MÉTODOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ALO-ANTÍGENOS Y SU UTILIZACIÓN PARA LA TERAPIA CONTRA EL CÁNCER Y PARA EL TRASPLANTE.

Métodos para la identificación de alo-antígenos y su utilización para la terapia contra el cáncer y para el trasplante. Campo de la invención La presente invención hace referencia a un nuevo concepto con respecto a la amplia definición de alo-antígenos que impulsan el efecto injerto contra tumor (ICT) y/o la enfermedad injerto contra huésped (EICH). El nuevo método para la identificación de alo-antígenos, que hasta ahora ha sido un problema técnico no resuelto, exige nueva estrategias en inmunoterapia. Dado que el análisis de proteínas de unión a HLA ahora puede realizarse con alo-antígenos para los cuales se conoce la secuencia de aminoácidos correspondiente, la presente invención también permite la separación de linfocitos T reactivos-reactivos que sólo reconocen células tumorales de aquellas que median la EICH. Los antígenos definidos con la nueva tecnología son especialmente útiles para el diagnóstico y vacunación en casos de cáncer y enfermedades relacionadas con trasplantes. Antecedentes de la invención Se conoce en el arte que una gran parte de tumores expresan niveles elevados de auto-proteína a veces alterada, que pueden verse como dianas potenciales para respuestas inmunes. También se ha mostrado que el brazo celular del sistema inmune (linfocitos T) es capaz de reconocer células cancerígenas en modelos experimentales y en sujetos humanos, sin embargo los tumores crecen de manera progresiva. Una hipótesis para explicar esta paradoja es que los linfocitos T no funcionan de manera adecuada en el huésped que tiene el tumor. La otra alternativa es la capacidad de los tumores de reducir la maquinaria que presenta antígenos, volviéndose, de este modo, invisibles para los linfocitos T. Por lo tanto, sigue sin conocerse si la proteína sobreexpresada o alterada puede estimular linfocitos T citotóxicos (CTL, por sus siglas en inglés) reactivos a tumores y contribuir a la inmunovigilancia del crecimiento de tumores. Además, la mayoría de las proteínas tumorales son proteínas de expresión ubicua y son propensas a mediar en la deleción de CTL específicos del repertorio de linfocitos T autólogos. Los linfocitos T autorreactivos normalmente sufren deleción en una etapa inmadura de su desarrollo mediante apoptosis inducida por antígenos o selección negativa. Además de antígenos, la selección negativa puede modularse mediante diferentes conjuntos de señales co-estimuladoras derivadas de (APC) (MacKinnon et al., Br. J. Haematol. 2000, 110: 12-17), lo cual conduce a la formulación de un sistema inmune que es tolerante hacia los antígenos propios. A pesar de aquellos hallazgos desfavorables, hay un enorme interés y expectativas en que la vacunación contra tumores podría ser efectiva y permitir que los tratamientos superen las deficiencias de los enfoques terapéuticos actuales. La quimioterapia en combinación con radioterapia y el trasplante de médula ósea (o TMO) se ha explorado durante los últimos 20-30 años para algunos trastornos metabólicos y hematopoyéticos, y se resultó evidente que el efecto terapéutico es causado sólo parcialmente por la erradicación de las células de leucemia utilizando quimioterapia de alta dosis e irradiación. Numerosas observaciones clínicas proporcionan evidencia convincente de que, además, las respuestas inmunes (linfocitos T del donante) contribuyen sustancialmente a la eliminación de células cancerígenas residuales, y especialmente al posterior éxito a largo plazo de las terapias basadas en TMO. En retrospectiva, la estratégica terapéutica estándar en TMO sobrestimó el potencial anti-cancerígeno de incluso dosis muy altas de quimioterapia y radioterapia, y subestimó la eficacia de la inmunoterapia mediada por linfocitos de donante alogénicos derivados de TMO. Los éxitos clínicos observados después del tratamiento de trastornos hematopoyéticos (leucemia) con trasplantes alogénicos de médula ósea (TMO alogénico) han conseguido satisfacer en gran medida los aspectos fundamentales de una inmunoterapia curativa. El término alogénico se utiliza para describir una situación en la cual el donante y el receptor son individuos diferentes, comparado con el término singénico en el cual el donante y el receptor son gemelos idénticos y tienen un tipo de tejido idéntico dado que su carga genética es la misma. Los trasplantes autólogos se derivan de un individuo que más tarde en el proceso recibe sus propias células. Sin embargo, estrictamente, esto no es trasplante ya que no existen barreras inmunológicas en el trasplante. Existen dos tipos de donantes alogénicos: familiares, habitualmente donantes hermanos, y no emparentados, que habitualmente se encuentran entre un acervo genético muy grande de voluntarios y que coinciden con un tipo de tejido que es igual al del paciente. El trasplante alogénico, ya sea de un donante emparentado o no emparentado, difiere del trasplante singénico o autólogo en cuanto a que existe potencial para el rechazo inmune de las células madre donadas por parte del receptor (efecto huésped contra injerto) y la reacción inmune por parte de las células inmunes del donante contra los tejidos del receptor (enfermedad injerto contra huésped). 