia 32-51 de la proteína factor anti-LPS de Limulus o sus combinaciones, que no pueden unirse a lipopolisacáridos y útiles para tratar el cáncer y la metástasis.

Antecedentes

Recientemente se ha notificado el uso de modificadores de la respuesta biológica para tratar el cáncer principalmente combinados con las terapias actuales para potenciar el beneficio del tratamiento (documento US 2004/0101511). Por otra parte, se ha desarrollado el uso de secuencias CpG, el agonista del receptor de tipo Toll 9 (TLR9), como nuevos fármacos para tratar, controlar y prevenir el cáncer como partes de múltiples indicaciones de tratamiento, es decir cáncer de pulmón de células no pequeñas, melanoma y carcinoma renal (Klinman D. M., et al, (2004) Immunotherapeutic uses of CpG oligodeoxynucleotides. Nat Rev Immunol. 4: 249-258). En la actualidad, se somete a prueba un agonista del receptor de tipo Toll 7 (TLR7) en ensayos clínicos de fase I para activar el sistema inmunitario, con resultados prometedores como un nuevo fármaco para tratar el melanoma y otros tumores (Dudek A. Z., et al (2005) ASCO Annual Meeting). Los agonistas anteriormente mencionados de los TLR 7 y 9 también se están evaluando en infecciones virales, basándose en su capacidad para promover una respuesta inmunitaria eficaz en el huésped. Además, se han desarrollado y fabricado las denominadas proteínas de choque térmico (Hsp) que se unen al TLR4, como una proteína de fusión para la oncoproteína E7 del virus del papiloma humano (VPH). Este nuevo enfoque inmunoterapéutico también se conoce como vacunas terapéuticas, con (Chu N. R. et al., (2000) Immunotherapy of a human papillomavirus (HPV) type 16 E7-expressing tumour by administration of fusion protein comprising Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guerin (BCG) hsp65 and HPV16 E7. Clin Exp Immunol 121: 216-225) una amplia perspectiva para tratar enfermedades relacionadas con el virus del papiloma humano. Los receptores de tipo Toll son moléculas de receptor presentes en las células del sistema inmunitario, que reconocen patrones moleculares asociados a patógenos, como LPS, ácido lipoteicoico, secuencias CpG no metiladas y ARN viral mono y bicatenario. El reconocimiento del patógeno invasor por los TLR ayuda al sistema inmunitario a dirigir una respuesta inmunitaria Th1/Th2 equilibrada para erradicar de manera eficaz la infección fuera del organismo. El uso de los agonistas de TLR como fármacos para tratar el cáncer se basa en la activación de los sistemas inmunitarios innato y adaptativo, activando una respuesta inmunitaria Th1 mediada por interferones de tipo I (por ejemplo IFN α y β) e interleucina 12 (IL-12) como el principal mecanismo. Por tanto, se consigue una respuesta inmunitaria altamente específica y sostenida (Switaj T., Jalili A., et al., (2004) CpG Immunostimulatory oligodeoxynucleotide 1826 enhances antitumor effect of interleukin 12 gene-modified tumor vaccine in a melanoma model in mice. Clinical Cancer Research, Vol. 10:4165-4175). Esta activación doble del sistema inmunitario contrasta con varios enfoques inmunoterapéuticos distintos que no pueden generar un efecto sostenido en la respuesta inmunitaria adaptativa y tampoco activar de manera inespecífica el sistema inmunitario innato con posteriores efectos no deseados (Speiser D. E, et al. (2005) Rapid and strong human CD8+T cell responses to vaccination with peptide, IFA, y CpG oligodeoxynucleotide 7909. The Journal of Clinical Invest. Vol. 115 (3)).

Las células dendríticas (CD) son células presentadoras de antígenos profesionales que unen respuestas inmunitarias innata y adaptativa mediante interacciones célula a célula y producción de citocinas. Las CD se clasifican en mieloides y linfoides según su origen, basándose en la expresión diferencial de una serie de marcadores moleculares de superficie y también los TLR. Las CD linfoides, también conocidas como CD plasmocitoides, son la principal fuente de interferones de tipo I. Considerando estas propiedades, las CD se han manipulado como adyuvantes celulares prometedores para desarrollar vacunas terapéuticas contra el cáncer e infecciones virales crónicas (Santini S.M., et al (2003) A new type I IFN-mediated pathway for rapid differentiation of monocytes into highly active dendritic cells. Stem Cells, 21:357-362). Sin embargo, ésta es una técnica muy cara y difícil, con otras estrategias terapéuticas más prácticas y menos caras en desarrollo (Van Epps H.L. (2005) New hope for tumor vaccines. The Journal of Experimental Medicine, Vol.202:1615).

