MICROCÁPSULAS QUE CONTIENEN UNOS ESPERMATOZOIDES DE MAMÍFEROS, DOSIS DE INSEMINACIÓN QUE LAS CONTIENE Y PROCEDIMIENTO PARA SU OBTENCIÓN.

Microcápsulas que comprenden: - un núcleo que contiene unos espermatozoides de mamíferos,

con la excepción del ser humano, en suspensión en un diluyente, es decir un medio líquido apto para asegurar la conservación de los espermatozoides; - una matriz de encapsulación constituida por un material polimérico, caracterizadas porque dicha matriz es no espermicida y está constituida por lo menos por un glicérido semi-sintético, a saber por lo menos un glicérido de ácidos grasos saturados en C8 a C18, que presenta una temperatura de fusión comprendida entre aproximadamente 35 y aproximadamente 47ºC

La presente invención se refiere a unas microcápsulas que contienen unos espermatozoides de mamíferos.

Se refiere asimismo a una dosis de inseminación que las contiene, así como a un procedimiento para la obtención de estas microcápsulas.

En lo que se refiere al caso particular de la cerda, el inicio del celo tiene lugar como media 30 horas antes de la ovulación y se traduce fisiológicamente por una dilatación del cuello uterino.

Se hará referencia a la figura 1A adjunta en la que se traza el eje del tiempo t, un intervalo situado en dos círculos próximos que representan 6 horas.

En este eje, el inicio del celo se ha referenciado DC y el bloque PFO representa el periodo de tiempo durante el cual los óvulos son potencialmente fecundables.

Actualmente, la realización de la inseminación artificial se efectúa en dos tiempos, con el fin de cubrir el periodo ovulatorio y el periodo post-ovulatorio, con el fin de tener las mejores posibilidades de fecundación de los óvulos.

Una primera inseminación artificial (1ª IA) se práctica 12 horas después del inicio del celo DC, lo cual asegura una duración fecundante de 24 horas (primer bloque PFS). Una segunda inseminación artificial (2ª IA) se práctica 24 horas después del inicio del celo, lo cual asegura asimismo 24 horas de fecundidad (2º bloque PFS) y que recubre entonces el periodo ovulatorio PFO.

Se comprende fácilmente que esta realización de una inseminación artificial en dos tiempos provoca numerosas manipulaciones para el técnico encargado de estas inseminaciones. Por otra parte, esto provoca estrés en la cerda. Por último, estas operaciones necesitan la utilización de varios contenedores para el semen, lo cual, globalmente, aumenta el precio de coste de la operación.

Ya se ha propuesto sustituir las dos operaciones de inseminación por una sola.

Para ello, se ha recurrido a la encapsulación de espermatozoides en una matriz no tóxica que forma un gel o un sólido a temperatura de almacenamiento, y que se desagrega a la temperatura corporal.

Así, se describe en el documento US-A-4.840.891 la encapsulación de espermatozoides para la inseminación artificial.

En este documento, se usa un polímero no tóxico hidrófilo que se selecciona preferentemente de entre el grupo constituido por los polímeros de poliuretano y de polioxietileno, así como de los polímeros de poliuretano y de poliéster.

Se describe por otra parte en el documento EP-B-0 922 451 una técnica de encapsulación de espermatozoides de cerdo con la ayuda de geles de polímeros y, en particular, de alginato.

Esta técnica no da buenos resultados en la medida en la que los ensayos realizados no son concluyentes. En efecto, el tamaño de las microcápsulas formadas es del orden de 5 milímetros, lo cual es demasiado grande, y la movilidad de los espermatozoides encapsulados es muy inferior a la de los espermatozoides libres.

En otros documentos se describen unas técnicas de encapsulación de espermatozoides. Se trata, a título no limitativo, de los siguientes documentos:

- US-B1-6.596.310,

- US-A-4.840.891,

- WO 2006/106400,

- NEBEL RAYMOND L ET AL: "Spermatozoal microencapsulation for use in artificial insemination of farm animals" -TORRE M L ET AL: "Controlled release of swine semen encapsulated in calcium alginate beads"

BIOMATERIALS, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS BV., BARKING, GB, vol. 21, nº 14, julio de 2000 (2000

07), páginas 1493-1498, XP004199070 ISSN: 0142-9612.

Por otra parte, en los documentos indicados a continuación, se dan a conocer unas técnicas de encapsulación de materiales no vivos:

- WO 00/61119A,

- EP-A-1 693 445,

- TIMBERT R ET AL: "Effect of sole and combined pre-treatments on reserve accumulation, survival and

germination of encapsulated and dehydrated carrot somatic embryos" PLANT SCIENCE (SHANNON), vol. 120,

nº 2, 1996, páginas 223-231, XP002466575 ISSN: 0168-9452,

- DINARVAND R ET AL: Effect of surfactant HLB and different formulation variables on the properties of poly-D,L

lactide microspheres of naltrexone prepared by double emulsion technique" JOURNAL OF

MICROENCAPSULATION ISSN: 0265-2048,

- KHANDARE J N ET AL.: "Preparation and evaluation of nimesulide niosomes for topical application" INDIAN DRUGS 2001 INDIA, vol. 38, nº 4, 2001, páginas 197-202, XP009094333 ISSN: 0019-462X.

