INHIDOR DE PIRAZOLOPIRIMIDINONA QUINASA.

La presente invención proporciona una nueva pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona, específicamente un derivado de 1- (pyridin-4-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona. Este compuesto es un inhibidor de quinasa que muestra una actividad antiproliferativa inesperada contra células, incluidas células tumorales, y una actividad antitumoral en modelos tumorales de xenoinjerto. El compuesto o sal o profármaco adecuados del mismo es útil para el tratamiento de individuos que sufren un cáncer u otra enfermedad o trastorno proliferativo. Antecedentes de la invención Las quinasas son importantes enzimas celulares que realizan funciones celulares esenciales, tales como regulación de la división y la proliferación celular, y que parecen desempeñar un papel decisivo en muchos estados de enfermedad, como en estados de enfermedad que se caracterizan por una proliferación y diferenciación incontrolada del as células. Estos estados de enfermedad abarcan varios tipos celulares y enfermedades tales como cáncer ,aterosclerosis, reestenosis y otros trastornos proliferativos. Uno de los procedimientos más importantes y fundamentales en biología es la división de las células mediada por el ciclo celular. Este procedimiento asegura la producción controlada de generaciones sucesivas de células con función biológica definida. Es un fenómeno altamente regulado y responde a un grupo complejo de señales celulares tanto dentro de la célula como procedentes de fuentes externas. Una compleja red de productos genéticos de es simulación y supresión de tumores son componentes clave de este proceso de señalización celular. La sobreexpresión de los componentes que estimulan los tumores o la posterior pérdida de los productos que suprimen los tumores conducirán a una proliferación celular no regulada y a la generación de tumores (Pardee, Science 246: 603-608, 1989). Las quinasas dependientes de ciclina (CDK) desempeñan un papel clave en la regulación de la maquinaria del ciclo celular. Estos complejos consiste en dos componentes: una subunidad catalítica (la quinasa) y una subunidad reguladora (la ciclina). Hasta la fecha se han identificado trece subunidades de quinasa (quinasas dependientes de ciclina (CDK) 1-13) en seres humanos junto con varias subunidades reguladoras, incluidas las ciclinas (Cyc) A-H, K, L, N, y T, y CDK5, p35, y otras proteínas. Cada subunidad de quinasa puede formar par(es) con uno o varios compañeros de subunidad reguladora y, en cada caso, dicho par compone el fragmento catalítico activo. Cada transición del ciclo celular está regulada por un complejo de quinasa dependiente de ciclina concreto: G1/SCDK2/CycE, CDK4/CycD y CDK6/CycD; S/G2 por CDK2/CycA y CDK1/CycA; G2/M por CDK1/CycB (para una revisión véase Shapiro, J. Clin. Oncol. 24: 170ff, 2006). La actividad coordinada de estos complejos de quinasas guía a las células individuales a través del proceso de replicación y asegura la vitalidad de cada generación posterior (Sherr, Cell 73:1059-1065, 1993; Draetta, Trends Biochem. Sci. 15:378-382, 1990). Aunque los experimentos en los que se alterna los gentes que codifican las tres ciclinas de tipo D, las dos ciclinas de tipo E, la CDK4 y CDL6 dependiente de ciclina D o la CDK2 dependiente de ciclina E en la línea germinal de ratón mostraron que ninguno de estos genes es estrictamente esencial para la progresión del ciclo celular (revisado en Sherr y Roberts, Genes & Development 18: 2699-2711, 2004), un volumen cada vez mayor de datos ha mostrado una conexión entre el desarrollo del tumor y malfunciones relacionadas con la quinasa dependiente de ciclina. La sobreexpresión de las proteínas reguladoras de ciclina y la consiguiente hiperactividad de quinasa se han asociado a varios tipos de cáncer (Sherr C. J., Science 274:1672-1677, 1996; Jiang, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:9026-9030, 1993; Wang, Nature 343:555-557, 1990). De hecho, el desarrollo de tumores humanos se suele asociar con alteraciones en las propias proteínas CDK o en sus reguladores (Cordon-Cardo C., Am. J. Pathol. 