NUEVO ADYUVANTE A BASE DE AMINA.

- Una composición que comprende una o más acilaminas que comprenden de 4 a 30 átomos de carbono, para uso como un adyuvante en una vacuna

Campo de la invención 5

La presente invención se refiere a una nueva composición de adyuvante para la administración de un polinucleótido o un polipéptido a un animal a fin de potenciar la respuesta inmunológica frente al polipéptido, o al polipéptido expresado como resultado de la administración del polinucleótido.

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Antecedentes de la invención

En la última década, los plásmidos que codifican antígenos han revolucionado el diseño de vacunas. Aunque todavía no 10 se ha aprobado ninguna vacuna de ADN para uso humano o veterinario habitual, el potencial de esta modalidad de vacuna se ha demostrado en modelos de animales experimentales.

La vacunación de ADN plasmídico ha mostrado eficacia frente a infecciones víricas, bacterianas y parasitarias, ha modulado los efectos de enfermedades autoinmunitarias y alérgicas, y ha inducido el control sobre la progresión del cáncer. Debido a la simplicidad y versatilidad de estas vacunas, son posibles diversas rutas y modos de suministro para 15 engranar las respuestas inmunitarias deseadas. Estas pueden ser respuestas de células efectoras T o B, capaces de eliminar agentes infecciosos o células transformadas. Las vacunas de ADN también pueden inducir una respuesta inmunorreguladora/moduladora o inmunosupresiva (tolerante) que interfiere con la diferenciación, expansión o funciones efectoras de células B y T. Los ensayos preclínicos y clínicos a pequeña escala iniciales han mostrado que las vacunas de ADN en cualquiera de estos modos son seguras y bien toleradas. Las vacunas de ADN han demostrado ser muy 20 eficaces en modelos de pequeños animales, y también son eficaces en seres humanos y animales más grandes, incluyendo primates, ganado vacuno, caballos, y cerdos.

Sin embargo, cuando el ADN se administra solo, se requiere la administración de una cantidad relativamente elevada de ADN (varios miligramos) para dar una respuesta inmunitaria duradera y potente en seres humanos y animales más grandes. 25

Sin embargo, aunque es factible el uso de vacunas de ADN a dosis de miligramos, impondría serias limitaciones sobre el número de constructos que se podrían incluir en una vacuna. Además, el uso de dosis muy elevadas de ADN es menos favorable desde un punto de vista económico del proceso. Por lo tanto, existe una clara necesidad de inducir inmunidad eficaz en seres humanos con menos dosis y más pequeñas de ADN, así como incrementar la magnitud de las respuestas inmunitarias obtenidas. 30

Se ha ensayado un número de tales sistemas que pueden provocar una respuesta inmunitaria protectora, y la mayoría de estos descansa en el uso de moléculas catiónicas que se coadministran con el ADN.

Las sustancias que se han descrito en la bibliografía incluyen partículas de ácido láctico con dioleil-1,3-trimetilamoniopropano (PNAS 2000, 97(2) 811), liposomas que contienen DMRIE/DOPE (Vaccine 1997, 15(8) 818), liposomas de Vaxfectin (Vaccine 2001, 19, 1911-23), y la poli-l-arginina combinada con motivos CpG se describe en 35 Vaccine 20 (2002) 3498-3508.

Además, se obtuvieron emulsiones catiónicas mediante la inclusión de 1,2-dioleoil-3-trimetil-amoniopropano (DOTAP) o el adyuvante inductor de Th1 bromuro de dimetildioctadecilamonio (DDA) (Vaccine 20 (2002) 3389-3398). También se ha descrito un polisacárido catiónico, el quitosano, como un sistema de suministro para ADN y polipéptidos (Advanced Drug Delivery Reviews 51 (2001) 81-96). 40

Descripción detallada de la invención

Como se describe anteriormente, uno de los problemas principales de vacunas a base de ADN es su mala generación de anticuerpos al administrarlas a seres humanos. De este modo, la presente invención proporciona adyuvantes que son capaces de incrementar y/o modular la respuesta inmunitaria de un organismo frente a vacunas y/o antígenos a base de ácidos nucleicos o a base de péptidos. 45

Además, según se compara con muchos de los adyuvantes de ADN conocidos, los adyuvantes según la invención muestran un grado muy elevado de estabilidad, es decir, es posible almacenarlos a temperatura ambiente durante más de 6 meses.