La idea de encapsular una parte de dosis de inseminación necesita deber responder a ciertos imperativos. En particular, la integración del semen en unas cápsulas debe permitir una liberación controlada de éste, por consiguiente, la sustitución de la segunda inseminación.

Las cápsulas producidas deben mantenerse en el medio líquido de soporte que las contiene (medio isotónico), durante un tiempo mínimo de tres días, y en un medio animal durante 24 horas. Estas cápsulas deben degradarse en 6 horas en el medio animal y deben tener un tamaño de aproximadamente 1 mm.

Con fin de simplificar, se utilizará el término "diluyente" para designar el medio isotónico en el que están contenidas las cápsulas. Este diluyente es del tipo bien conocido para asegurar la conservación de semen fresco durante varios días.

En resumen, la matriz de encapsulación no debe reaccionar durante 96 horas como mínimo, es decir 72 horas en el medio isotónico y 24 horas en el medio animal.

Esta situación se representa en la figura 1B adjunta, que es análoga a la anterior. Se ha referenciado IA la única inseminación realizada, durante la cual se inyectan unos espermatozoides encapsulados SE.

La referencia SE' corresponde al periodo a partir del cual la matriz de encapsulación empieza a desagregarse, siendo la liberación completa de los espermatozoides efectiva al cabo de 24h.

El presente solicitante ha constatado que la utilización de una matriz no espermicida constituida por lo menos por un glicérido semi-sintético, a saber por lo menos un glicérido de ácidos grasos saturados en C8 a C18, cuya temperatura de fusión está comprendida entre aproximadamente 35 y aproximadamente 47ºC, responde totalmente al objetivo descrito anteriormente.

En efecto, dicha matriz de encapsulación es biocompatible con el semen, es estable en el medio isotónico durante tres días, es estable durante 24 horas en el medio animal intra-uterino a unas temperaturas del orden de 38ºC, y se degrada en 6 horas aproximadamente en el medio animal.

La presente invención se refiere asimismo a una dosis de inseminación que comprende un medio líquido apto para asegurar la conservación de los espermatozoides, conteniendo esta dosis unas microcápsulas de acuerdo con una de las características citadas anteriormente.

Según unas formas particulares de realización de esta dosis:

- dicho medio líquido contiene, en suspensión, unos espermatozoides libres, es decir no encapsulados;

- contiene por lo menos dos grupos de microcápsulas, que se diferencian de dos en dos por la naturaleza del medio líquido y/o la de dicha matriz;

- dicho medio líquido no encapsulado contiene un agente apto para permitir la suspensión uniforme de las microcápsulas en el seno de éste;

- dicho agente es un gel;

- dicho agente es una goma gellan. La presente invención se refiere asimismo a un procedimiento de fabricación de dichas microcápsulas según el cual se reciben las microcápsulas en un baño de solidificación.

Según la invención, el baño comprende un agente tensoactivo. Según unas características particulares de este procedimiento:

- dicho agente tensoactivo es un monolaurato de sorbitán;

- la temperatura del baño de solidificación está comprendida entre 8 y 25ºC.

15 Otras características y ventajas de la presente invención se pondrán más claramente de manifiesto a partir de... [Seguir leyendo]

1. Microcápsulas que comprenden:

- un núcleo que contiene unos espermatozoides de mamíferos, con la excepción del ser humano, en suspensión en un diluyente, es decir un medio líquido apto para asegurar la conservación de los espermatozoides;

- una matriz de encapsulación constituida por un material polimérico, caracterizadas porque dicha matriz es no espermicida y está constituida por lo menos por un glicérido semi-sintético, a saber por lo menos un glicérido de ácidos grasos saturados en C8 a C18, que presenta una temperatura de fusión comprendida entre aproximadamente 35 y aproximadamente 47ºC.

2. Dosis de inseminación que comprende un medio líquido apto para asegurar la conservación de espermatozoides, caracterizada porque contiene unas microcápsulas según la reivindicación 1.

3. Dosis según la reivindicación 2, caracterizada porque dicho medio líquido contiene, en suspensión, unos espermatozoides libres, es decir no encapsulados.

4. Dosis según una de las reivindicaciones 2 ó 3, caracterizada porque contiene por lo menos dos grupos de microcápsulas, que se diferencian de dos en dos por la naturaleza del medio líquido y/o la de dicha matriz.

5. Dosis según una de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizada porque dicho medio líquido no encapsulado contiene un agente apto para permitir la suspensión uniforme de las microcápsulas en el seno de éste.

6. Dosis según la reivindicación 5, caracterizada porque dicho agente es un gel.

7. Dosis según la reivindicación 6, caracterizada porque dicho agente es una goma gellan.

8. Procedimiento de fabricación de microcápsulas según la reivindicación 1, según el cual se reciben dichas microcápsulas en un baño de solidificación, caracterizado porque dicho baño comprende un agente tensoactivo.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque dicho agente tensoactivo es un monolaurato de sorbitán.

10. Procedimiento según una de las reivindicaciones 9 y 10, caracterizado porque la temperatura del baño de solidificación está comprendida entre 8 y 25ºC.