147:545-560, 1995; Karp J. E. y Broder S., Nat. Med. 1: 309-320, 1995; Hall M. y col., Adv. Cancer Res. 68:67-108, 1996). Se ha descubierto que inhibidores proteicos endógenos y altamente específicos de quinasas dependientes de ciclina tenían un efecto fundamental en la proliferación celular (Kamb A., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 227:139-148, 1998; Kamb y col., Science 264:436-440, 1994; Beach, Nature 336: 701-704, 1993). Estos inhibidores incluyen p16INK4 (un inhibidor de CDK4/CycDl), p21CIP1 (un inhibidor general de CDK) y p27KIP1 (un inhibidor específico de CDK2/CycE). Una estructura cristalina de p27 ligado a CDK2/CycA reveló el modo en que estas proteínas inhiben de forma eficaz la actividad quinasa a través de múltiples interacciones con el complejo de quinasa dependiente de ciclina (Pavletich, Nature 382:325-331, 1996). Estas proteínas ayudan a regular el ciclo celular a través de interacciones específicas con sus correspondientes complejos de quinasa dependiente de ciclina. Las células deficientes en estos inhibidores son propensas a un crecimiento no regulado y a la formación de tumores. Además de las CDK implicadas principalmente en el proceso central de la progresión del ciclo celular (CDK 1, 2, 4 y 6), otras CDK son responsables de la regulación de los procesos de expresión génica durante el curso de la progresión del ciclo celular. Específicamente, CDK7 y CDK9 fosforilan el dominio en C-terminal de la ARN polimerasa II y, de ese modo, dirigen la expresión de proteínas anti-apoptóticas, ciclocinas de tipo D y factores de pro-angiogénesis (como VEGF inducido por hipoxia). Por tanto, asimismo, estas denominadas CDK reguladoras son atractivas dianas para intervención terapéutica (véase Shapiro, J. Clin. Oncol. 24:1770ff, 2006). 2 E08760162 27-10-2011   Debido a la clara relación entre la inhibición farmacológica de las CDK y la regulación del ciclo celular, pronto se identificó el posible uso de inhibidores de CDK en oncología y se identificaron muchos inhibidores de molécula pequeña de diferentes clases estructurales (p. ej., estauroporinas, flavonas (p. ej., flavopiridol (véase Shapiro, J. Clin. Oncol. 24:170ff, 2006)), purinas (p. ej., purvalanol; roscovitina (véase Bach y col., J. Biol. Chem. 280: 31208ff, 1995)), pirido[2,3-d]pirimidinonas, oxindoles, paulonas, indenopirazoles, anilinoquinazolina, aminotiazoles o diarilureas, y las primeras moléculas están siendo sometidas ahora a evaluación clínica (para revisiones, véase: Sausville, Trends Mol. Med. 8: S32-S37, 2002; Huwe y col., Angew Chem Int Ed Engl. 42: 2122-38, 2003; Fischer, Cell Cycle 3: 742-6, 2004; Fischer y Gianella-Borradori, Expert Opin Investig Drugs 14: 457-77, 2005). En base a los conocimientos actuales de las funciones bioquímicas de las CDK 1, 2, 4 y 6, se puede esperar que se detenga el crecimiento en células tratadas con inhibidores de estas enzimas. La inhibición directa de CDK4/CycD y/o CDK6/CycD debería detener las células en G1 (Baughn y col., Cancer Res. 66: 7661-7, 2006). Además, la inhibición indirecta de CDK1 y CDK4 mediante la regulación por disminución de los correspondientes compañeros de ciclina a través de la inhibición de las quinasas activadoras de CDK CDK7 y/o CDK9, debería detener las células en G1 (Whittaker y col., Cancer Res. 2004, 64, 262-72; Mateyak y col., Mol Cell Biol. 1999, 19, 4672-83). En principio, la inhibición de la actividad de CDK2 debería tener como resultado la detención de las células en G1, no obstante, se ha mostrado que, genéticamente, en células de cáncer de colon la actividad de CDK podría saltar este bloqueo (Tetsu & McCormick, Cancer Cell 3: 233-45, 2003). La inhibición de CDK1/CycB debería bloquear la salida de la mitosis mediante la inhibición de la fosforilación de componentes del complejo de estimulación de la anafase (Golan y col., J Biol Chem. 277: 15552-7, 2002; Listovsky y col., Exp Cell Res. 255: 184-91, 2000), y también podría resultar en apoptosis mediante la inhibición de la fosforilación de survivina (OConnor y col., Proc Natl Acad Sci U S A. 97: 13103-7, 2000). A la luz de las consideraciones anteriores, cabría esperar que una molécula con actividades de inhibición de CDK potentes y equilibradas, particularmente contra CDK1, CDK2, CDK4, CDK6, CDK7 y CDK9 fuera un prometedor candidato para el desarrollo de un fármaco citostático/citotóxico en la terapia del cáncer o de otras enfermedades proliferativas (DePinto et al., Mol. y col. Cancer Ther. 5: 2644-58, 2006; Joshi y col., Mol. Cancer Ther. 6: 918-25, 2007). No obstante, aunque las actividades de inhibición de CDK, por ejemplo como se determina en ensayos bioquímicos de inhibición de quinasa in vitro, son parámetros muy importantes para la identificación mediante cribado sistemático en investigación, un desarrollo satisfactorio de un fármaco... [Seguir leyendo]

