HOSM DE UNIÓN A INMUNOGLOBULINA.

La presente invención se refiere a inmunoglobulinas que se unen específicamente a la oncostatina M (OSM) y, en particular, a la OSM humana (hOMS). Más particularmente, la presente invención se refiere a anticuerpos que se unen específicamente a hOSM. La presente invención también se refiere a procedimientos de tratar enfermedades o trastornos con dichas inmunoglobulinas, a composiciones farmacéuticas que comprenden dichas inmunoglobulinas y a procedimientos de fabricación. Otros aspectos de la presente invención se harán evidentes a partir de la siguiente descripción. Antecedentes de la invención La oncostatina M es una glicoproteína de 28 kDa que pertenece a la familia de la interleucina 6 (IL-6) de las citocinas, que incluye IL-6, factor inhibidor de leucemia (LIF), factor neurotrófico ciliar (CNTF), cardiotrofina-1 (CT-1) y citocina de tipo cardiotrofina-1 (véase Kishimoto T y col. (1995) Blood 86: 1243-1254), que comparten el receptor de señalización transmembrana gp130 (véase Taga T y Kishimoto T (1997) Annu. Rev. Immunol. 15: 797-819). La OSM se descubrió inicialmente por su capacidad para inhibir el crecimiento de la línea celular de melanoma A375 (véase Malik N (1989) y col. Mol Cell Biol 9: 2847-2853). Posteriormente se descubrieron más efectos y se encontró que era un mediador multifuncional como otros miembros de la familia de la IL-6. La OSM se produce en diversos tipos celulares, incluidos macrófagos, linfocitos T activados (véase Zarling JM (1986) PNAS (USA) 83: 9739-9743), neutrófilos polimorfonucleares (véase Grenier A y col. (1999) Blood 93:1413-1421), eosinófilos (véase Tamura S y col. (2002) Dev. Dyn. 225: 327-31), células dendríticas (véase Suda T y col. (2002) Cytokine 17:335-340). En páncreas, riñones testículos, bazo, estómago y cerebro (Véase Znoyko I y col. (2005) Anat Rec A Discov Mol Cell Evol Biol 283: 182-186), y médula ósea (véase Psenak O y col. (2003) Acta Haematol 109: 68-75) Sus efectos bioilógicos principales incluyen activación del endotelio (véase Brown TJ y col. (1993) Blood 82: 33-7), activación de la respuesta de fase aguda (véase Benigni F y col. (1996) Blood 87: 1851-1854), inducción de proliferación o diferenciación celular, modulación de la liberación de mediadores inflamatorios y hematopoyesis (véase Tanaka M y col. (2003) 102: 3154-3162), remodelación ósea (véase de Hooge ASK (2002) Am J Pathol 160: 1733-1743) y estimulación de la angiogénesis (véase Vasse M y col. (1999) Arterioscler Thromb Vasc Biol 19:1835-1842) y cicatrización de heridas. Los receptores de la OSM (receptor ß de la OSM, "OSMRß") se expresan en un amplio abanico de células, incluidas células epiteliales, condrocitos, fibroblastos (véase Langdon C y col. (2003) J Immunol 170: 548-555), neuronas, células de músculo liso, ganglios linfáticos, huesos, corazón, intestino delgado, pulmones y riñones (véase Tamura S y col. (2002) Mech Dev 115: y células endoteliales vasculares. Varias pruebas sugieren que las células endoteliales son una diana principal de la OSM. Estas células expresan de 10 a 20 veces más los receptores tanto de alta como de baja afinidad y exhiben alteraciones profundas y prolongadas del fenotipo tras la estimulación con OSM (véase Modur V y col. (1997) J Clin Invest 100: 158-168). Además, la OSM es un factor de crecimiento autocrino fundamental para las células del sarcoma de Kaposi, que se piensa que tiene origen endotelial (véase Murakami- Mori K y col. (1995) J Clin Invest 96:1319-1327). En común con otras citocinas de la familia de la IL-6, la OSM se une a la glicoproteína de transducción de señal transmembrana gp130. Una característica clave de las citocinas gp130 es la formación de complejos del receptor oligomérico que comprenden gp130 y uno o más coreceptores en función del ligando (Revisado en Heinrich PC y col. (2003) Biochem J. 374: 1-20). Como resultado, estas citocinas pueden mediar en las actividades biológicas tanto compartidas como únicas, in vitro e in vivo, dependiendo de la composición del complejo receptor formado. La OSM humana (hOMS) difiere de las otras citocinas de IL-6 en que pueden formar complejos con gp130 y uno de los dos coreceptores, LIFR o el receptor de la oncostatina (OSMR). La figura 1 ilustra la interacción entre hOMS y gp130, LIFR y OSMR. La estructura de cristal de la hOMS se ha resuelto y se ha demostrado que comprende un haz de 4 hélices con dos potenciales sitios de glicosilación. Mediante mutagénesis dirigida a sitio se han identificado dos sitios de unión a ligando distintos sobre la molécula de hOMS (véase Deller MC y col. (2000) Structural Fold Des. 8:863-874). El primero, denominado Sitio II (en ocasiones sitio 2) interacciona con gp130, y el segundo sitio, denominado Sitio III (en ocasiones sitio 3) en el extremo opuesto de la molécula interacciona con LIFR u OSMR. Los experimentos de mutagénesis han demostrado que los sitios de