MODULADORES DE AGENTES FARMACOLÓGICOS.
Un modulador oligonucleotídico que hibrida en condiciones fisiológicas con un aptámero contra factores de coagulación,
donde dicho aptámero es un ácido nucleico monocatenario que se une a un factor de coagulación, para revertir de forma específica y rápida los efectos anticoagulantes y antitrombóticos de dicho aptámero contra factores de coagulación que está dirigido a componentes de la vía de coagulación
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2002/016555.
Solicitante: DUKE UNIVERSITY.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: Office of Licensing and Ventures 2812 Erwin Road, Suite 306 Durham, NC 27705.
Inventor/es: SULLENGER,BRUCE,A, RUSCONI,CHRISTOPHER.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 28 de Mayo de 2002.
Fecha Concesión Europea: 22 de Septiembre de 2010.
Clasificación PCT:
- C07H21/04 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › C07H 21/00 Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos. › con desoxirribosilo como radical sacárido.
- C12Q1/68 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
Clasificación antigua:
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
Fragmento de la descripción:
Moduladores de agentes farmacológicos.
Esta solicitud reivindica prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº 60/293.231, presentada el 25 de mayo de 2001, y la Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº 60/331.037, presentada el 7 de noviembre de 2001.
Campo técnico
La presente invención se refiere, en general, a un modulador oligonucleotídico que revierte la actividad farmacológica de un aptámero contra factores de coagulación.
Antecedentes
Convencionalmente se ha pensado que los ácidos nucleicos desempeñan principalmente una tarea informativa en procesos biológicos. A través de un método conocido como Evolución Sistemática de Ligandos por Enriquecimiento Exponencial, llamado SELEX, ha quedado claro que los ácidos nucleicos tienen diversidad estructural tridimensional no diferente a las proteínas. SELEX es un método para la síntesis in vitro y la selección de moléculas de ácido nucleico con unión altamente específica a moléculas diana. El proceso SELEX se describió por primera vez por Gold y Tuerk en la solicitud de patente de Estados Unidos Nº Ser. 07/536.428, presentada el 11 de junio de 1990, ahora Patente de Estados Unidos Nº 5.475.096, y después en la solicitud de patente de Estados Unidos Nº Ser. 07/931.473, presentada el 17 de agosto de 1992, titulada "Methods for Identifying Nucleic Acid Ligands (Métodos para identificar ligandos de ácido nucleico)", ahora Patente de Estados Unidos Nº 5.270.163 (véase también el documento WO 91/19813). Véase también Tuerk et al., Science 249: 505-10 (1990).
Los ligandos de ácido nucleico o aptámeros son ácidos nucleicos (ADN o ARN) monocatenarios no codificantes que tienen la propiedad de unirse específicamente a un compuesto o molécula diana deseado, y que tienen suficiente capacidad para formar una diversidad de estructuras bi y tridimensionales y suficiente versatilidad química disponible dentro de sus monómeros para actuar como ligandos (formar pares de unión específicos) con casi cualquier compuesto químico, sea monomérico o polimérico. Moléculas de cualquier tamaño o composición pueden servir como dianas. El método SELEX implica la selección entre una mezcla de oligonucleótidos candidatos e iteraciones por etapas de unión, separación y amplificación, usando el mismo esquema de selección general, para conseguir casi cualquier criterio deseado de afinidad y selectividad de unión. Partiendo de una mezcla de ácidos nucleicos, preferiblemente compuesta por segmentos de secuencias aleatorizadas, el método SELEX incluye las etapas de poner en contacto la mezcla con la diana en condiciones favorables para la unión, separar los ácidos nucleicos no unidos de aquellos ácidos nucleicos que se han unido específicamente a moléculas diana, disociar los complejos ácido nucleico-diana, amplificar los ácidos nucleicos disociados de los complejos ácido nucleico-diana para producir una mezcla de ácidos nucleicos enriquecida con ligando, después reiterar las etapas de unión, separación, disociación y amplificación a través de todos los ciclos que se deseen para producir ligandos de ácido nucleico de elevada afinidad altamente específicos para la molécula diana.