2. Una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la reivindicación 1, particularmente una sal clorhidrato o sal maleato de un compuesto de la reivindicación 1. 3. Un profármaco de un compuesto de la reivindicación 1, o de la sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, en el que el profármaco es (i) un derivado acetato, formiato o benzoato del grupo fenólicohidroxi o (ii) un derivado N-aciloxialquilpiridinio. 4. Una composición farmacéutica que incluye (i) un ingrediente activo seleccionado de: un compuesto de la reivindicación 1, una sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2 y un profármaco de la reivindicación 3; y (ii) un diluyente, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable. 5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, que se formula (i) para administración oral o (ii) para administración intravenosa. 6. La composición farmacéutica de la reivindicación 4 o 5, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho ingrediente activo. 7. La composición farmacéutica de la reivindicación 6, formulada para la administración a un individuo que lo necesite, particularmente en la que dicha administración se realiza en in individuo que sufre un cáncer. 8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que dicho individuo es un ser humano. 9. Un ingrediente activo (a) seleccionado de: un compuesto de la reivindicación 1, una sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, y un profármaco de la reivindicación 3; o (b) una composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, para usar en el tratamiento de un individuo que sufre un cáncer, particularmente en la que dicho individuo es un mamífero seleccionado del grupo que consiste en: mamíferos domésticos, roedores y seres humanos, particularmente en la que dicho individuo es un ser humano. 10. Un procedimiento para matar o inhibir la proliferación o crecimiento de una célula tumoral, que comprende poner en contacto dicha célula tumoral con un compuesto de la reivindicación 1 o una sal del mismo, en el que dicha célula tumoral se expone a dicho compuesto o sal del mismo in vitro, particularmente en el que dicha célula tumoral es una célula maligna de un individuo. 11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que dicho individuo es un mamífero seleccionado del grupo que consiste en: mamíferos domésticos, roedores y seres humanos, particularmente en la que dicho individuo es un ser humano. 12. Un ingrediente activo (a) seleccionado de: un compuesto de la reivindicación 1, una sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, y un profármaco de la reivindicación 3; o (b) una composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, para usar en el tratamiento de un individuo que sufre un trastorno o enfermedad asociada con la actividad de una o más quinasas dependientes de ciclina seleccionadas de: CDK1, CDK2, CDK4, CDK7 and CDK9, particularmente en el que dicho trastorno o enfermedad es un cáncer. 13. El ingrediente activo o la composición farmacéutica de la reivindicación 12, en el que dicho trastorno o enfermedad está asociado con la actividad de CDK9. 32 E08760162 27-10-2011   14. El ingrediente activo o la composición farmacéutica de la reivindicación 12 o 13, en el que dicho individuo es un mamífero seleccionado del grupo que consiste en: mamíferos domésticos, roedores y seres humanos, particularmente en la que dicho individuo es un ser humano. 15. Uso de un ingrediente activo (a) seleccionado de: un compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, y un profármaco de la reivindicación 3, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un individuo que sufre un cáncer. 16. Un procedimiento de sintetizar un compuesto de la reivindicación 1 u, opcionalmente, una sal del mismo, que comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto que tiene una estructura representada por la fórmula (II) con el compuesto que tiene la estructura representada por la fórmula (III), en la que X se selecciona de O-alquilo, -O-alquenilo, -O-alquinilo, -O-acilo, y halógeno, particularmente en la que X es OEt y, opcionalmente, hacer reaccionar el compuesto resultante con un ácido para hacer una sal de ácido. 17. Un procedimiento de síntesis de una sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, que comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de la reivindicación 1 con un ácido, particularmente en el que el ácido es ácido clorhídrico o ácido maleico. 33 E08760162 27-10-2011   34 E08760162 27-10-2011   E08760162 27-10-2011   36 E08760162 27-10-2011   37 E08760162 27-10-2011   38 E08760162 27-10-2011   39 E08760162 27-10-2011   E08760162 27-10-2011   41 E08760162 27-10-2011   42 E08760162 27-10-2011   43 E08760162 27-10-2011