unión para LIFR y OSMR son casi idénticos, pero que una mutación en un único aminoácido puede discriminar entre los dos. La OSM se sintetiza como proproteína que contiene una secuencia señal hidrófoba de 25 aminoácidos (AA) en el extremo N y un polipéptido de 33 AA en el extremo C, ambos se escinden para generar OSM madura. La proproteína OSM no tiene actividad biológica, pero esto aumenta significativamente con la escisión del propéptido en el extremo C (véase Bruce A.G. y col. (1992) Prog.Growth Factor Res. 4: 157-170, Malik N y col. (1989) Mol.Cell Biol. 9: 2847- 2853). La OSM se ha descrito como una molécula compacta con forma de barril con dimensiones de 2   aproximadamente 20Å x 27Å x 56Å. Hay cuatro regiones de hélice alfa (hélice A 10-37AA, hélice B 67-90AA, hélice C 105-131AA y hélice D 159-185AA, la numeración de AA comienza tras la eliminación de la secuencia señal). Las hélices A y C contienen pliegues. Las hélices se unen mediante dos bucles en alto (bucle AB 38-66AA, bucle CD A 130-158) y están dispuestos en forma de dos pares antiparalelos (A-D y B-C). (Véase, Deller M.C y col. (2000) Structure 8; 863-874). Parece que la unión de OSM mediante el Sitio II a gp130 permite la unión de otra molécula de OSM a gp130 mediante una interacción en el Sitio III. La OMS también se unirá a LIFR u OSMR mediante el Sitio III. Por tanto, la OSM forma un complejo con su receptor que consiste en una gp130, un LIFR u OSMR, y dos moléculas de OSM. (Véase Sporeno E (1994) J. Biol. Chem.269. 10991-10995, Staunton D y col. (1998) Prot. Engineer 11:1093-1102 y Gearing D.P (1992) Science 225:306-312). Usando mutagénesis los residuos importantes para la unión en el Sitio II de OSM-gp130 son Gln20, Gly120, Gln16 y Asn124. Para la unión de OSM-OSMR en el Sitio III, los residuos importantes son Phe160 y Lys163. La interacción en el Sitio II de OSM es, por tanto, dependiente de Gln20, Gly120, Asn124 y, en menor grado, de Gln16 en hOSM. Se han identificado tres residuos complementarios en gp130 (Phe169, Tyr196 y Glu282) de particular interés en la interacción entre OSM y gp130. (Véase, Deller M y col. (2000) Structure 8:863-874, Aasland D y col. (2002) J. Mol. Biol.315: 637-646, Timmermann A y col. (2000) FEBS Lett.468: 120-124). El documento WO99/48523 divulga antagonistas de la OSM y detalles de la producción de oncostatina M durante el embarazo por las células caducales que estimulan la liberación de HCG se puede encontrar en OGATA y col., Molecular human reproduction, AUG 2000, vol 6, nº 8, páginas 750-757. La secuencia de aminoácidos desde la posición 1 para hOMS se expone en la SEC ID Nº 13 Los residuos del sitio II de interés concreto se resaltan en negrita y subrayados. Un ADNc que codifica la hOMS se expone en la SEC ID Nº 14. 3   La artritis reumatoide (AR) comprende un síndrome de procesos patogénicos distintos pero interconectados. Éstos son: Inflamación local y sistémica, proliferación de células sinoviales, angiogénesis y depósito en la matriz que conducen a la formación de tejido de granulación, que invade y destruye el cartílago y el hueso, lo que da como resultado deformidad y discapacidad. Subyacente a esta patología está la liberación crónica de citocinas y mediadores inflamatorios de las células, que entran y residen en la articulación inflamada y de las células de tejido articular endógeno (Véase Firestein G (2003) en Rheumatology. Eds Hochberg, Silman, Smolen, Weinblatt y Weisman. Pub. Mosby. 855-884). Los acontecimientos iniciadores de la AR no se conocen, pero abundantes pruebas sugieren que implican la activación de linfocitos T por un antígeno extraño o "auto antígeno autólogo (véase Firestein G (2004) J Clin Invest 114: 471-4). La extensión a la cual se requiere que los linfocitos T mantengan los procesos de la enfermedad en curso una vez que se han iniciado también es incierta, aunque los agentes terapéuticos, tales como CTLA4Ig,... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une de forma específica a hOSM y comprende las siguientes CDR: CDRH1 de SEC ID Nº 1 CDRH2 de SEC ID Nº 2 CDRH3 de SEC ID Nº 3 CDRL1 de SEC ID Nº 4 CDRL2 de SEC ID Nº 5 CDRL3 de SEC ID Nº 6 2. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo modula la interacción entre OSM y gp130. 3. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, seleccionándose el anticuerpo del grupo constituido por intactos, quiméricos, humanizados, biespecíficos, heteroconjugados. 4. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, siendo el anticuerpo un anticuerpo intacto. 5. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 4, siendo el anticuerpo intacto murino, de rata, de conejo, de primate o de ser humano. 6. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5, siendo el anticuerpo intacto de ser humano. 7. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, siendo el anticuerpo quimérico o humanizado. 8. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 7, siendo el anticuerpo humanizado. 9. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 8, en el que los residuos en las posiciones 28, 29, 30, 71 y 94 de la región marco conservada de la cadena pesada variable aceptora humana y las posiciones 49 y 71 del marco conservada de la cadena ligera variable aceptora humana están sustituidos por los correspondientes residuos en el marco conservado del anticuerpo donante del que deriva la CDRH3. 10. El anticuerpo de la reivindicación 9, en el que la estructura de la cadena pesada humana comprende los residuos siguientes: Posición Residuos 28 S 29 L 30 T 71 K 94 K y la cadena ligera humana comprende los residuos siguientes: Posición Residuos 49 E 71 Y 72   11. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende un dominio VH de la SEC ID Nº 9 y un dominio VL de la SEC ID Nº 10. 12. El anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende una cadena pesada de la SEC ID Nº 11 y una cadena ligera de la SEC ID Nº 12. 13. Un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además una región constante de la cadena pesada humana seleccionada del grupo constituido por; IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgG1,IgG2,IgG3,IgG4, IgM. 14. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 13 en el que la región constante es de un isotipo IgG, por ejemplo IgG1 o IgG4. 15. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 14 en el que la región constante es IgG1: 16. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15 en el que la región constante está mutada para dar el anticuerpo no lítico. 17. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo modula la interacción entre el sitio II de hOSM y gp130. 18. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 17, inhibiendo dicho anticuerpo dicha interacción. 19. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 18, bloqueando dicho anticuerpo dicha interacción. 20. Un fragmento de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de reivindicaciones precedentes, seleccionando dicho fragmento del grupo constituido por Fab, Fab, Fd, F(ab)2, ScFv. 21. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de reivindicaciones precedentes. 22. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, para usar en el tratamiento de la artritis reumatoide y/o osteoartritis. 23. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, para usar en el tratamiento de la EPOC. 24. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, para usar en el tratamiento de la psoriasis. 25. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, para usar en el tratamiento de la aterosclerosis. 26. Uso un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 20 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide, osteoartritis, psoriasis, asma o EPOC. 27. Un vector (p. ej., plásmido) que codifica la cadena pesada y/o cadena ligera del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, comprendiendo dicho vector un polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 28 a 31. 28. Un polinucleótido que codifica el dominio V H de la SEC ID Nº 9, comprendiendo dicho polinucleótido la SEC ID Nº 17. 29. Un polinucleótido que codifica el dominio V L de la SEC ID Nº 10, comprendiendo dicho polinucleótido la SEC ID Nº 18. 30. Un polinucleótido que codifica la cadena pesada de la SEC ID Nº 11, comprendiendo dicho polinucleótido la SEC ID Nº 19. 31. Un polinucleótido que codifica la cadena ligera de la SEC ID Nº 12, comprendiendo dicho polinucleótido la SEC ID Nº 20. 32. Una célula huésped recombinante establemente transformada o transfectada que comprende el vector de la reivindicación 27. 33. Una célula huésped recombinante establemente transformada o transfectada que comprende un primer vector que comprende un polinucleótido de la SEC ID Nº 17 y un segundo vector que comprende un polinucleótido de la 73   SEC ID Nº 18. 34. Una célula huésped recombinante establemente transformada o transfectada que comprende un primer vector que comprende un polinucleótido de la SEC ID Nº 19 y un segundo vector que comprende un polinucleótido de la SEC ID Nº 20. 35. La célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 32 a 34, siendo dicha célula huésped una célula de vertebrado. 36. La célula huésped de la reivindicación 35, siendo dicha célula de mamífero.. 37. La célula huésped de la reivindicación 36, siendo dicha célula CHO o NSO. 38. Un procedimiento para fabricar un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende la etapa de cultivar una célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 32 a 34. 39. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, además de ser capaz de unirse a hOSM también es capaz de unirse a la OSM de macacos (cOSM). 74     76   77   78   79     81   82   83   84     86   87   88   89     91   92   93   94     96   97   98   99     101   102   103   104     106   107   108   109     111