Los ligandos de ácido nucleico tienen varias características que pueden volverlos útiles como agentes terapéuticos. Pueden prepararse como compuestos sintéticos relativamente pequeños (por ejemplo, de 8 kDa a 15 kDa) y pueden seleccionarse para que tengan elevada afinidad y especificidad por moléculas diana (constantes de disociación en equilibrio que varían de, por ejemplo, 0,05-10 nM). Los aptámeros abarcan tanto las propiedades de afinidad de los anticuerpos monoclonales y los anticuerpos de cadena sencilla (scFv) como la facilidad de fabricación similar a la de un péptido pequeño. Estudios iniciales demostraron el uso in vitro de los aptámeros para estudiar la función proteica, y estudios más recientes han confirmado la utilidad de estos compuestos para estudiar la función proteica in vivo (Floege et al., Am J Pathol 154: 169-179 (1999), Ostendorf et al., J Clin Invest 104: 913-923, (1999)). Además, estudios en animales hasta la fecha han mostrado que los aptámeros y compuestos de composición similar se toleran bien, muestran baja o ninguna inmunogenicidad, y son por tanto adecuados para la administración repetida como compuestos terapéuticos (Floege et al., Am J Pathol 154: 169-179 (1999), Ostendorf et al., J Clin Invest 104: 913-923 (1999), Griffin et al., Blood 81: 3271-3276 (1993), Hicke et al., J Clin Invest 106: 923-928 (2000)).
Como compuestos sintéticos, pueden hacerse modificaciones específicas de sitio (inserciones o deleciones) a los aptámeros para alterar de forma racional su biodisponibilidad y modo de eliminación. Por ejemplo, se ha descubierto que aptámeros modificados con 2'-fluoro pirimidina en el intervalo de tamaño de 10 kDa a 12 kDa tienen una vida media en circulación corta (∼10 minutos) después de administración intravenosa en embolada pero que una simple modificación química del aptámero o la conjugación del aptámero con una molécula vehículo de elevado peso molecular (por ejemplo, PEG) aumenta la vida media en circulación sustancialmente (6-12 horas) (Willis et al., Bioconjug Chem 9: 573-582 (1998), Tucker et al., J Chromatogr Biomed Sci Appl 732: 203-212 (1999), Watson et al., Antisense Nucleic Acid Drug Dev 10: 63-75 (2000)). Se han descrito ligandos de ácido nucleico monocatenarios bioactivos y resistentes a nucleasa que comprenden L-nucleótidos (Williams et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 94: 11285 (1997); documento USP 5.780.221; Leva et al., Chem. Biol. 9: 351 (2002)). Estos "L-aptámeros" son, según se informa, estables en condiciones en las que los aptámeros que comprenden nucleótidos de quiralidad natural (D-nucleótidos) (es decir, "D-aptámeros") están sometidos a degradación.
Varias terceras personas han solicitado y conseguido patentes que cubren la identificación, fabricación y uso de aptámeros. Como se ha indicado anteriormente a Larry Gold y Craig Tuerk se les atribuye generalmente el primer desarrollo del método SELEX para aislar aptámeros, y su método se describe en varias patentes de Estados Unidos incluyendo aquellas mencionadas anteriormente y las Patentes de Estados Unidos Nº 5.670.637, 5.696.249, 5.843.653, 6.110.900, y 5.270.163, así como otras descritas en la Descripción Detallada de la Invención. Thomas Bruice et al. informaron de un proceso para producir aptámeros en la Patente de Estados Unidos Nº 5.686.242, que difiere del proceso SELEX original presentado por Tuerk y Gold porque emplea oligonucleótidos estrictamente aleatorios durante la secuencia de exploración. Los oligonucleótidos explorados en el proceso de la patente '242 carecen de los cebadores oligonucleotídicos que están presentes en oligonucleótidos explorados en el proceso SELEX.
Varias patentes de Gold et al. se refieren a los propios aptámeros. Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 6.114.120 se refiere a un aptámero que se une a una macromolécula celular. La Patente de Estados Unidos Nº 5.670.637 se refiere a aptámeros que se unen a proteínas. La Patente de Estados Unidos Nº 5.696.249 se refiere a un aptámero producido por el proceso SELEX.
Se han expedido otras patentes que se refieren a aptámeros contra dianas biológicas específicas, y a los métodos para identificar estos aptámeros. Las Patente de Estados Unidos Nº 5.756.291 y 5.582.981 de O'Toole, por ejemplo, describen un método para detectar trombina usando un aptámero marcado que comprende una secuencia de seis nucleótidos definida. Las Patentes de Estados Unidos Nº 5.527.894 y 5.637.461 de Gold et al. se refieren a métodos para identificar aptámeros contra la proteína tat. Otras patentes que describen aptámeros dirigidos contra dianas biológicas específicas incluyen las Patentes de Estados Unidos Nº 5.496.938 (transcriptasa inversa de VIH), 5.476.766 (trombina), 5.459.015 (factor de crecimiento de fibroblastos), 5.472.841 (elastasa de neutrófilos), 5.849.479 (factor de crecimiento del endotelio vascular), 5.726.017 (GAG de VIH), 5.731.144 (TGFβ), 5.827.456 (hormona gonadotropina coriónica), 5.780.228 (lectinas), 5.766.853 (selectinas), 5.674.685 (factor de crecimiento derivado de plaquetas), 5.763.173 (ADN polimerasas), 6.140.490 (proteínas del sistema del complemento), y 5.869.641 (CD4).