Los adyuvantes según la invención comprenden una o más sustancias cargadas positivamente (catiónicas). Cuando los adyuvantes se administran junto con polinucleótidos, que normalmente tienen una carga negativa, o con polipéptidos, 50 que pueden estar cargados negativamente o positivamente, habrán interacciones electrostáticas entre los componentes. Tales interacciones son de vital importancia a fin de obtener una respuesta inmunitaria potenciada.

En consecuencia, la invención se refiere a un adyuvante para uso en una vacuna, comprendiendo el adyuvante una o más acilaminas que comprenden de 4 a 30 átomos de carbono, y sus mezclas.

Definiciones

En todo el texto, incluyendo las reivindicaciones, se definirán las siguientes expresiones como se indica a continuación.

El término “acilo” o “grupo acilo” engloba cadenas acílicas, alquílicas, alquenílicas y alquinílicas naturales o sintéticas, ramificadas o no ramificadas, cíclicas o acíclicas, sustituidas o no sustituidas, de 4 a 30 átomos de carbono, tales como, por ejemplo, de 6 a 24 átomos de carbono, de 8 a 20 átomos de carbono, o de 12 a 20 átomos de carbono. 5

El término “acilamina” engloba cadenas acílicas, alquílicas, alquenílicas o alquinílicas en las que se ha unido un grupo amina.

El término “antígeno” se define como cualquier entidad que puede servir como una diana para una respuesta inmunitaria. La respuesta inmunitaria puede ser celular o humoral, y se puede detectar en compartimientos sistémicos y/o mucosales. 10

El término “vacuna” se define aquí como una suspensión o disolución de restos antigénicos, que consisten habitualmente en agentes infecciosos, o alguna parte de los agentes infecciosos, que se introduce en un cuerpo animal para producir inmunidad activa.

El término “adyuvante”, como se usa aquí, es cualquier sustancia cuya mezcla con un inmunógeno inyectado incrementa o modifica de otro modo la respuesta inmunitaria. 15

El término “gp41” significa la glucoproteína de cubierta de HIV transmembránica gp41, y cualesquiera fragmentos o variantes, alelos, análogos y derivados de la misma.

Mediante la expresión “nucleótido de gp41” se quiere decir un nucleótido que codifica la proteína gp41 o sus fragmentos.

El término “L3”, como se usa aquí, se define como un adyuvante para vacunas clásicas, que comprenden un 20 monoglicérido y un ácido graso como se describe en el documento PCT/SE97/01003, publicado como documento WO/1997/047320.

El término “N3”, como se usa aquí, se define como la formulación de adyuvante según la presente invención, y de este modo pretende significar un adyuvante que comprende una o más acilaminas que comprenden de 4 a 30 átomos de carbono. 25

En una realización de la invención, el adyuvante puede ser una o más acilaminas, seleccionadas de, por ejemplo, una laurilamina (C12), palmitilamina (C16), palmitoleilamina (C16:1), oleilamina (C18:1) y linoleilamina (C18:2).

En una realización adicional de la invención, el adyuvante puede ser una mezcla de oleilamina y laurilamina. La relación p/p de oleilamina a laurilamina puede ser desde alrededor de 0,1 hasta alrededor de 10, tal como, por ejemplo, desde alrededor de 0,25 hasta alrededor de 9, desde alrededor de 0,5 hasta alrededor de 8, desde alrededor de 0,75 hasta 30 alrededor de 7, desde alrededor de 1 hasta alrededor de 6, desde alrededor de 1 hasta alrededor de 5, desde alrededor de 1 hasta alrededor de 4, desde alrededor de 1 hasta alrededor de 3, desde alrededor de 1 hasta alrededor de 2 y desde alrededor de 1 hasta alrededor de 1.

