DIPÉPTIDOS DE LA PSEUDOPROLINA.

Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula: en donde R 1 es una cadena lateral de un alpha amino-ácido,

R 2 es un grupo amino protector, y R 3 y R 4 están seleccionados independientemente entre sí, del grupo formado por hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R 5 es hidrógeno o metilo, el cual comprende a) la conversión de un derivado de aminoácido de fórmula en donde R 1 y R 2 son como se ha indicado más arriba, con serina o treonina, y cristalizando el dipéptido resultante como sal de amonio de fórmula en donde R 1 , R 2 y R 5 son como se ha indicado más arriba, y R 6 , R 7 y R 8 son independientemente entre sí, seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que no todos los R 6 , R 7 y R 8 sean hidrógeno, en un paso subsiguiente, b) liberando el ácido libre de la sal de amonio de fórmula III en presencia de un ácido y eliminando la amina por extracción, y c) efectuando el cierre del anillo con un compuesto seleccionado entre en donde R 3 y R 4 se seleccionan, independientemente entre sí, del grupo formado por hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con la condición de que ambos R 3 y R 4 no sean hidrógeno, R 9a y R 9b son, independientemente entre sí, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R 10 tiene el significado de alquilo de 1 al 4 átomos de carbono, alcanoilo de 1 a 4 átomos de carbono, o arilo, y R 11 es hidrógeno o alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, en presencia de un catalizador ácido

Dipeptidos de la pseudoprolina La invención se refiere a un nuevo procedimiento para la fabricación de un compuesto de fórmula

**(Ver fórmula)**

10 Los dipéptidos de la pseudo prolina de fórmula I pueden emplearse como grupos reversibles de protección para Ser, Thr y Cys, confirmando que son herramientas versátiles para solventar algunos problemas intrínsecos en el campo de la química de los péptidos [JACS 1996, 118, 9218-9227]. La presencia de la ΨPro dentro de una secuencia de un péptido da como resultado la disolución de las estructuras de hojas β consideradas como una fuente de agregación intermolecular. La mayor solvatación resultante y el acoplamiento de los cinéticos en el conjunto de péptidos como por ejemplo la síntesis de péptidos en fase sólida Fmoc, facilitan el alargamiento de la cadena especialmente en los péptidos que contienen "secuencias difíciles".

El objeto de la presente invención es el de proporcionar una síntesis breve y técnicamente viable de los dipéptidos de la pseudo prolina de forma I, la cual permite la obtención del producto con un alto rendimiento y sin ningún paso de purificación cromatográfica.

El objetivo se ha conseguido con el procedimiento como se indica más adelante. El procedimiento para la fabricación de un compuesto de fórmula

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30 en donde R1 es una cadena lateral de un alpha amino-ácido, R2 es un grupo amino protector, y R3 y R4 están seleccionados independientemente entre sí, entre el grupo formado por hidrógeno, alquilo de 1 a 9 átomos de carbono, R5 es hidrógeno o metilo, comprende

a) la conversión de un derivado de aminoácido de fórmula

**(Ver fórmula)**

en donde R1 y R2 son como se ha indicado más arriba, con serina o treonina, y cristalizando el dipéptido resultante como sal de amonio de fórmula

**(Ver fórmula)**

en donde R1, R2 y R5 son como se ha indicado más arriba, y R6, R7 y R8 están independientemente entre sí, seleccionados entre el grupo formado por hidrógeno, alquilo 5 de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que no todos los R6, R7 y R8 sean hidrógeno, en un paso subsiguiente,

b) liberando el ácido libre de la sal de amonio de fórmula III en presencia de un ácido y eliminando la amina por extracción, y

c) efectuando el cierre del anillo con un compuesto seleccionado entre

**(Ver fórmula)**

15 en donde R1 y R4 se seleccionan, independientemente entre sí, entre el grupo formado por hidrógeno o alquilo de 1 al 4 átomos de carbono, con la condición de que ambos R3 y R4 no sean hidrógeno, R9a y R9b son, independientemente entre sí, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R10 tiene el significado de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcanoilo de 1 a 4 átomos de carbono, o arilo, y R11 es hidrógeno o alquilo de 1 a

20 3 átomos de carbono, en presencia de un catalizador ácido.

Se comprende además que la serina o treonina pueden emplearse, bien en su configuración L ó bien en su configuración D, como racemato, o en mezclas varias de sus isómeros. De preferencia se emplea la configuración L. El término "alquilo de 1 a 4 átomos de carbono", se refiere a un radical hidrocarburo alifático saturado monovalente de cadena ramificada o lineal, de uno a cuatro átomos de carbono. Ejemplos de este término son los radicales metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, s-butilo, y t-butilo.