2   El rechazo inmune habitualmente se previene mediante el tratamiento intensivo del receptor antes del trasplante (condicionamiento) para suprimir el sistema inmune. Los esquemas de condicionamiento varían según el centro de trasplante y la malignidad implicada. Por ejemplo, en el tratamiento de leucemia, el paciente se somete a condicionamiento mieloablativo que comprende una combinación de ciclofosfamida en altas dosis e irradiación corporal total antes del TMO. Después del trasplante la reacción inmune se combate mediante fármacos inmunosupresores, incluyendo metotrexato, hormonas glucocorticoides (esteroides), ciclosporina o una microemulsión de la misma (Neoral®), tacrolimus (Prograf®) y micofenolato mofetil (Cellcept ®), por un período de tiempo limitado para prevenir ataques agudos y lesiones de los tejidos del paciente. Las mejoras de los cuidados paliativos además de la inmunosupresión controlada han reducido la toxicidad del condicionamiento y la reacción inmune pos-TMO de manera sustancial. Sin embargo, siguen produciéndose complicaciones graves en la orofaringe, tracto intestinal, hígado, pulmón, piel, riñón, tracto urinario y sistema nervioso y, por lo tanto, el TMO alogénico se limita a pacientes más jóvenes y en óptimo estado de salud. En el arte, generalmente se acepta que los cánceres hematológicos no siempre pueden erradicarse mediante altas dosis de condicionamiento de quimioterapia-radiación solamente, sino que además necesitan TMO alogénico. Por lo tanto, las terapias convencionales basadas en TMO alogénico se han convertido en un procedimiento estándar para el tratamiento de muchas enfermedades malignas hematológicas humanas y proporcionan el punto de referencia para todas las inmunoterapias - la posibilidad de una "cura". Los donantes para trasplantes TMO alogénicos se seleccionan según su expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC, por sus siglas en inglés): los antígenos leucocitarios humanos (HLA, por sus siglas en inglés). Los tipos de HLA están genéticamente determinados. Por lo tanto, cada individuo hereda el tipo de HLA de sus padres. Hay tres genes principales en un grupo que parecen ser particularmente importantes en los trasplantes. HLA-A, HLA-B y HLA-DR. Cada individuo tiene dos copias de cada uno de los genes en el grupo de HLA. Además, muchas versiones alélicas corresponden a cada uno de los genes de HLA. Para obtener una compatibilidad ideal de 6 de 6, dos personas deben tener los mismos alelos en cada uno de sus dos genes HLA-A, HLAB y HLA-DR y hay una posibilidad de 1 entre 200 de que un padre o madre y su hijo sean HLA compatibles. Cuando un familiar HLA compatible no se encuentra disponible, y hay tiempo para realizar una búsqueda, habitualmente se considera un donante no emparentado. La posibilidad de que 2 individuos no emparentados sean compatibles para los 6 genes HLA es de 1 entre un millón. Debido al polimorfismo del sistema HLA, el origen étnico y la edad media en el momento del diagnóstico, los trasplantes de donantes emparentados HLA compatibles están disponibles actualmente para un 15-60% de los pacientes diagnosticados recientemente. Los donantes alternativos incluyen familiares con pequeños grados de incompatibilidad y voluntarios no emparentados HLA compatibles. La probabilidad de encontrar donantes no emparentados apropiados, compatibles o parcialmente incompatibles, se ha incrementado con el desarrollo de una red de registros que ahora contiene más de 4,7 millones de donantes en todo el mundo, y con el acceso a otras fuentes tales como sangre del cordón umbilical. Un trasplante de médula ósea consiste principalmente... [Seguir leyendo]

1. Método ex vivo para la determinación de la progresión, regresión o comienzo de una condición patológica específica o enfermedad en un individuo, el tratamiento del individuo comprende el trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas de un donante a dicho individuo, el método comprende (i) proporcionar una muestra del individuo enfermo antes y/o después del trasplante alogénico, y (ii) controlar la muestra en cuanto a (a) una proteína, un péptido o polipéptido que representa una falta de coincidencia de un solo aminoácido, o (b) un anticuerpo que se une de manera selectiva a dicha proteína, péptido o polipéptido, o (c) linfocitos T citotóxicos que reconocen específicamente dicha proteína, péptido o polipéptido unido al complejo de molécula HLA, y (iii) determinar de este modo la progresión, regresión o comienzo de una condición patológica específica o enfermedad en el individuo, en donde dicha no coincidencia de un aminoácido se obtiene mediante los siguientes pasos: (ai) proporcionar una muestra del tejido u órgano seleccionado del individuo que padece dicha enfermedad o condición patológica y una muestra derivada del donante que no padece dicha enfermedad o condición patológica (aii) analizar cada muestra para detectar al menos un aminoácido no coincidente de variantes alélicas de dicha proteína, que se une a la proteína HLA y es codificado por un solo SNP, o producto de expresión del mismo, o un fragmento de este producto de expresión, y (aiii) seleccionar una única no coincidencia de un aminoácido que ocurre sólo en el individuo enfermo. 2. Método ex-vivo conforme a la reivindicación 1, en donde el péptido o polipéptido que representa dicha no coincidencia de un solo aminoácido se une sólo o preferentemente a la célula que presenta el antígeno o proteína HLA del individuo enfermo. 3. Método ex-vivo conforme a la reivindicación 2, en donde el péptido o polipéptido que representa dicha no coincidencia de un solo aminoácido es reconocido por linfocitos T citotóxicos (CTL). 4. Método ex-vivo conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la enfermedad o condición patológica es cáncer. 5. Método ex-vivo conforme a la reivindicación 4, en donde el cáncer es leucemia. 6. Método ex-vivo conforme a la reivindicación 5, en donde la proteína específica analizada en cuanto a y relacionada con dicha enfermedad específica se selecciona del grupo que consiste en los marcadores de tejido que se indica en la Tabla 2.