El adyuvante según la invención puede comprender además un monoglicérido que tiene la fórmula

35

en la que R se selecciona de H y un grupo acilo que contiene de 6 a 30 átomos de carbono, con la condición de que dos de los grupos R sean H. En un monoglicérido, las cadenas acílicas se colocan normalmente...

1. Una composición que comprende una o más acilaminas que comprenden de 4 a 30 átomos de carbono, para uso como un adyuvante en una vacuna.

2. Una composición según la reivindicación 1, que – como componente adyuvante adicional – comprende un 5 monoglicérido con una pureza de al menos 80% p/p, teniendo el monoglicérido la fórmula

en la que R se selecciona de H y un grupo acilo que contiene de 6 a 30 átomos de carbono, con la condición de que dos de los grupos R sean H.

3. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que los componentes adyuvantes, es 10 decir las acilaminas y opcionalmente los monoglicéridos, están presentes en una concentración que provoca una respuesta inmunitaria cuando se administra a un animal.

4. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que las acilaminas están saturadas o insaturadas.

5. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que las acilaminas se seleccionan del 15 grupo que consiste en laurilamina (C12), palmitilamina (C16), palmitoleilamina (C16:1), oleilamina (C18:1) y linoleilamina (C18:2).

6. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende una mezcla de oleilamina y laurilamina.

7. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además un medio acuoso. 20

8. Una composición según la reivindicación 7, en la que el medio acuoso comprende una sustancia estimulante del sistema inmunitario, seleccionado de motivos CpG.

9. Una composición según las reivindicaciones 7-8, en la que el medio acuoso comprende además el agente tensioactivo Pluronic F68.

10. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 7-9, en la que el medio comprende además uno o más 25 aditivos fisiológicamente aceptables seleccionados de agentes tamponantes, agentes estabilizantes, agentes osmóticamente activos, conservantes y agentes que ajustan el pH.

11. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la que la concentración total de sustancias catiónicas, ya sea solas o, si es pertinente, junto con monoglicéridos, en el medio, es como máximo 25% p/v, o como máximo 20% p/v, como máximo 15% p/v, como máximo 10% p/v, como máximo 5% p/v, como máximo 4% p/v, o como 30 máximo 3% p/v.

12. Una composición de vacuna que comprende un adyuvante según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con un componente antigénico.

13. Una composición de vacuna según la reivindicación 12, en la que el componente antigénico se selecciona del grupo que consiste en antígenos procedentes de bacterias patógenas y no patógenas, virus, parásitos y células tumorales. 35

14. Una composición de vacuna según la reivindicación 13, en la que el componente antigénico es un polinucleótido.

15. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 12-14, que contiene además un medio acuoso.

16. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 12-15, en la que el adyuvante comprende una mezcla de monooleína y oleilamina. 40

17. Una composición de vacuna según la reivindicación 16, en la que la relación p/p de monooleína y oleilamina es 0,45.

18. Una composición de vacuna según la reivindicación 16 ó 17, en la que la cantidad total de monooleína y oleilamina es al menos 40 g, o al menos 50 g, o al menos 55 g, o al menos 60 g, o al menos 70 g, o al menos 80 g, o al menos 90 g o al menos 100 g. 45

19. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 12-18, en la que la composición comprende adyuvantes adicionales.

20. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 12-19, en la que la composición está en una forma adecuada para la administración parenteral o mucosal.

21. Una composición de vacuna según la reivindicación 20, en la que la composición está en una forma adecuada para 5 la administración a la mucosa de la nariz, boca, vagina, recto o intestino.