El término "cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono" se refiere a un grupo cicloalquilo que contiene de 3 a 7 átomos 30 de carbono, como por ejemplo el ciclopropilo, el ciclobutilo, el ciclopentilo, el ciclohexilo o el cicloheptilo.

El término "arilo" se refiere a un grupo fenilo o naftilo, de preferencia el grupo fenilo, el cual puede opcionalmente ser mono o múltiple substituido con halógeno, hidroxilo, CN, CF3, NO2, NH2, N(H,alquilo), N(alquilo)2, carboxilo, aminocarbonilo, alquilo, alcoxilo, arilo y/o ariloxilo. De preferencia, el grupo arilo es fenilo.

35 El término "alcanoilo" se refiere a un grupo alquilo carbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, como por ejemplo el acetilo, el n-propanoilo, el isopropanoilo, el n-butanoilo, el s-butanoilo y el t-butanoilo, de preferencia el acetilo.

El término "cadena lateral de un aminoácido" empleado para el R1, se refiere particularmente a cadenas laterales de

40 alpha aminoácidos, seleccionados del grupo formado por valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina, asparagina, glutamina, ácido glutámico, histidina, lisina, arnina, ácido aspártico, alanina, serina, treonina, tirosina, triptófano, cisteína, glisina y ácido aminoisobutírico.

Se comprende que en las cadenas laterales de los amino-ácidos que llevan un grupo hidroxilo, este grupo hidroxilo

45 esté opcionalmente protegido por un grupo hidroxiprotector como se define más adelante. En las cadenas laterales que llevan grupos amino adicionales, el grupo amino está opcionalmente protegido por un grupo aminoprotector como se define más adelante.

R1 está de preferencia como cadena lateral de la valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, asparagina, glutamina, ácido glutámico, lisina, ácido aspártico, alanina, serina, treonina, tirosina y triptófano. Los más preferidos son la serina y la treonina.

El término "grupo amino protector" se refiere a cualquier substituyente convencionalmente empleado para inhibir la reactividad del grupo amino. Grupos amino protectores adecuados están descritos por Green T., en "Protective Groups in Organic Synthesis" ("Grupos protectores en síntesis orgánica"), capítulo 7, John Wiley e hijos, Inc., 1991, 309-385. Grupos amino protectores adecuados son por ejemplo, el Fmoc, Cbz, Moz, Boc, Troc, Teoc ó Voc. El grupo amino protector preferido es el Fmoc. El término "grupo hidroxilo protector" se refiere a cualquier substituyente convencionalmente empleado para inhibir la reactividad del grupo hidroxilo. Grupos protectores de hidroxilo adecuados están descritos por Green T., "Protective Groups in Organic Synthesis" ("Grupos protectores en síntesis orgánica"), capítulo 1, John Wiley e hijos, Inc., 1991, 10-142. Grupos hidroxilo protectores adecuados son por ejemplo el t-butilo, el bencilo, el TBDMS ó el TBDPS. El grupo hidroxilo protector preferido es el t-butilo.

15 El significado de las abreviaciones empleadas en la descripción y en las reivindicaciones es como se indica en la tabla siguiente:

20 Paso a) En el primer paso a), un derivado de aminoácido de fórmula en donde R1 y R2 son como se ha indicado más arriba, se hace reaccionar con serina o treonina, y el dipéptido resultante se cristaliza como sal de amonio, de fórmula

**(Ver fórmula)**

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en donde R1, R2, R5, R6, R7 y R8 son como se ha indicado más arriba.

Los derivados de aminoácido de fórmula II son compuestos que se encuentran por regla general comercialmente 5 disponibles. Derivados de aminoácido adecuados de fórmula II de acuerdo con las preferencias dadas para R1 y R2 son el Fmoc-L-Ser(tBu)-OH, ó el Fmoc-L-Thr(tBu)-OH.

Antes de la copulación con la serina o treonina, el derivado de aminoácido de fórmula II se activa convenientemente con un reactivo activador.

10 Reactivos activadores adecuados pueden seleccionarse del grupo formado por el DIC/HOSu, DIC/pentafluorfenol, DIC/HOBt, DCC/HOSu, DCC/pentafluorfenol, DCC/HOBt, EDC(xHCl)/HOSu ó HBTU/HOBt. El agente de copulación preferido es el DIC/HOSu. El DIC se emplea habitualmente en una cantidad de 1,0 a 1,4 equivalentes y el HOSu se emplea habitualmente en una cantidad de 1,0 a 1,8 equivalentes referidos a un equivalente del derivado de aminoácido de fórmula I.