Sullenger, Rusconi, Kontos y White en el documento WO 0226932 A2 describen...
Reivindicaciones:
1. Un modulador oligonucleotídico que hibrida en condiciones fisiológicas con un aptámero contra factores de coagulación, donde dicho aptámero es un ácido nucleico monocatenario que se une a un factor de coagulación, para revertir de forma específica y rápida los efectos anticoagulantes y antitrombóticos de dicho aptámero contra factores de coagulación que está dirigido a componentes de la vía de coagulación.
2. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1, donde el modulador se une al aptámero contra factores de coagulación libre presente en el hospedador.
3. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1, donde el modulador se une al aptámero contra factores de coagulación presente en el hospedador en asociación con el componente de la vía de coagulación de la sangre.
4. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1, donde el modulador es complementario al aptámero contra factores de coagulación.
5. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el modulador comprende una secuencia complementaria a 6-25 nucleótidos del aptámero contra factores de coagulación.
6. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 5, donde el modulador comprende una secuencia complementaria a 8-20 nucleótidos del aptámero contra factores de coagulación.
7. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 6, donde el modulador comprende una secuencia complementaria a 10-15 nucleótidos del aptámero contra factores de coagulación.
8. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el modulador comprende 5-80 nucleótidos.
9. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 8, donde el modulador comprende 10-30 nucleótidos.
10. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 9, donde el modulador comprende 15-20 nucleótidos.
11. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el modulador alberga una sustitución química.
12. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 11, donde el modulador comprende una pirimidina sustituida en la posición 5' o un azúcar sustituido en la posición 2'.
13. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 12, donde el modulador comprende una sustitución 2'-amino, 2'-fluoro o 2'-O-metilo.
14. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el modulador comprende un ácido nucleico cerrado.
15. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el modulador es complementario a una región monocatenaria de dicho aptámero contra factores de coagulación.
16. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 15, donde el modulador es complementario a una región monocatenaria del aptámero contra factores de coagulación y una región bicatenaria del aptámero contra factores de coagulación.
17. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el aptámero contra factores de coagulación tiene un tramo final monocatenario.
18. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 17, donde el modulador es complementario al tramo final monocatenario del aptámero contra factores de coagulación.
19. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el aptámero contra factores de coagulación y el modulador comprenden β-D-nucleótidos.
20. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 4, donde el modulador se produce en el hospedador después de la administración al hospedado de una construcción que comprende una secuencia que codifica el modulador.
21. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1, donde el aptámero contra factores de coagulación es un aptámero contra factores de coagulación anticoagulante o antitrombótico.
22. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 21, donde el componente de la vía de coagulación de la sangre es un complejo enzimático de factor tisular (TF)/factor VIIa (FVIIa), complejo enzimático de factor VIIIa (FVIIIa)/factor IXa (FIXa), complejo enzimático de factor Va (FVa)/factor Xa (FXa), gpIIbIIIa, gpIbIX, gpVI, Gas6, PAI-1 (inhibidor del activador de plasminógeno I), factor de coagulación XIIIa (FXIIIa), ATIII (anti-trombina III), factor de coagulación IXa (FIXa), trombina o factor de coagulación XIa (FXIa).
23. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1, donde el aptámero contra factores de coagulación alberga un marcador.
24. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 23, donde el marcador es un marcador citotóxico.
25. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 23, donde el marcador es un marcador radiactivo.
26. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 23, donde el marcador es un marcador detectable.
27. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 23, donde el hospedador es un ser humano.
28. El modulador oligonucleotídico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 23, donde el hospedador es un mamífero no humano.
29. El modulador oligonucleotídico de la reivindicación 21, donde el componente de la vía de coagulación de la sangre es un complejo de factor VIIIa (FVIIIa)/factor IXa (FIXa).
30. El modulador oligonucleotídico de la reivindicación 21, donde el componente de la vía de coagulación de la sangre es el Factor IXa.
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