Descritos al principio por su actividad antiviral, recientemente se ha demostrado que los interferones de tipo I (IFN α, β) ejercen efectos importantes sobre el sistema inmunitario, promoviendo respuestas inmunitarias celulares y humorales mediante sus efectos adyuvantes sobre las CD (Bogdan, C. (2000) The function of type I interferons in antimicrobial immunity. Curr, Opin Immunol. 12: 419-424). Trabajos recientes han sacado a la luz el papel crítico de los interferones de tipo I endógenos en los procesos que median la regresión de un sarcoma murino singénico altamente inmunogénico, y que protegen al huésped contra la aparición de tumor carcinogénico primario (Gavin P. Dunn, et al. (2005) A critical function for type I interferons in cancer immunoediting. Nature Immunology, 12 de junio). Además, el IFN-α desempeña un papel importante en la iniciación de la respuesta antiviral de linfocitos T mediante la activación directa de linfocitos T CD4+ o CD8+ en infecciones virales como la gripe (Fonteneau J.F, et al. (2003) Activation of influenza virus-specific CD+4 and CD+8 T cells: a new role for plasmacytoid dendritic cells in adaptive immunity. Immunobiology, 101: 35203526).

Hoess (documento WO 95/05393) se refiere en su invención a sustancias que se unen a LPS con alta afinidad, útiles para prevenir o tratar infecciones como septicemia mediada por bacterias Gram-positivas o Gram-negativas, infecciones bacterianas en general e infecciones fúngicas. Sustancias de este tipo son péptidos de unión a LPS que portan un dominio de unión a endotoxina (Hoess A., et al, (1993) Crystal structure of an endotoxin-neutralizing protein from the horseshoe crab, Limulus anti-LPS factor, at 1.5Aº resolution. The EMBO J. 12:3351-3356). La estructura cristalina de la proteína factor anti-LPS de Limulus (LALF) original revela un bucle similar a polimixina B, cargado de manera positiva, anfipático y que contiene residuos hidrófobos y aromáticos expuestos. Basándose en este principio, se documentó la capacidad de las secuencias correspondientes a los aminoácidos 31 a 52 en la proteína LALF para unirse y neutralizar los efectos asociados a heparina, como anticoagulación, angiogénesis e inhibición de la proliferación de células tumorales y endoteliales. Sin embargo, no existe ningún dato experimental que soporte esta declaración en la patente mencionada anteriormente. De hecho, las reivindicaciones concedidas hacen referencia a un dispositivo para eliminar LPS en disolución, comprendiendo dicho dispositivo péptidos inmovilizados en un soporte sólido (documento US 6.384.188).

Por otra parte, Vallespi (documento US 6.191.114) se refiere en su invención al efecto antiviral del péptido LALF31-52 sobre células Hep-2 y MDBK, mediado por la producción de los interferones α y γ, refiriéndose también su invención al uso de este péptido para tratar infecciones virales y trastornos relacionados con la inmunosupresión. Además, el mismo autor ha demostrado el efecto antiinfeccioso de este péptido en modelos animales de septicemia (Vallespi M.G., et al. (2003) A Limulus anti-LPS factor-derived peptide modulates cytokine gene expression and promotes resolution of bacterial acute infection in mice. International Immunopharmacology, 3:247-256).

Existen varias terapias dirigidas contra el cáncer, incluyendo quimioterapia, radiaciones y terapia génica. La toxicidad es una principal desventaja de todas estas terapias, habiéndose administrado altas dosis durante periodos de tiempo prolongados para lograr finalmente algún efecto terapéutico beneficioso. Por tanto, aún se requiere el desarrollo de nuevos fármacos para obtener tratamientos más eficaces.

Basándose en el papel esencial del sistema inmunitario para detectar y dirigir una respuesta eficaz contra tumores, fármacos diseñados para activar los mecanismos de defensa innato y adaptativo del huésped pueden convertirse en herramientas poderosas para agentes terapéuticos contra el... [Seguir leyendo]

1. Péptidos con capacidad antitumoral e inmunomoduladora derivados de la región 32-51 de la proteína LALF, región que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, péptidos que están desprovistos de capacidades de unión a LPS y unión a heparina, comprendiendo dichos péptidos las secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO. 1 a 4 y 8 a 12, y variantes homólogas de estos péptidos, teniendo dichas variantes la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ. ID. NO: 1-4 y SEQ. ID. NO: 8-12.

2. Composición farmacéutica que comprende uno o más de los péptidos según la reivindicación 1, y que comprende también excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 2, comprendiendo dicha composición adicionalmente un inmunógeno.

4. Composición farmacéutica según la reivindicación 3, en la que dicho inmunógeno se selecciona del grupo que consiste en inmunógenos de naturaleza peptídica, gangliosídica o proteica, siendo partículas de tipo virus o vesículas proteicas de origen bacteriano.

5. Uso de péptidos según la reivindicación 1, para fabricar una composición farmacéutica para tratar y/o prevenir trastornos inmunológicos y cáncer.

6. Uso según la reivindicación 5, en el que los péptidos están en una cantidad eficaz para estimular la respuesta inmunitaria innata en un ser humano.

7. Uso según la reivindicación 5, en el que los péptidos son adecuados para inhibir la metástasis.