Por regla general,... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

10 en donde R1 es una cadena lateral de un alpha amino-ácido, R2 es un grupo amino protector, y R3 y R4 están seleccionados independientemente entre sí, del grupo formado por hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R5 es hidrógeno o metilo, el cual comprende

a) la conversión de un derivado de aminoácido de fórmula

**(Ver fórmula)**

en donde R1 y R2 son como se ha indicado más arriba, con serina o treonina, y cristalizando el dipéptido resultante como sal de amonio de fórmula

**(Ver fórmula)**

en donde R1, R2 y R5 son como se ha indicado más arriba, y R6, R7 y R8 son independientemente entre sí, seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que no todos los R6, R7 y R8 sean hidrógeno, en un paso subsiguiente, b) liberando el ácido libre de la sal de amonio de fórmula III en presencia de un ácido y eliminando la amina por extracción, y c) efectuando el cierre del anillo con un compuesto seleccionado entre

**(Ver fórmula)**

30 en donde R3 y R4 se seleccionan, independientemente entre sí, del grupo formado por hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con la condición de que ambos R3 y R4 no sean hidrógeno, R9a y R9b son, independientemente entre sí, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R10 tiene el significado de alquilo de 1 al 4 átomos de carbono, alcanoilo de 1 a 4 átomos de carbono, o arilo, y R11 es hidrógeno o alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, en presencia de un catalizador ácido.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, caracterizado porque, R1 es una cadena lateral seleccionada entre el grupo formado por valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina, asparagina, glutamina, ácido glutámico, histidina, lisina, arginina, ácido aspártico, alanina, serina, treonina, tirosina, triptófano, cisteína, glicina y ácido

5 aminoisobutírico.

3. Procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque, R2 está seleccionado entre el grupo formado por Fmoc, Cbz, Moz, Boc, Troc, Teoc y de Voc.

4. Procedimiento de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque, el derivado de aminoácido de fórmula II se activa antes de su copulación con serina o treonina con un reactivo activador.

5. Procedimiento de la reivindicación 4, caracterizado porque, el reactivo activador está seleccionado del grupo

formado por DIC/HOSu, DIC/pentafluorfenol, DIC/HOBt, DCC/ HOSu, DCC/pentafluorfenol, DCC/HOBt, 15 EDC(xHCl)/HOSu ó HBTU/ HOBt.

6. Procedimiento de las reivindicaciones 4 y 5, caracterizado porque, el reactivo activador es el DIC/HOSu.

7. Procedimiento de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque, la relación entre la serina o la treonina y el 20 derivado de aminoácido de fórmula I, se selecciona en el margen de 1,5 a 3,0 a 1.

8. Procedimiento de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque, la sal de amonio de fórmula III se forma por adición al dipéptido de una amina de fórmula

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en donde R6, R7 y R8 son independientemente entre sí, seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que no todos los R6, 30 R7 y R8 sean hidrógeno.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, caracterizado porque, R6, R7 y R8 son independientemente entre sí, seleccionados del grupo formado por hidrógeno, etilo o ciclohexilo, con la condición de que no todos los R6, R7 y R8 sean hidrógeno.

10. Procedimiento de las reivindicaciones 8 a 9, caracterizado porque, se añade diciclohexilamina.

11. Procedimiento de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque, la cristalización tiene lugar en un

disolvente orgánico seleccionado entre el grupo formado por metanol, etanol, n-propanol, i-propanol, acetato de 40 etilo o tetrahidrofurano.

12. Procedimiento de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque, el ácido libre de la sal de amonio de fórmula III, se libera en presencia de un ácido mineral, se extrae con un disolvente orgánico, mientras que la amina se elimina por extracción con agua y/o una solución acuosa de una sal mineral.

13. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque, el cierre del anillo se efectúa con 2,2dimetoxipropano, 2-metoxipropeno, ó 2-acetoxipropeno.

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14. El procedimiento de la reivindicación 13, caracterizado porque, el cierre del anillo tiene lugar con el 2,2-di50 metoxipropano.

15. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque, el catalizador ácido para el cierre del anillo se selecciona entre el grupo formado por el ácido metansulfónico, el ácido (+)alcanfor-10-sulfónico, el ácido p-toluensulfónico, el p-toluensulfonato de piridinio.

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16. El procedimiento de las reivindicaciones 1 y 13 a 15, caracterizado porque, el cierre del anillo se efectúa en presencia de un disolvente orgánico.